农杆菌介导法构建里氏木霉ura3基因突变体的研究

构建了ura3缺失基因载体pEMT-△ura3,采用农杆菌介导法转化里氏木霉QM9414,在含尿嘧啶核苷(1.87 mg.mL-1)和五氟乳氰酸(5-FOA,5 mg.mL-1)的筛选培养基上筛选转化子,经表型验证和PCR检测,获得ura3基因缺失突变体1株,ura3基因的同源重组率为16.6%。采用农杆菌介导法将黑曲霉的pyrA基因导入ura3基因缺失突变体中,使其回复野生型表型,从而建立了以pyrA基因作为筛选标记的里氏木霉受体菌株。     

Development of EST-PCR Markers for the Chromosome 4V of Haynaldia villosa and Their Application in Identification of 4V Chromosome Structural Aberrants

EST-PCR based molecular markers specific for alien chromosomes are not only useful for the detection of the introgressed alien chromatin in the wheat background, but also provide evidence of the syntenic relationship between homoeologous chromosomes. In the present study, in order to develop high density and evenly distributed molecular markers on chromosome 4V of Haynaldia villosa, a total of 607 primer pairs were designed according to the EST sequences, which were previously located in 23 different bins of wheat chromosomes 4A, 4B and 4D. By using the Triticum durum-H, villosa amphiploid and T. aestivum-H, villosa alien chromosome lines involving chromosome 4V, it was found that 9.23% of the tested primers could amplify specific bands for chromosome 4V. Thirty and twenty-six specific markers could be assigned to chromosome arms 4VS and 4VL, respectively. These 4V specific markers provided efficient tools for the characterization of structural variation involving the chromosome 4V as well as for the selection of useful genes located on chromosome 4V in breeding programs.     

不同浓度的同源益生素对肉鸡抗氧化能力的影响

为了探讨不同浓度的同源益生素对肉鸡抗氧化性能的影响,采用分组试验的方法,选用1 500羽1日龄AA肉仔鸡,公母各半,随机分成5组,分别为对照组不同浓度的同原益生素(0.1%、0.2%、0.3%、0.4%)组,每组设10个重复,每个重复30羽,试验期为42 d。观察肉鸡血液总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)含量的变化,以研究同源益生素对肉鸡血液抗氧化能力的影响。结果表明,在肉鸡饲料中添加同源益生素可极显著提高肉鸡血液GSH-Px活力(P<0.01)、显著提高SOD、AOC含量(P<0.05)、降低了MDA含量但不显著(P>0.05),尤其以0.3%同源益生素组对肉鸡具有抗氧化、提高机体免疫力的作用最佳。     

优质同源四倍体菜心新材料的创制及特性分析

为获得优质的菜心同源四倍体新材料,本研究采用0.2%(W/V)的秋水仙素溶液点滴二倍体菜心LCX017幼苗子叶生长点,通过形态学、解剖学、细胞学以及流式细胞仪等方式鉴定到诱导成功的同源四倍体植株,并对二、四倍体的农艺性状、营养品质、光合特性等方面进行分析比较。结果表明,形态学与农艺性状方面,四倍体植株在叶片、花器官、种荚等方面表现出“巨大性”,叶宽、叶厚增大,菜薹直径变粗,重量增大;解剖学方面,四倍体叶片气孔相对二倍体更大,气孔密度降低;花粉粒相比二倍体变大且呈现棒状或橄榄状;细胞学方面,四倍体植株的根尖染色体数目是二倍体的2倍;流式细胞仪鉴定结果显示,四倍体的DNA荧光强度是二倍体的2倍;营养品质方面,相较于二倍体,四倍体植株中可溶性糖、纤维素、有机酸以及叶绿素含量显著上升,硝态氮含量下降22.92%,可溶性蛋白含量无显著变化;此外,结合光响应曲线分析发现,四倍体在强光和弱光条件下的适应能力均强于二倍体。综上,本研究成功诱导出了优质的同源四倍体菜心新材料,丰富了不结球白菜的种质资源。     

橙色红曲菌pyrG缺陷株的筛选及鉴定

[目的]筛选和鉴定橙色红曲菌pyrG缺陷株。[方法]以橙色红曲菌AS3.4384（Monascus aurantiacus）为出发菌株,运用紫外照射致基因突变,随后对尿嘧啶依赖型菌株的pyrG基因进行测序比对,筛选pyrG基因突变株,最后用含有米曲霉pyrG基因的pAOP互补质粒对其进行基因转化试验。[结果]经紫外诱变得到一株尿嘧啶依赖型的5-FOA抗性菌株UM28。扩增其pyrG基因并进行测序,发现UM28的pyrG基因在核苷酸序列＋220bp的位置发生了突变,进而导致氨基酸水平上Pro→Ser的突变,造成了乳清苷-5’-磷酸脱羧酶的失活。UM28通过基因转化能够接受含有米曲霉pyrG基因的互补质粒恢复野生表型,且回复突变率低于10-8,能够用于红曲菌同源转化系统的构建。[结论]获得了一株红曲菌pyrG基因缺陷株UM28,它可被用作基因工程的受体菌。     

同源重组快速构建百合LCHS2基因RNAi表达载体及其鉴定

为探讨CHS基因的下调表达对花朵着色的影响以及为百合观赏性状遗传改良提供技术支持,利用基于同源重组原理的Gateway技术,根据课题组从东方百合‘索邦’分离的LCHS2基因序列(Genbank登录号:GQ483376)和pENTR/D-TOPO载体要求,设计上游5'端添加'CACC'的一对特异引物,PCR扩增获得636 bp的干扰片段。通过TOPO克隆,将该片段克隆入载体pENTR/D-TOPO构建入门克隆载体pENTR/D-CHS,测序结果显示,与原序列同源性为100%。再经过LR反应使pENTR/D-CHS上的干扰片段替换掉目标载体pHellsgate12上的ccdB片段,快速构建了包含LCHS2基因干扰片段的RNAi表达载体pH12-CHSi,经限制性内切酶XhoI、XbaI酶切鉴定获得724 bp和722 bp的片段,与预期结果一致。pH12-CHSi电击法转化农杆菌GV3101,菌液PCR鉴定,出现636 bp的目的条带,表明RNAi表达载体pH12-CHSi已成功转入农杆菌。     

枣MAPK基因片段克隆与分析

采用同源基因克隆法,首次获得了枣MAPK基因片段543 bp,经Blast比对,该序列与湖北海棠(Malus hupehensis EF427897.1)、蓖麻(Ricinus communis XM002509805.1)、西府海棠(Malus micromalus AF435805.2)和欧洲山毛榉(Fagus sylvatica AJ784997.1)的相似率分别为86%、86%、85%和84%。进一步进行系统进化分析,证明该基因属于MAPK中TEY型的B类。     

烟草富含锚蛋白重复结构域基因Nbar的克隆及序列分析

根据1个已报道的马铃薯富含锚蛋白重复结构域基因Star的全长eDNA序列,分别在含有起始密码子和终止密码子处设计基因特异引物,从感染了晚疫病原菌的本氏烟草叶片cDNA中克隆得到1个新的基因Nbar。此基因包含1个最大为1539bp的阋读框,与Star的碱基一致性达到90％。该基因编码513个氨基酸,序列中存在6个锚蛋白重复结构域和1食环指结构域。Nbar已提交GenBank,登录号为1231763。     

能够研发运动饮料的药食同源蔬菜的调查研究

综述了百合、枸杞、牛蒡、山药、玉竹、芦笋等典型药食同源蔬菜的传统医疗价值、现代科学认识及其医疗保健价值,为能够研发以药食同源蔬菜为基础原料的运动饮料提供理论依据。     

巴西橡胶树热研88-13和热研8-79品种的核型分析

本研究采用常规压片法对巴西橡胶树高产品种热研88-13和热研8-79的染色体数目和核型进行了研究。结果表明,热研88-13与热研8-79的体细胞染色体数目均为2n = 36,热研88-13的核型公式为2n = 2x = 36 =28m + 8sm (4 SAT),热研8-79的核型公式为2n = 2x = 36 = 28 m + 8sm (2 SAT),二者均属于Stebbins核型的2B型。