莱姆病螺旋体感染对蜱的4个功能基因的转录影响

为探索蜱及蜱传病的防控新策略,了解病原与媒介硬蜱相互作用的分子机制,本研究以莱姆病病原伯氏疏螺旋体感染后对长角血蜱4个功能基因的转录影响进行了研究。将不同浓度梯度的伯氏疏螺旋体显微注射到长角血蜱体内,分不同的时间段提取蜱的总RNA,反转录成cDNA后,用实时荧光定量PCR检测蜱基因的表达水平。结果显示:伯氏疏螺旋体感染对蜱半胱氨酸蛋白酶抑制剂1(HLcyst-1)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂3(HLcyst-3)、卵泡抑素(FRP)、凝血酶抑制剂(Hemalin)4个功能基因的转录均产生了显著影响,但存在时间和剂量相关性,感染后第4天显著诱导了长角血蜱HLcyst-1基因的表达,抑制了Hemalin基因表达。     

J亚群禽白血病SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种能够快速、灵敏和特异地检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法,本研究以ALV-J原型病毒株HPRS-103的pol基因3′端与gp85编码基因之间的保守区域(5 258 bp～5 802 bp)为检测目的片段,构建重组质粒并作为靶基因,通过对其浓度、引物浓度和退火温度的优化,建立了ALV-J SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法.结果显示该方法的最低检测限度为2.36×102拷贝/μL,比普通PCR高100倍;与其他禽源病毒无交叉反应;批内和批间变异系数均小于5％.表明本研究建立的方法具有良好的特异性、稳定性和灵敏性.采用该方法对100只临床病鸡进行检测,ALV的检出率为44％.随机选择10只感染阳性鸡,检测病毒基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的分布与表达水平,结果表明ALV-J在各主要脏器中均有分布,但以肾脏中的病毒表达量最高.     

蒙古马免疫组织NF-κB信号通路相关基因的表达研究

为丰富蒙古马NF-κB信号通路的研究内容,为蒙古马机体固有免疫调控的研究奠定理论基础,本研究采用实时荧光定量PCR和Western Blot方法,分析蒙古马肝脏、脾脏、肺脏和血液组织中NF-κB信号通路上7个基因的表达情况.结果表明,7个基因在4个组织中均有表达,但存在差异.NF-κB p50、IL-1β和NFKBIA...     

猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区在大肠杆菌中的表达

采用PCR技术扩增出猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区并克隆于PGEM-T easy载体上，测序结果表明插入的为猪瘟病毒E2基因抗原结构域，切出目的基因，将目的基因克隆到表达质粒pProEX—HTb中，获得重组质粒经PCR、酶切和序列分析鉴定E2基因抗原结构域插入的位置、大小和读码框均正确，SDS—PAGE检测表明受体菌经IPTG诱导后能表达E2基因抗原结构域蛋白，Westernblot检测表明受体菌诱导表达E2基因抗原结构域蛋白可与猪瘟阳性血清发生特异性反应。     

转基因小鼠后代乳汁中外源基因的表达

运用传统育种方法，用整合有人凝血因子Ⅸ(hFⅨ）的转基因小鼠交和远交。通过选育，在其后代中出现4只双重杂合子（3♀，1♂）及2只纯合子小鼠（2♀）。收集雌鼠乳汁，用ELISA测定其中hFⅨ蛋白含量。结果表明，相对于单纯杂合子小鼠，纯合子小鼠的表达量无增高（P＞0．05），而双重杂合子小鼠的表达量有显著提高（P＜0．01）。结果提示 ，选育双重杂合子转基因后代小鼠，是一条提高转基因动物外源基因表达水平的有效途径。     

不同蛋白质水平日粮对肥育猪肠道氨基酸转运载体CAT1 mRNA表达量的影响

本试验旨在研究不同蛋白质水平日粮对肥育猪肠道氨基酸转运载体CAT1 mRNA表达量的影响.选取36头杜×长×大二三元杂交阉公猪,平均体重(55.6±7.0)kg,随机分为3个处理,分别饲喂13%(低蛋白质组)、16%(对照组)和19%(高蛋白质组)的蛋白质水平日粮,每个处理12个重复(单栏饲养).于饲喂后第45天,每组随机屠宰5头,分离肠道(十二指肠、空肠和回肠),运用Real-Time PCR技术,以β-actin为内参基因,研究CAT1 mRNA相对于β-actin的表达量.结果表明,在饲喂高蛋白质日粮时,与对照组相比,氨基酸转运载体CAT1 mRNA相对于内参β-actin mRNA的表达量,在肥育猪十二指肠、空肠和回肠中分别提高了58.4%、23.2%和24.5%,但差异不显著(P>0.05);而饲喂低蛋白质日粮时,CAT1 mRNA相对表达量在肥育猪十二指肠和空肠中则分别提高93.1%和122.6%,差异显著(P<0.05),而在回肠中降低了14.3%,差异不显著(P>0.05).高蛋白质水平日粮对肥育猪肠道CAT1 mRNA相对表达最的影响不大,而低蛋白质水平日粮对肥育猪肠道CAT1 mRNA相对表达量的影响较大,尤其是对空肠CAT1 mRNA的相对表达量.     

基因芯片的应用

基因芯片技术是最近几年在国际上迅猛发展起来的一门高新技术，是生物技术与芯片技术相结合的产物。本文就基因芯片的应用作了简要的介绍。     

鸡溶菌酶基因3＇端MAR在同源细胞系对基因表达调控的研究

用带有鸡溶菌酶基因增强子（Ｅ）和启动子（Ｐ）的编码细菌氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）的融合基因（ＥＰＣ），在其上游区、下游区或在上游和下游区同时插入鸡溶菌酶基因３＇端核基质附着区（ＭＡＲ）的不同表达载体ＭＥＰＣ、ＥＰＣＭ和ＭＥＰＣＭ，稳定转染鸡ＨＤ１１Ｐｒｏｍａｃｒｏｐｈａｇｅ同源细胞系，筛选不同表达载体稳定整合后的细胞株，检测ＣＡＴ表达水平，确定其表达基因拷贝数，从而分析鸡溶菌酶基因３＇端ＭＡＲ对基因表达的影响。稳定整合表达和瞬时表达实验结果表明，鸡溶菌酶基因３＇端ＭＡＲ在同源细胞系对基因表达没有激活作用，与该基因５＇端ＭＡＲ在同源或异源细胞系中能激活基因表达形成鲜明对照，说明５＇瑞ＭＡＲ和３＇端ＭＡＲ在调节鸡溶菌酶基因表达上存在一种协调关系。     

绵羊肺炎支原体感染对贵州不同品种山羊肺脏和血液Toll样受体基因转录水平的影响

绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)可引起山羊、绵羊发生支原体性肺炎,分析绵羊肺炎支原体感染对贵州不同品种山羊Toll样受体(TLRs)基因转录水平的影响。应用TaqMan RT-qPCR对Mo人工感染的贵州黑山羊、贵州白山羊、黔北麻羊和波尔山羊的肺脏和血液样本TLRs基因转录水平进行定量检测与分析。结果显示,不同品种山羊感染Mo后,肺脏样本中贵州黑山羊和贵州白山羊TLR1/2/4/6/8/9/10基因、黔北麻羊和波尔山羊TLR4/6/7/8/10基因转录水平均极显著上调(P<0.01),血液样本中贵州黑山羊TLR2/4/6/7/8/9基因、贵州白山羊TLR2/4/6/7/8基因、黔北麻羊TLR4/6/7/8/9基因、波尔山羊TLR4/6/8/10基因转录水平均极显著上调(P<0.01);且发现不同品种山羊间TLRs基因的转录水平也存在显著差异,最先出现死亡的贵州白山羊、贵州黑山羊肺脏样本中TLR1/6/8/10基因转录水平上调倍数显著高于其余品种山羊(P<0.05),而TLR2/4/5/7/9基因转录水平上调倍数显著低于黔北麻羊和...     

ABA、H_2O_2与NO供体硝普钠对基因表达以及枣果发育的影响

枣在成熟期间遇到连阴雨天气会发生严重的裂果现象,这种基于基因表达的生理病害的发生与非生物或生物胁迫有关。以吕梁当地木枣为试材,在木枣成熟期,采用改良CTAB法检测组织中DNA纯度及含量的变化,研究ABA、H2O2与NO供体硝普钠(SNP)在枣果发育中对基因表达的影响。结果表明:ABA、H2O2与NO供体硝普纳(SNP)对枣果发育中DNA纯度及含量的影响不一,差异较为明显。其中不同浓度的ABA处理枣果组织中DNA的OD260/OD280比值基本不在1.700~1.900范围内,DNA纯度差异明显。但样品DNA含量较高,其值在1 200ng/μL左右;H2O2和SNP处理样品DNA的OD260/OD280比值基本上在1.700~1.900之间,DNA纯度较高。样品DNA含量基本上小于或在1 000ng/μL左右。外源ABA较为明显地干扰了基因表达,诱导了新蛋白质、RNA和酚类物质等的生物合成,有促进木枣果发育的趋势;而H2O2和NO供体硝普钠(SNP)对基因表达或枣果发育的影响不十分明显。