猪传染性胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白2基因克隆、序列分析及表达

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniac)血清5型菌株序列ZA6774设计1对特异性引物，用PCR方法扩增转铁结合蛋白2(Tbp2)基因，得到1条1624bp的片段，然后克隆到pMD18-T载体中，经测序比较，与参考序列的核苷酸同源性达99．8％，从T-载体中切下目的片段后，定向克隆到pET32a( )中，转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)，经诱导后，SDS-PAGE电泳，Tbp2高效表达，Western-blotting鉴定呈阳性。     

香蕉果实特异性ACC合成酶基因的克隆及反义载体的构建

乙烯是一种结构简单、功能多样的植物激素,它在植物的整个生长发育(包括种子萌发、花开花谢、果实成熟、衰老、器官脱落及胁迫反应等)过程中都起调控作用[1,2].ACC合成酶(EC.4.4.14)是植物体内乙烯生物合成的限速酶,对跃变型果实而言,当ACC合成酶基因的表达受抑制时,乙烯的生成量下降,果实成熟受阻,使贮藏期得以延长[3].现已从许多植物中克隆到了ACC合成酶基因[4].香蕉(MusaAAA Cavendish Subgroup)是典型的跃变果实,从香蕉中克隆ACC合成酶基因的目的,是利用其反义基因转化香蕉以培育耐贮藏的香蕉新品种并进行香蕉采后的分子生物学研究.     

苹果山梨醇脱氢酶(NAD-SDH)基因的克隆及其反义表达载体对农杆菌的转化

山梨醇是一种糖醇,是蔷薇科植物所特有的,是蔷薇科植物主要的光合产物、运输糖和贮藏物质(B ieleskiand Redg-w ell,1995),在其糖代谢中占有重要地位。另一方面,山梨醇能够提高植物抗环境胁迫的能力(徐迎春等,2001;Brow n etal.,1999)。N A D-山梨醇脱氢酶(N A D-SD H)是山梨醇     

中国人白细胞介素-12 (hIL-12)cDNA克隆及序列分析

根据已发表的IL-12两个亚基P35 cDNA序列（NM-000882）与P40 cDNA序列（NM-002187）设计2对引物。以LPS刺激的人脐血淋巴细胞为材料，采用RT-PCR技术从总RNA扩增hIL-12基因，包括完整的前体蛋白编码序列。所得到的序列与GenBank中发表的一致，但与CLMF和NKSF序列有所差异。P35同CLMF相比，244aa密码子GAC（Asp）→GAT（Asp）、247aa密码子ACG（Thr）→ATG（Met）；与NKSF比较，44aa密码子GTC（Val）→GTG（Val）。P40同NKSF比较239aa密码子AAC（Asn）→AAG（Lys），291aa密码子ACC（Thr）→ACG（Thr）；P40同CLMF相比较，氨基酸与核苷酸序列完全一致。通过与不同物种氨基酸及核苷酸序列比较分析，P40亚基与其它动物的同源性80％以上，P35亚基与其它动物同源性在70％。     

伊氏锥虫HGPRT基因cDNA的克隆及其在E.coli中的表达

根据引物设计的一般原则，参照伊氏锥虫HGPRT基因的核苷酸序列设计、合成一对引物，PCR扩增伊氏锥虫HGPRT基因cDNA。低熔点琼脂糖回收：PCR产物，并将其克隆至pGEM—T Easy载体中，经酶切、PCR鉴定和序列分析，获得重组中间质粒pGEM／HGPRT。重组中间质粒pGEM／HGPRT经Nco I和Sal I双酶切，回收目的片段HGPRT，以非融合形式插入原核表达质粒pBV220构建表达质粒pBV／HGPRT，转化大肠杆菌DH5a，42℃诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳和薄层扫描分析，表达产物HGPRT的分子量约为23kD，与理论推算值相符，表达率占总菌体蛋白的19％，经间接ELISA检测，表达产物能被伊氏锥虫阳性血清所识别。     

味精的选购与食用

味精的化学名叫谷氨酸钠，一般呈晶体状颗粒，如果全部是晶体的就是纯味精，味精产品的谷氨酸钠含量必须大于80％。市场上的味精主要有3类：一是纯味精，谷氨酸钠含量在99％以上；二是含盐味精，是添加了食盐且谷氨酸钠含量不低于80％的味精；三是特鲜味精，也叫强力味精，指味精中加了核苷酸钠等增鲜剂的味精，它比纯味精要鲜得多。     

番鸭呼肠孤病毒MW97106C蛋白基因克隆及其在E．coli中表达

应用RT～PCR扩增出番鸭呼肠孤病毒MW9710株的σC基因，序列分析表明σC基因核苷酸数为810bp．编码269个氨基酸，相对分子量为29．4ku，DNAstar软件分析MW9710株的σC核苷酸序列和法国番鸭呼肠孤病毒89026株有93％的同源性，而与禽呼肠孤病毒的同源性仅在21％～25％之间，表明番鸭呼肠孤病毒是一类不同于禽呼肠孤病毒的新病毒。将σC基因片段亚克隆到原核表达载体pET32a中．经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达，Western—blot进一步验证了表达产物与番鸭呼肠孤病毒阳性血清反应．表明σC基因表达产物具有免疫原性，为下一步研制番鸭呼肠孤病毒诊断试剂盒和基因工程疫苗奠定基础。     

猪瘟的分子生物学诊断

采用RT－PCR方法，从经临床和血清学初步诊断为猪瘟的病料中扩增了猪瘟病毒（CSFV）的E2基因某一片段；对扩增片段进行序列测定，通过DNAsis软件构建了系统发生树，确定了这一流行株（IPI株）在系统发生树中的位置。结果表明，从IPI株和石门株（Shimen)中均扩增出271bp目标片段，这一流行株与我国20世纪90年代以来流行的绝大多数CSF毒株同属于基因2群中的2.1基因亚群，与YN1、YN2、GX4、GZ1的关系较近，而与Shimen株、兔化弱毒株（HCLV）等我国传统的标准毒株相距较远。这一结果为猪瘟的诊断和检疫提供了一种特异、可靠的方法。     

氨基酸生物配比及外源核苷对雏鸡肝脏核酸含量的影响

以NRC推荐的赖Aa为基准 ,以各种Aa对应的密码子使用频率的比率来确定饲料配方中各主要Aa之间的生物配比。在添加外源核苷酸的条件下 ,雏鸡肝脏中核酸含量明显增加 ,34日龄对照组与试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组鸡肝脏中总RNA含量分别为 (34 5 7.3± 146 .4)、(380 0 .7± 16 5 .6 )、(3814.8± 170 .4)、(36 15 .1± 2 17.2 )、(4 785 .4± 12 2 .9)和 (4 916 .0± 2 0 7.1) μg·g-1。结果显示 ,外源核苷酸在家禽体内能被利用 ,且在氨基酸比例趋于平衡时 ,RNA总量有所增加。     

伪狂犬病病毒Fa株gp63（gI） 基因核苷酸序列测定及分析

对我国最早分离的伪犬病病毒（pseudorabies virus,PRV)Fa株糖蛋白gp63(gI)基因核苷酸序列及的氨基酸序列作了测定与分析，完整的gp63(gI)结构基因从起始密码子ATG到终止密码子TGA共有1050个核苷酸残基，编码由439个氨基酸残基构成的多肽链，4种核苷酸残基的构成比分别为：G35．9％，11.33%,T11.81%,C40.95%,G C含量达76．85％，PRV Fa株gp63基因核苷酸序列与Nice株的相比，两者同源性达98．13％，仅存在3个核苷酸残基的缺失变异，氨基酸推导序列分析表明，糖蛋白gp63具有典型膜蛋白特征，与Nice株相比，同源性为97．42％，gp63基因起始密码子由3个连续的ATG组成，ATG上游区域内无启动子调控区序列。