香榧天然群体遗传多样性的AFLP分析

利用AFLP分子标记技术,采用8对引物对6个香榧天然群体的92个个体进行了总基因组DNA水平上的多态性检测,共检测出364个位点,其中多态性位点63个.方差分析表明:基因谱带频率在群体间差异不明显,方差分量贡献率在群体间占11.14%,群体内占88.86%.6个群体均具有丰富的遗传多样性,多态位点百分率为79.73%～98.41%,其中绍兴>东白湖>磐安>钟家岭>嵊州>黄山,且群体内遗传多样性大于群体间遗传多样性.等位基因数为1.7939～1.9841,有效等位基因数为1.5416～1.6759,Shannon信息指数为0.4548～0.5471.群体分化系数为0.1136,群体内遗传多样性为0.3512,基因流为3.8997.遗传一致度平均值为0.9174,遗传距离平均值为0.0797.根据遗传一致度进行了UPGMA聚类分析.     

荧光探针法研究铅离子对小牛胸腺DNA构象的影响

［目的］利用荧光探针法研究铅离子与DNA的作用方式。［方法］采用紫外可见分光光度法检测了DNA的纯度,采用荧光滴定法研究了铅离子对DNA构象的影响。［结果］随着铅离子的加入,DNAEB复合物的荧光强度逐渐降低。在DNAEB体系中加入铅离子后,荧光强度随着铅离子浓度的增加而降低,且荧光峰位略有红移。按生物分子的荧光寿命τ0为10ns计算,DNAEB与铅离子的双分子猝灭常数分别为1.01×1013和4.0×1014L/（mol·s）,二者均大于生物分子的最大动态猝灭常数2.0×1010L/（mol·s）,说明由铅离子引起的DNAEB的荧光猝灭属于静态猝灭。根据斜率和外推截距计算出DNAEB与猝灭剂的解离常数为1.13×10-5mol/L。铅离子与DNAEB的结合位点为5.56,结合常数为1.51×1029。［结论］铅离子容易与DNA结合,引起DNA构象的变化。     

抗黄曲霉毒素单链抗体基因的克隆与表达

为降低黄曲霉毒素大量样品的制备成本,在实验室已有的抗黄曲霉毒素单克隆抗体8F6的基础上,成功克隆得到了该单克隆抗体的重链（VH）和轻链可变区（VL）基因片段。通过重叠延伸PCR的方法将轻、重链可变区基因连接,并引入连接肽(Linker) 编码序列,构建VH-Linker-VL结构的单链抗体(ScFv)基因, 并将该基因克隆到噬菌体表达载体pCANTAB 5E 上,使单链抗体以噬菌体展示形式在大肠杆菌TG1 中表达。间接竞争ELISA方法检测到该ScFv对黄曲霉毒素B1的抑制率（IC50）值为0.57ng/mL,表明该单链抗体与亲本鼠单抗有相同的抗原结合特异性,且具有很高灵敏度。     

ACVR1基因对京海黄鸡生长和繁殖性状的遗传效应研究

以京海黄鸡为材料,采用PCR-SSCP和DNA测序技术对ACVR1基因外显子多态性进行研究。结果表明,ACVR1基因20190 bp处发生G→A突变,检测到AA、AB和BB 3种基因型。A等位基因频率为0.9075,B等位基因频率为0.0925。基因型与生长和繁殖性状的关联性分析发现,BB基因型鸡的开产体重极显著高于AA基因型鸡(P<0.01),AA基因型鸡300日龄体重显著高于BB基因型鸡(P<0.05)。由此初步推断,ACVR1基因可能对京海黄鸡的产蛋和发育有一定的影响,A为体重的优势基因,B为产蛋的优势基因。     

紫花芸豆胰蛋白酶抑制剂部分性质研究

[目的]研究紫花芸豆（Phaseolus vulgaris）胰蛋白酶抑制剂（PVTI）的部分性质。[方法]探索了不同温度、不同还原剂和变性剂处理对PVTI抑制活性和蛋白构象的影响。[结果]PVTI是一种对热稳定蛋白;部分二硫键对活性中心有重要贡献;经尿素处理,PVTI的荧光光谱没有明显变化,但残留了较少的抑制活性,推测亚基的解离影响了抑制活性而每个亚基的内部结构未受到影响;经盐酸胍处理,Trp残基完全暴露于极性环境中,整个蛋白质分子处于一种松散伸展的状态,PVTI活性全部丧失。[结论]该研究可为PVTI的功能研究及其进一步应用奠定基础。     

鸡mir-1644基因“seed”区的T＞C多态分析

 【目的】观察“seed”区T＞C多态对鸡mir-1644基因“茎环”结构和靶基因选择的影响,分析其在不同鸡群的遗传分布,为揭示其对mir-1644表达调控的影响及表型效应奠定基础。【方法】利用mfold和miRanda软件进行mir-1644二级结构模拟和靶基因预测,采用引入酶切位点RFLP技术对6个鸡群的179个个体进行基 因型检测。【结果】①T→C突变可导致pre-mir-1644空间构型和自由能改变,稳定性降低;②预测到21个mir-1644-T和mir-1644-C基因差异调控的靶基因。③在汶上芦花鸡群体内以C等位基因为优势基因,与其它鸡间的基因型分布存在显著差异（P＜0.01）。【结论】“seed”区T＞C 突变可能干扰或破坏mir-1644基因的表达调控,且CC基因型可能与汶上芦花鸡某些表型变异有关。     

马铃薯金线虫的分子检测技术

本研究通过利用随机引物OPK-4对马铃薯金线虫和白线虫及甜菜胞囊线虫进行RAPD-PCR,供试马铃薯金线中5个群体能产生630bp的特异性的片段,将特异性片段进行测序后发现5个不同来源的马铃薯金线虫产生的特异性片段序列完全一致。根据测定的DNA序列设计出特异性探针,可有效地用于马铃薯金线虫的分子检测。     

建鲤生长激素促泌素受体1基因的特性及其与增重相关SNP位点的筛选

GHS-R基因在哺乳类为候选的肥胖和生长数量性状位点。本实验使用RT-PCR及PCR的方法,从建鲤(Cyprinus carpio var.jian)分离到2个jlGHS-R1s,称为jlGHS-R1a和jlGHS-R1b(分别简称1a和1b)。jlGHS-R1s的阅读框编码360个氨基酸,两者间相似性高达96%;另外还存在2个jlGHS-R1s的转录变体(分别简称1a’和1b’),选择性切割了翻译起始碱基后第490-680 nt的191 bp片段,该片段两端碱基分别为gt-ag,这种选择性切割导致翻译提前终止,仅翻译184个氨基酸,包括前面3个半跨膜区,这与已报道的罗非鱼等的保留内含子的转录变体不同。jlGHS-R1s的阅读框被1个内含子分隔,该内含子位于第260个氨基酸密码子的第1和第2个碱基之间,1a和1b的内含子长度分别为676 bp和885 bp。使用分段PCR在建鲤群体的1a和1b基因上共找到32个SNP位点,构建PCR-RFLP法对其中9个SNPs进行基因型检测,结果发现各种基因型在322尾建鲤中均有出现,但存在着明显的偏分布。与增重的相关分析表明,位点1a-I_C386T和1b-E1_G159T与雌雄鱼鱼种和成鱼阶段增重分别呈极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)相关,CC型和GG型个体增重最快,另外有5个位点则与其中的某阶段或者某性别的增重相关,为了确定上述所得标记的适用性,选取其中4个标记在另外7个家系共610尾鱼中检测,结果 C386T和G159T还是与增重呈极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)相关,可用于建鲤分子育种。     

下丘脑-垂体-性腺轴上基因多态性与鸡冠高和体重的相关性分析

鸡冠高及体重是优质鸡早熟性选育过程中重要的参考指标,通过研究鸡多个侯选基因上突变位点与冠高和体重的相关性,寻找可作为该性状标记辅助选择的重要标记。在GnRH-I、GnRHR、NPY、DRD2、VIP、VIPR-1和PRL这7个侯选基因上共选取了10个多态位点,采用PCR-RFLP方法对1 310只宁都三黄鸡进行了基因型检测,并对各位点与77、84、91日龄冠高和体重性状的相关性进行了分析。结果表明:NPY基因上的2个位点I31391359D及C31394761T可作为91日龄体重标记辅助选择的有效分子标记;VIPR-1基因上的位点A1661691G可作为77、84日龄冠高的有效分子标记。     

胰腺癌人源噬菌体单链抗体库的构建及初步筛选

提取胰腺癌患者的外周淋巴细胞总RNA,以RT-PCR技术分别扩增出人源抗体H链和L链的可变区基因,采用SOE-PCR法将VH和VL片段随机拼接成scFv片段,然后将scFv片段克隆至pCANTAB5E载体,并电转化至感受态TG1菌,经辅助噬菌体M13K07拯救,获得胰腺癌人源噬菌体单链抗体库。结果表明,从外周血淋巴细胞中获取可变区基因,利用噬菌体抗体库技术制备人源抗胰腺癌单链抗体的策略是可行的。