鸡组织中脱氧土霉素测定方法研究

本实验采用高效液相色谱法对鸡肉、鸡肝、鸡皮加脂肪中脱氧土霉素进行含量测定。Mcllvain缓冲液为提取溶剂，甲醇-乙腈-0．01摩尔草酸(150：80：400)为流动相，色谱柱为C18柱，紫外检测器，检测波长549纳米。脱氧土霉素在0．05～2．00微克／毫升范围内线性关系良好，相关系数r=0．9999。平均添加回收率分别为：鸡肉78．5％～85．0％，鸡皮 脂肪89．8％～96．2％，鸡肝56．0％～67．2％。本方法的最低检测限为鸡肉50微克／千克，鸡肝70微克／千克，鸡皮 脂肪70微克／千克。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒缺失变异株的基因组特征

对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)分离株HB2(sh)／2002的全基因组序列进行了测定与分析。该毒株基因组全长为15373nt(不包括PolyA尾)，与国内外美洲型PRRSV分离株全序列相似性介于88．7％～95．1％之间。序列分析表明，该毒株是1个天然存在缺失的变异毒株，其ORFla的Nsp2存在编码12个氨基酸的连续36个核苷酸的缺失，ORF、3存在编码1个氨基酸的3个核苷酸的缺失。这是国内外首次发现PRRSV存在缺失变异现象，研究结果补充和丰富了PRRSV毒株的基因组信息数据，为深入研究该毒株的遗传与变异及其与生物学特性的关系奠定了基础。     

西尼罗热病毒RT-PCR检测方法的建立

参考Genebank发表的西尼罗热病毒(West Nile virus，WNV)E糖蛋白基因序列，自行设计合成一对引物，对WNV进行RT—PCR扩增，产物经琼脂糖电泳分析，呈现一条约400bp的条带，将其克隆入pMD18-T—Vector载体中，并进行序列测定，与已发表的WNV基因比较发现，核苷酸的同源性为99．7％，证实为WNV的E基因，通过对样品多次检测，都能扩增出一条约400bp的条带，表明该方法比较稳定。     

马动脉炎病毒RT-PCR检测方法的建立

根据已报道的马动脉炎病毒基因组保守基因核苷酸序列，设计并合成了1对引物，通过对影响PCR扩增因素的筛选，成功地从病毒感染的细胞中扩增出约200bp的片段，与理论设计值(204bp)大小一致。而正常的RK-13、BHK-21和Vero细胞和同为动脉炎病毒科的猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)作为对照的扩增结果均为阴性。敏感性试验表明，该方法可以检测出10^-4个TCID50的病毒含量，说明具有较好的敏感性。     

绵羊肺腺瘤病毒NM株前病毒gag基因的克隆与序列分析

参照GenBank中已发表的绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的全基因序列，设计合成3对引物，对JSRVNM株的gag基因分3段进行PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳分析，分别呈3条531、888和949 bp的特异条带，将其分别克隆人pMD-18T载体中，进行序列测定并拼接序列，得到完整的gag基因序列。分析结果表明，与南非代表株(基因序列号NC-001494)的gag基因序列比较，核苷酸同源性为89．0%，推导出的氨基酸同源性为90％。与美国代表株(基因序列号AF105220)的gag基因序列比较，核苷酸同源性为86．3％，氨基酸同源性为87％。     

脱氧保鲜剂储粮应用探讨

正在科技进步和生活水平日益提高的今天,人们对食物的需求不仅在于数量满足,更重在食品的品质安全,粮食安全和环境保护逐渐成为关注的焦点。长期以来,粮食更多地依赖储粮化学药剂熏蒸杀虫,不仅使害虫产生了强烈的抗药性,还因毒气泄漏对周围环境造成污染,残留吸附影响粮食卫生品质,而且保粮人员在施药和揭膜处理残渣等过程中接触有毒气体,身体容易受到伤害。因此,在今后用于虫害防治的储粮化学药剂,将会越来越受到     

青天葵1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶基因片段的鉴定和分析

1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶(1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate synthase,DXS)是植物萜类MEP生物合成途径的第一个限速关键酶,提高其编码基因的表达可提高植物萜类化合物的含量。该研究在青天葵全转录组测序数据中获取青天葵DXS基因片段序列,利用生物信息学方法对其系统发育进化、保守功能域、理化性质、亲/疏水性、跨膜结构域、信号肽等进行分析和预测,并采用RPKM法分析其在青天葵叶片和球茎的表达量,为后期利用DXS基因调控青天葵萜类成分的生物合成提供理论依据。结果表明:NfDXS基因片段序列长度为2 154bp,编码含有718个氨基酸、分子量约为77.45kDa的亲水性蛋白,与其它DXS同源性可达80%。NfDXS具有1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶功能域,没有信号肽和跨膜结构域,二级结构表现为混合型结构蛋白质。NfDXS基因在青天葵中的表达趋势为:叶片球茎。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇提取、纯化及含量检测

本试验通过提取和纯化方法的优化,旨在获得高纯度的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)。首先将禾谷镰刀菌孢子液接种于玉米培养基,于27℃30%湿度的条件下培养25d,收集产毒培养基,制成毒素粗提液。经过层析柱2次洗脱,分段收集洗脱液,用薄层色谱法(TLC)确定含DON的洗脱液,合并洗脱液,运用多重结晶法进行纯化,获得DON的纯品,高效液相色谱法(HPLC)进行分析确认。采用该培养方法,每千克玉米培养基可产生DON 56.65 mg,纯化后可得到DON 29.5mg,纯度达到98.1%;HPLC检测条件为:Waters C18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-水(16∶84),流速0.8mL/min,紫外波长218nm,色谱柱柱温30℃;本方法加标回收率为86.9%~100.6%,日内相对标准偏差≤9.42%,日间相对标准偏差≤5.79%。本试验建立的DON提取与纯化方法简单,不需要任何特殊的试剂与设备,且该检测方法回收率高,准确度和精密度均能满足试验要求,为DON纯品的定量提供了技术支撑。     

复合吸附剂对AFB_1和DON暴露鸡血清生化指标的影响

本试验旨在通过复合吸附剂(CA)对禽体内黄曲霉毒素B1(AFB1)和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的吸附作用,根据血清生化指标变化,研究其对霉菌毒素污染的脱毒效果。选取120羽7日龄体质量接近的健康雏鸡,随机分成4组,分别为对照组、试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,其中对照组饲喂正常饲料,试验Ⅰ组饲喂霉变饲料,试验Ⅱ组饲喂正常饲料+0.5%CA,试验Ⅲ组饲喂霉变饲料+0.5%CA。试验期为21d。所有鸡只分别在7、28日龄进行称重,试验结束时,经鸡翅静脉采血,测定血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱基磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)活性;同时,每组选取5只鸡剖检,观察脏器病变,取肝脏、肾脏、脾脏、胸腺和法氏囊,计算脏器系数。结果显示,与对照组相比,试验Ⅰ组雏鸡肝脏、肾脏、脾脏脏器系数显著升高(P0.05),胸腺和法氏囊脏器系数显著降低(P0.05),血清TP和ALB含量显著下降(P0.05),ALT、ALP、LDH和MDA活性显著升高(P0.05),SOD活性显著降低(P0.05);试验Ⅲ组肝脏、肾脏和脾脏的脏器系数显著降低(P0.05),TP和ALB的含量显著提高(P0.05),ALT、ALP和MDA的活性显著降低(P0.05),SOD活性显著升高(P0.05);试验Ⅱ组的脏器系数及生化指标与对照组相比差异均不显著(P0.05)。结果表明,CA对AFB1和DON有良好的吸附作用,可用于饲料中霉菌毒素的脱毒。     

毛白杨PtMADS1基因的反义表达

为明确毛白杨(Populus tomentosa)的MADS盒基因Pt MADS1的功能,本研究对Pt MADS1在毛白杨植株不同部位的表达进行了RT-PCR分析。本研究对毛白杨进行了Pt MADS1基因的反义转化,将35S::Pt MADS1反义转基因芽体接种于不同类型培养基上。结果表明Pt MADS1有可能参与了茎尖的形态发育,并能够影响植物营养器官的形态。因此本研究认为Pt MADS1对生长素的合成具有促进作用。