亲环素基因在烟草不同器官及叶片不同发育时期的表达规律研究

通过对烟草中3个亲环素家族基因（CyPl、CyP2、CyP40）表达模式的研究,结果显示：在不同发育时期中,CyPI在烟草移栽后40、50、60d时表达量较高,CyP2则是在移栽后30、40、60d表达量较高,而CyP40只在移栽后60d表达量较高。在不同组织部位及器官的表达中,3个亲环素家族基因在中部叶和下部叶中表达均较强。在烟草根中主要表达CyPl和CyP40基因,CyP40还在花中表达较高,而CyP2基因的主要表达器官为叶片。     

多子小瓜虫HSP70基因ORF的克隆及表达分析

热激蛋白(HSP)是生物适应环境温度变化的重要媒介分子,本试验中克隆了多子小瓜虫Ichthyophthirius multifiliis HSP70(Im HSP70)基因的ORF,采用荧光定量RT-PCR法,在水温为20、25、30℃的条件下检测了HSP70基因在多子小瓜虫幼虫、滋养体和包囊3个不同发育阶段的表达情况。结果表明:Im HSP70基因的ORF为1995 bp,预测编码为664 aa;Im HSP70蛋白的二级结构主要以α-螺旋和无规卷曲为主,空间构型包括N端ATPase功能域和C端多肽结合功能域;与其他物种HSP70蛋白序列进行同源性比较发现,Im HSP70与螅状独缩虫Carchesium polypinum HSP70的同源性最高,为78.08%;Im HSP70与分类地位同为纤毛门的螅状独缩虫、嗜热四膜虫Tetrahymena thermophila、变藓棘毛虫Sterkiella histriomuscorum的HSP70聚在一个分支;3种温度下幼虫的HSP70表达量均最低,20℃和25℃时,HSP70基因在滋养体中的表达量显著高于幼虫和包囊(P<0.05),而30℃时,HSP70基因在包囊中的表达量显著高于滋养体和幼虫(P<0.05);30℃时HSP70基因在包囊中的表达量显著高于25℃(P<0.05)。研究表明,试验所用多子小瓜虫的HSP70基因在30℃时仍大量表达,且能感染试验鱼,推测该虫株为热带型多子小瓜虫,HSP70基因在多子小瓜虫对抗外界高温环境中可能发挥着重要的作用。     

血红素氧合酶-2基因真核表达载体的构建

为构建血红素氧合酶-2（HO-2）真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况。试验利用PCR技术从C57BL/6小鼠海马组织中扩增出HO-2基因cDNA序列,用双酶切法将此序列克隆到真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP上,构建HO-2的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,重组载体经EcoRI和BamHI双酶切和测序鉴定。电穿孔法转染小鼠脑血管内皮细胞,48h后,实时定量PCR、Western blot检测HO-2在小鼠脑血管内皮细胞中mRNA和蛋白质水平的表达情况。结果表明,pEF1α-HO-2-AcGFP载体构建正确;重组载体转染小鼠脑血管内皮细胞后HO-2在mRNA水平表达量较空载体转染极显著增高（P〈0.01）,在蛋白水平表达量较空载体转染显著增高（P〈0.05）。表明HO-2基因的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP构建成功,为进一步研究其机制和功能奠定了基础。     

猪生物医学模型的基因组学研究进展

本综述对猪生物医学模型的多样性和基因组学在这些模型持续开发中的重要性作了一个简要的更新。由于猪在体型大小、生理条件、器官发育和疾病发展等方面与人类相似,因而已作为一种重要的哺乳动物医学模型为人类所用。将猪作为人类医学模型,可以使研究人员从容不迫地安排研究时间,并可利用普通的人类医学技术对机体内部的血管和器官进行成像处理,且可以采集重复的外周样本,并且在扑杀后可采集复杂的粘膜组织样本。以猪为医学模型,能够利用同窝的猪或克隆猪和转基因猪,因而使比较分析和遗传作图更为容易。以猪作为人类医学的动物模型可获得大量代表各种组织的分化方向明确的细胞系,从而可更加有利于基因表达和药物敏感性的检测。因此,对人而言,猪是一种出色的生物医学模型。由于猪在基因序列和染色体结构上与人类高度同源,因而对基因组应用而言,其不失为一个宝贵的资源。由于目前猪基因组序列已被人类充分掌握,因而有改良型遗传学方法和蛋白质组学方法可供这些比较分析方法所利用。本综述将论述用于探测这些模型的基因组学方法中的某些方法,并将重点介绍黑色素瘤和抗传染性疾病的基因组学研究情况,论述在设计此类研究时应予以考虑的问题。本文最后将对利用基因组学方法开发控制具有最高经济价值的猪病—猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRSV)—新型替代方法的可行性、和将从PRRSV研究中获得的知识应用到人传染性疾病研究中的可行性作简短讨论。     

半胱胺和大豆黄酮对东北细毛羊部分组织IGF-I mRNA表达量的影响

为了探讨半胱胺和大豆黄酮对东北细毛羊肝脏、肌肉和皮肤组织中IGF-I mRNA表达量的影响,选取体重27～28 kg,5～6月龄健康的东北细毛羊育成羊21只,随机分成7组,每组3个重复,每个重复1只,采用实时荧光定量PCR法检测肝脏、肌肉和皮肤组织中IGF-I mRNA相对表达量.结果表明:(1)半胱胺和大豆黄酮均能显著提高东北细毛羊的生长性能(P<0.05),其中以7.5 mg/kg BW半胱胺组和7.5 mg/kg BW半胱胺+3 mg/kg BW大豆黄酮组效果较佳;(2)半胱胺和大豆黄酮对东北细毛羊肝脏和肌肉中IGF-I mRNA表达量有显著的提高作用(P<0.05),但各试验组之间差异不显著(P>0.05);(3)对皮肤中表达量的影响:对照组与添加3和6 mg/kg BW大豆黄酮组和7.5 mg/kg BW半胱胺+3 mg/kg BW大豆黄酮组之间差异显著(P<0.05),与添加7.5和15 mg/kg BW半胱胺组和15 mg/kg BW半胱胺+6 mg/kg BW大豆黄酬组之间差异不显著(P>0.05).由结果可知,半胱胺和大豆黄酮均能提高肝脏和肌肉中IGF-I mRNA的表达量,但协同应用并没有促使IGF-I mRNA表达量在肝脏、肌肉和皮肤组织中的明显提高,综合分析以添加3 mg/kg BW大豆黄唰效果最佳.     

IP3R1基因表达、变异对蛋鸭蛋壳品质的影响

IP3R1是钙释放通道蛋白,通过调控细胞质内Ca^2+浓度进而发挥其生物学功能。为探讨IP3R1基因对三穗鸭蛋壳品质的遗传效应,采用实时荧光量PCR和PCR产物直接测序法检测54只三穗鸭IP3R1基因的组织表达谱和SNP多态位点。结果表明:IP3R1 mRNA在11个组织中均存在不同程度的表达,其表达顺序为肺>心脏>肌胃>胸肌>肝脏>胰腺>肾脏>腺胃>子宫>小肠>脾脏;首次在IP3R1基因内含子14检测到g.253779 T>C和g.253967 C>A 2个SNPs突变位点,内含子18发现g.257089G>A、g.257159C>G和g.257237T>G 3个SNPs突变位点,5个SNPs位点均为中度多态位点;卡方(χ^2)检验结果表明,除g.257089G>A位点外,其余4个SNPs位点的基因型分布均未偏离Hard-Weinberg平衡;关联分析结果表明,g.257159C>G位点对蛋重和蛋壳重分别具有极显著和显著影响,g.257237T>G位点对蛋形指数的影响达显著水平(P<0.05)。结果提示,g.257159C>G和g.257237T>G可作为鸭蛋壳品质选择的遗传标记。     

RNA干扰和病毒基因沉默

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是正常动植物体内的一种通过双链RNA来沉默基因的自然现象。细胞内存在的双链RNA(dsRNA)被特异性的内切酶切割成为一种由长约21nt一23nt的小分子干扰RNA(siRNAs)，有时它在正常的细胞中就存在，这种小分子干扰RNA和一些相关蛋白质组成RNA诱导沉默复合体我们称为来发挥作用。主要通过与特定基因编码的信使RNA(mRNA)作用来高效特异地阻断特定基因的表达。RNAi具有高效性和高度特异性，可能成为阻断病毒入侵和关闭基因的新技术，在基因功能研究和疾病基因治疗中发挥重要作用。     

营养对基因表达的调控作用

运用现代分子生物学的手段和方法，人们已经能够确定日粮中的某些营养物质与基因的表达之间存在着密切的联系。现就日粮中的碳水化合物，蛋白质，脂肪等营养物质对基因表达的作用作一综述。     

分子营养学的研究与进展

分子营养学是一门新兴的边缘学科。主要从营养素基因表达的调控、现代分子生物学技术在营养学研究中的应用等角度进行综述,并介绍了分子营养学研究的最新进展。     

营养水平对PRKAG3基因表达量及对肉质影响的研究

挑选70kg左右的DLY猪12头,随机分为2组,分别饲喂高、低2种水平的日粮,高营养水平为DE13．81MJ／kg、CP14％,低营养水平为DE12．55MJ／kg、CP11％。体重达到100kg左右时屠宰,测定胴体性状、肉质性状和PRKAG3基因表达量。以探讨营养水平对PRKAG3基因表达量及肉质的影响。结果表明：低营养水平有促进PRKAG3基因表达的趋势（P〉0．05）;高营养水平有提高屠宰率、瘦肉量、瘦肉率、眼肌面积、L值、a值和b值的趋势（P〉0．05）,但滴水损失显著低于低营养水平（P〈0．05）;营养水平对PRKAG3基因表达量有一定的影响。猪PRKAG3基因表达量与瘦肉率、眼肌面积、a值、b值和滴水损失呈正相关,但相关性均不显著（P〉0．05）;与pH2呈显著负相关（P〈0．05）。这表明营养水平对PRKAG3基因表达量有一定的影响,进而可影响肉质。