金黄色葡萄球菌FnbpA、ClfA、Ebps抗原表位的串联表达及多克隆抗体的制备

为获得金黄色葡萄球菌特异性抗原蛋白并以此制备多克隆抗体,应用DNAStar软件筛选金黄色葡萄球菌FnbpA、ClfA、Ebps的抗原表位,以柔性氨基酸序列连接后进行全基因合成,将目的基因克隆到pGEX-4T-1原核表达载体,转化至大肠杆菌感受态细胞,诱导表达,采用Sepharose 4B柱亲和层析纯化表达蛋白,制备抗原后对家兔进行皮下多点注射,于第42天采集外周血,获得血清。结果表明,本试验成功构建了金黄色葡萄球菌抗原基因表达载体,并获得了高免血清,经ELISA的方法检测血清效价可达到1∶10000以上,成功制备多克隆抗体,为以后采用免疫学方法快速检测金黄色葡萄球菌奠定了基础。     

奶牛乳房炎多联苗抗原配比及抗人工感染试验的研究

为了进一步提高乳房炎多联苗免疫效果及评价疫苗免疫后的抗感染效果,试验从临床型乳房炎患牛奶样中分离、筛选出毒力及交叉免疫原性强的无乳链球菌(W271)、停乳链球菌(T2531)和金黄色葡萄球菌(J84184)3株优势血清型菌株,制备每剂量(5 mL)中含3种菌的抗原浓度分别为2.5×109CFU、5×109Cfu、1×1010CFU和2×1010CFU的4种氢氧化铝灭活多联苗,将每种疫苗于肩胛部肌肉免疫4头牛,每头牛免疫2次(0天和14天),每次5 mL,分别于免疫前后第28天采血,用间接ELISA方法检测免疫前后血清抗体水平.结果表明:免疫剂量与抗体效价具有显著相关性,随着菌苗中3种菌抗原浓度的增加,免疫后的3种菌血清抗体水平亦增加;用检验用的无乳链球菌(W117)、停乳链球菌(T1030)和金黄色葡萄球菌(J88014)进行免疫攻毒保护试验,结果血清抗体效价与免疫攻毒保护效果具有显著相关性,当免疫后抗体水平达到免疫前的2倍以上时,免疫后的奶牛即具有较好的保护效力.     

O型口蹄疫病毒免疫层析试纸条检测方法的建立

为建立一种快速、准确检测O型口蹄疫病毒（FMDV）抗原的胶体金免疫层析方法,将兔、豚鼠抗O型FM-DV多抗用DEAE-Sephose层析柱纯化。胶体金标记O型豚鼠口蹄疫抗体,形成金标探针并将其喷涂于玻璃纤维上。兔抗O型FMDV抗体和羊抗豚鼠IgG分别标记于硝酸纤维素膜上作为检测带和质控带,各部件按顺序装配形成快速诊断试纸条。如果待检样品中含有O型FMDV,它将与玻璃纤维上的胶体金探针和兔抗O型FMDV抗体形成夹心复合物,并在检测带被固定,沉集反应形成肉眼可见的红色条带。在田间试验中,53份试验样本分别用试纸条和反向间接血凝试验进行检测,2种方法的阳性率分别为95.45%和90.91%。评价试验证实,本研究建立的胶体金免疫层析方法简便、快速,具有良好的特异性和敏感性,非常适于基层兽医实验室诊断时使用。     

猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及其M蛋白截段基因编码氨基酸的生物学分析

利用PK-15细胞从四川省某猪场发病死亡的7日龄仔猪肠系膜淋巴结和脱落的肠黏膜材料中分离获得1株病毒,PCR检测证实为猪流行性腹泻病毒,命名为SC-405.对其M截段基因克隆后进行测序,结果显示该基因长664bp,编码221个氨基酸;序列分析并通过NCBI做序列比对,与其他已知的GenBank公布的序列同源性为97％～99％;氨基酸序列有突变,同源性为95％～99％;系统进化树表明该病毒跟序列号为AEQ29504、ACA81419、AEE38481序列的亲缘关系比较近;用DNAStar Protean模块对该基因编码的蛋白进行主要的抗原指数、二级结构、蛋白质骨架柔性、表面可及性等参数进行预测,并在线预测该蛋白的亲水性及跨膜区,确定该截段基因的B细胞抗原优势表位可能分布在Leu12-Asn14、Lys36、Trp100 Thr113、Val196-Asp202和Asp215-Glu217这些区段.     

动物组织中四环素类抗生素残留的ELISA检测研究——土霉素抗体的制备

四环素类抗生素属小分子半抗原物质 ,必须与大分子物质结合才能产生免疫原性。本试验采用重氮化法合成土霉素 牛血清白蛋白 (BSA OTC)及土霉素 鼠血清白蛋白 (RSA OTC)人工抗原 ,用紫外扫描对其进行鉴定。以BSA OTC免疫家兔制备抗血清 ,以RSA OTC为包被抗原 ,采用双向免疫扩散法和ELISA方法对抗血清进行鉴定。结果表明用重氮化法合成的人工抗原对四环素类药物有特异的抗原抗体反应 ,抗血清效价达 1 2 8× 1 0 5,完全能够满足四环素类药物残留的ELISA检测要求     

行业动态

农业部兽医局工作组赴吉林省指导永吉免疫无口蹄疫区建设近日,农业部兽医局黄伟忠副局长带领无疫区建设评估认证专家,赴吉林省指导永吉免疫无口蹄疫区建设工作。8月11日、12日,农业部兽医局工作     

动物布鲁氏菌病防控技术研究对策

布鲁氏菌病（简称“布病”）是人和牛、羊、猪等动物共患的传染病,也是国家法定检疫-扑杀被感染家畜的三大疫病（口蹄疫、布病和结核病）之一。人群发病主要是由于接触污染的环境、患病动物及其产品引起,主要表现为持续性感染状态,病人长期卧床、中壮年人群完全丧失劳动能力、妇女流产、     

口蹄疫基因工程疫苗研究进展

口蹄疫是感染偶蹄动物的急性、热性、高度接触性传染病,预防的该病的首要方式为疫苗接种。传统口蹄疫疫苗存在长期带毒、毒力返强等不安全因素,因此新型疫苗的研制迫在眉睫。就新型口蹄疫疫苗的研究进展进行了综述。     

口蹄疫双佐剂灭活疫苗免疫动物抗体持续期的研究

一、材料与方法1.疫苗佐剂:法国SEPPIC公司生产的206佐剂成品,双佐剂自行配制。2.口蹄疫病毒抗原:O型和Asia-1型病毒,按生产规程灭活后制备成疫苗用抗原。3.主要检测试剂盒:液相阻断