鸡外周血T淋巴细胞分群及免疫相关基因表达分析

为探索鸡抗病育种中简便实用的免疫功能测定指标,试验采用成像流式细胞术对四川山地乌骨鸡和大恒699肉鸡配套系的4周龄和10周龄外周血进行T淋巴细胞亚群分型,并检测外周血中白介素6(IL-6)、Toll样受体3(TLR3)和干扰素(IFN-γ)基因的表达水平。结果显示：10周龄时,CD₄⁺T淋巴细胞亚群在两鸡种间差异显著(P<0.05),4周龄和10周龄的两鸡种CD₈⁺T淋巴细胞亚群均有极显著差异(P<0.01);CD₄⁺/CD₈⁺比值在0.7～1.6之间呈正态分布,且随周龄增加而降低;大恒699肉鸡配套系的CD₄⁺/CD₈⁺比值比四川山地乌骨鸡高;IL-6和IFN-γ表达量随周龄增加而增加,但TLR3相反。细胞因子的增多和CD₄⁺/CD₈^+<...     

左旋咪唑对犬外周血T淋巴细胞转化的影响

左族咪唑又名左咪唑、左旋四咪唑，是人工合成的广谱驱虫药。本品具有旋光性，为噻咪唑左旋异构体，常用其盐酸盐(盐酸左旋咪唑)，为白色或微带黄色晶粉，性质稳定，易溶于水(25C：62．7％)，酸性水溶液中稳定。本品对体内多种寄生虫如蛔虫、肺丝虫、钩虫等具有强大的驱杀作用，并且给药方便，可皮下     

牛Th1/Th2型细胞因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank中牛Th1/Th2(BoTNF-α、BoIFN-γ、BoIL-2、BoIL-4、BoIL-6、BoIL-8、BoIL-10)型细胞因子的基因序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以牛3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料以建立实时荧光定量PCR检测方法。将Th1/Th2型细胞因子基因克隆至pMD18-T载体上,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR-GreenⅠ荧光定量RT-PCR标准曲线和溶解曲线,并做灵敏性、特异性和重复性试验。对建立的Th1/Th2型细胞因子SYBR-GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR方法进行分析,结果表明牛IFN-α、IFN-β、IFN-γ和GAPDH基因的Ct值与标准品稀释度在1×101～1×108 copies/μL范围分别呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。溶解曲线分析表明产物为特异的单峰,具有较高的灵敏性和特异性,重复性较好。建立了检测Th1/Th2型细胞因子的实时荧光定量RT-PCR方法,为在mR-NA水平对牛Th1/Th2型细胞因子的定量分析奠定了基础。     

猪瘟免疫猪接种PRRSV Nsp2Δ1882-2241弱毒疫苗后免疫应答及T细胞表型变化特征

选择17头28日龄的CSFV和PRRSV抗体均为阴性的仔猪,于试验的第1天和第14天分别对其进行猪瘟耐热保护剂活疫苗（兔源）和高致病性猪繁殖与呼吸综合征Nsp2A1882—2241弱毒疫苗免疫。在免疫后的第28、42天采集外周血液,分析特异性抗体表达量和外周血T淋巴细胞表型的变化,评估猪瘟免疫对猪繁殖与呼吸综合征免疫的影响。结果显示,在CSF免疫后第28、42天,CSFV高抗组中的CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋、CD4^＋CD8^＋和CD4-CD8数目均比CSFV低抗组高,CD3^＋和CD8^＋细胞数量比CSFV低抗组低;PRRS高抗组中,CD4CD8-细胞含量高于PRRS低抗组;在CSF免疫后第28天,CSFV抗体产生较高（阳性比率为73．33％）,PRRSV抗体产生较低（阳性比率仅为6．67％）。在CSF免疫后的第42天,CSF高抗组中PRRSV抗体阳性比率较CSF低抗组高8．33％。结果表明,CSFV特异性抗体产生高时能增加PRRSV特异性细胞免疫应答,增加CD4^＋细胞、CD4^＋CD8^＋细胞数量,提高机体免疫水平。CD3＋和CD4CD8-细胞应答作用值得重视。     

暹罗鳄外周血白细胞提取物抗海豚链球菌感染的效果

通过细胞破碎和沉淀的方法从暹罗鳄(Crocodylus siamensis)外周血白细胞中获得提取物,并将此提取物以3种不同的方式注射小鼠,测定其在小鼠体内抗御海豚链球菌感染的效果。实验结果表明,若用海豚链球菌以腹腔注射感染小鼠,小鼠表现出明显病理症状,然后用不同浓度(2.2×103、2.2×102、2.2×101μg/ml)的提取物以腹腔注射小鼠,可使小鼠分别获得77.8％、55.6％、44.4％的相对保护率;若将海豚链球菌与不同浓度(2.2×103、2.2×102、2.2×101μg/ml)的提取物在体外等体积混合,然后将混合物以腹腔注射小鼠,可使小鼠分别获得55.6％、88.9％、77.8％的相对保护率;若将海豚链球菌以肌肉注射小鼠左腿,同时以不同浓度(2.2×103、2.2×102、2.2×101μg/ml)的提取物以肌肉注射小鼠右腿,可使小鼠分别获得77.8％、66.7％、44.4％的相对保护率。本实验的结论是：暹罗鳄外周血白细胞内存在一种或数种高效的抗菌物质,在小鼠体内能有效的防御由某些细菌导致的感染。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪外周血CD4、CD8分子动态变化研究

研究利用流式细胞仪对猪感染猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）后不同时期的CD4和CD8分子动态变化进行分析。结果表明：猪感染PRRSV后的第3天,CD4^＋和CD8^＋的数量开始急剧下降,在第12天达到最低水平;以后逐渐升高,CD4^＋的数量到第26天赶上并超过感染前的水平,在第33天又有所下降;而CD8^＋的数量在第19天就升高到感染前的水平。     

囊素对猪外周血单个核细胞的免疫刺激活性研究

囊素是存在于禽腔上囊中能诱导B细胞分化的活性肽类物质,其化学组成为三肽Lys-His-Gly-NH2。本试验探讨了猪外周血单个核细胞的分离培养条件,并研究了人工合成的囊素对体外培养的猪外周血单个核细胞（PBMC）的免疫刺激活性。采用猪PBMC体外增殖实验,3H-脱氧胸苷（3H-TdR）掺入法测定刺激指数（SI）。结果表明,用猪淋巴细胞分离液（1.110g/cm3）在1500r/min、30min条件下细胞得率及细胞活力最高,分别为7.26×107、91.5%。体外培养的PBMC经不同浓度的囊素刺激24h后,细胞体积明显增大、数目增多,在同一视野中细胞聚集成团的数目明显增多。4μg囊素/孔与8μg囊素/孔组每分钟脉冲数（cpm值）分别达821.60±6.90和916.70±9.25,刺激指数（SI值）分别达4.32±0.12、4.83±0.15,表明囊素对体外培养的猪PBMC具有明显的免疫刺激活性,且在一定浓度范围内囊素对猪PBMC的免疫刺激活性有剂量依赖关系。     

不同重悬细胞法在洗涤过程中对水牛外周血单个核细胞活率的影响

为了探讨在离心洗涤水牛外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）过程中以移液器吹打法和晃动离心管法重悬细胞对其活率的影响。对经密度梯度离心后初步收集到的PBMC,分别用移液器吹打和晃动离心管2种方法重悬细胞,离心洗涤后对细胞活率进行计数。结果发现,移液器吹打法得到的细胞活率为（74.9±2.6）%,而晃动离心管法使细胞活率达到（98.5±0.5）%,差异极显著（P<0.01）。说明在洗涤PBMC时,晃动离心管法重悬细胞能大大提高细胞活率,可为那些对细胞活率要求高的试验提供一个较为有效的方法。     

暹罗鳄外周血白细胞提取物抗菌活性的初步研究

用离心和细胞破碎沉淀法提取暹罗鳄外周血白细胞的抗菌活性物质,测定其对10种细菌的体外抗菌活性。结果表明：暹罗鳄外周血白细胞提取物对埃希氏大肠杆菌、海豚链球菌、多杀性巴斯德菌、温和气单胞菌、金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌10种细菌均有一定的抗菌效力;其中,对海豚链球菌的抗菌效力最强,抑菌圈达22．1mm;对大肠杆菌的抗菌效力次之,抑菌圈达21．7mm;对霍乱弧菌的抗菌效力较弱,抑菌圈为7mm。实验还测定了理化因子对暹罗鳄外周血白细胞提取物抗菌活性的影响,发现其具有酸溶性、EDTA敏感性和热稳定性等特点。据此特点,初步确定暹罗鳄外周血白细胞中所含的抗菌活性物质是抗菌肽。比较了暹罗鳄外周血白细胞和密西西比红耳龟、花田鸡外周血白细胞提取物的抗菌效力的强弱,发现前者对于实验所用10种细菌的抗菌效力明显强于后两者;其中,对链球菌的抗菌效力,暹罗鳄外周血白细胞提取物最强,抑菌圈达21．3mm,密西西比红耳龟外周血白细胞提取物次之,抑菌圈为5．3mm,花田鸡白细胞提取物最弱,抑菌圈为0．67mm。说明暹罗鳄外周血白细胞中存在一种或数种具有广谱、高效的抗菌活性物质。