Comparing Genetic Characteristics of Retrotransposon TOS17 During Different Tissue Culture Processes in the Rice Cultivars Nipponbare and Shishoubaimao

As a retrotransposon, TOS17 was a useful tool for rice genetic and functional genomic research. To ascertain the feasibility of constructing a TOS17 insertion mutation library in the rice cultivar Shishoubaimao, the genetic and expression characteristics of TOS17 were analyzed. We made solid and suspension tissue cultures and confirmed the copy numbers of TOS17 at different time points in both tissue culture processes by real-time quantitative PCR （RT-qPCR）. Three primary copies of TOS17 were detected in naturally grown Shishoubaimao. TOS17 was activated by tissue culture, and the copy numbers of TOSI7 increased along with a prolonged tissue culture time in both the Nipponbare and the Shishoubaimao cultivars. Therefore, Shishoubaimao is a potential candidate for constructing a TOS17 insertion mutant library. Compared with Nipponbare, TOS17 was more active in Shishoubaimao during tissue culture. Higher copy numbers of TOS17 were obtained with the suspension tissue culture process than with the solid tissue culture process over the same time courses. We concluded that 3-4 months of suspension tissue culture time is suitable for constructing a TOS17 insertion mutant library in Shishoubaimao.     

苏太猪肌内脂肪沉积相关基因SRC-1的差异显示反转录PCR鉴定

采取90头180日龄去势苏太猪的背最长肌组织测定肌内脂肪含量,从中选取肌内脂肪含量差异极显著(P<0.01)的最高和最低各6头组成RNA 池,采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)鉴定两组间差异表达的基因,结果共获得14条表达序列标签(expressed sequence tags),即EST序列,通过GenBank比对发现其中3条为已知序列.为进一步验证这3个已知基因与肌内脂肪之间的关系,从90个个体中选取肌内脂肪最高和最低各15个个体进行实时定量PCR检测.结果表明,细胞核受体共激活因子1基因(SRC-1)mRNA表达水平与肌内脂肪含量存在负相关关系(r=-0.38,P<0.05).提示:SRC-1蛋白有可能参与了肌内脂肪沉积的调节.     

橡胶基因组中一个与酿酒酵母脯氨酸特异性通透酶基因部分同源的多态性片段的克隆及序列测定

橡胶树(Hevea brasiliensis Muell.Arg.)的传统种植区主要分布于高温多雨的热带地区,抗旱基因或DNA标记的筛选鉴定对于橡胶耐旱品系的选育及橡胶树向温光和雨量相对不足的非传统植胶区的拓展具有十分重要的意义.RAPD分析是目前遗传多态性研究及特异性基因片段鉴定最有效的分子学工具之一.本研究借助聚合酶链式反应(PCR)对来自37个橡胶无性系的基因组DNAs进行了RAPD分析.结果显示,多态性及特异性扩增条带的数量随无性系及引物的不同而有所差异,有些扩增带为一些无性系共有,而另一些则仅存在于个别或少数无性系之中.根据引物OPB-12的两个特异性扩增条带(1.2和1.4kb)在各无性系中单独或同时存在与否,我们鉴定出了两个相应的特异性RAPD标记,其中1.4 kb扩增带尤其引人注目.克隆及测序结果表明,该RAPD片段与酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)脯氨酸特异性通透酶基因存在一定程度同源性.针对该片段设计一对特异性引物并再次对基因组DNA进行更严格条件下的PCR扩增,结果从14个参试无性系中获得了该1.4kb条带.这种由RAPD标记通过特异性引物设计转化得到的SCAR(序列特异性扩增区)标记可用于橡胶树优良或特异性基因的筛选及鉴定.     

苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因转化美洲黑杨的研究

本研究首先建立了美洲黑杨叶片外植体的再生系统，并利用Ｈｏｒｓｃｈ等人１９８５年发明的叶盘法，将分别带有嵌合基因ＮＰＴＩＩ和１．８ｋｂ或２．１ｋｂ Ｂｔ．基因的土壤杆菌ＬＢＡ４４０４与美洲黑杨叶片共培养。采用３０ｍｇ／ｌ和５０ｍｇ／ｌ两种浓度的卡那霉素筛选转子，约２８天左右的时间，有不定芽从外植体切口处形成。两种卡那霉素浓度下共形成２７５个伸长芽，存活了１８７株。这１８７株分别进入卡那霉素３０ｍｇ／     

干乳期高能饲喂围产期健康奶牛肝载脂蛋白B100 mRNA表达的研究

为阐明载脂蛋白B100在围产期奶牛脂肪肝及相关代谢性疾病发生过程中的作用，以β-actin作为内对照，用RT～PCR方法测定了干乳期高能饲喂围产期健康奶牛不同时期肝组织的apoB100 mRNA表达。结果表明：高能饲喂的围产期健康奶牛肝组织的apoB100 mRNA表达从产前至产后呈先升高后降低的趋势，其中产后14d比产后1d降低了61．45％（P〈0．01），且产前apoB100 mRNA表达显著高于产后（产后1d除外，P〈0．01）。干乳期高能饲喂对围产期奶牛肝脏载脂蛋白B100 mRNA表达有显著影响。     

PCR技术检测饲料中沙门氏菌的应用研究

用聚合酶链式反应穴PCR雪技术检测饲料中沙门氏菌,对已知被沙门氏菌污染的动物饲料的培养物均能检出阳性,说明PCR方法对检测饲料中沙门氏菌具有特异性高,且灵敏、快速等特点,适用于快速、准确地检测饲料中沙门氏菌的需要。     

木质素合成酶COMT基因的PCR扩增条件优化

以2×CTAB法从欧美杨107号嫩叶提取的基因组DNA为试材,建立了木质素合成酶COMT基因的PCR扩增体系。通过对PCR反应的影响因子——模板DNA用量、dNTP浓度、DNA聚合酶量、引物浓度和退火温度进行优化,最终建立了扩增COMT的PCR优化体系为:在20μL的反应体系中,dNTP为2.5 pmol,引物各为5 pmol,模板为5 ng,Red TaqTMDNA聚合酶1.25 U,退火温度为51℃,可以扩增出清晰的扩增带。     

应用PCR检测猪细小病毒

根据GenBank已公布的猪细小病毒NADL-2株的基因序列,设计并合成了1对寡核苷酸引物,通过PCR扩增反应条件的优化,成功地从猪细小病毒感染的组织和细胞中扩增出882bp片段。利用该方法对临床上的6份猪流产病料的检测,查出阳性4份。本试验建立的PCR诊断方法能快速、特异地诊断出猪细小病毒。