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检测雏鸭肝炎病毒的单克隆抗体—抗原斑点试验的建立 总被引:7,自引:0,他引:7
以微孔滤膜为抗原栽体,用酶标记的单克隆抗体直接检测病死雏鸭组织和鸭胚(或鸡胚)尿囊液中的雏鸭肝炎病毒(DHV-1)。建立了抗原斑点试验(AST)。试验的最佳工作条件:以50%脱脂牛奶,37℃1小时封闭;酶标单抗浓度为1:1600;底物缓冲液为0.05mol/LpH7.6Tris-HCl。用该法检测了175份病料,并进行阻断试验、交叉试验、平行试验及重复性试验。结果证明,这是诊断雏鸭肝炎病毒的一种微量、简便、特异性强的方法。 相似文献
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为筛选出日本脑炎病毒(JEV)敏感度高的BHK-21细胞株,采用终点稀释法从母代BHK-21混合细胞中分离单细胞克隆株,应用接种BHK-21克隆株方法,从JEV阳性蚊子样品研磨液中分离病毒,筛选出的3号单细胞克隆株经3次传代后细胞产生明显病变,分离到1株JEV,5号单克隆株培养物核酸检测呈阳性,但是不产生细胞病变,母代混合细胞没有病变,JEV核酸检测阴性。根据1、3型JEV的prM与E基因设计4对引物初步鉴定分离株基因型,鉴定分离株为1型JEV。综合以上结果,构建的BHK-21单细胞克隆株比BHK-21混合细胞对分离JEV株敏感,更适合JEV的分离与培养。 相似文献
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用经蔗糖密度梯度离心纯化的鸡传染性支气管炎病毒(IBV,M41)作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过常规淋巴细胞杂交瘤技术产生杂交瘤细胞,经ELISA筛选,获得了4株能分泌特异性抗IBV单克隆抗体的细胞系,分别命名为4AC1、4AF1、6DH8及2DH10。4株单抗的亚类都属于IgG2b,在Westernblotting试验中,4AF1、6DH82株单抗特异性地识别IBV的核衣壳蛋白(N);经ELISA测定,各株单抗40h培养上清效价达10-2~10-4,第7天腹水效价达10-5~10-6,4AF1、6DH8与所试7个IBV标准株及2个IBV分离株都发生反应 相似文献
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[目的]为探索单个转基因阳性细胞快速扩大培养成为细胞克隆的技术体系。[方法]对转染人乳铁蛋白(Human lactoferrin,hLF)基因乳腺特异性表达载体pBLM-C1的单个山羊胎儿成纤维细胞(Fetal Fibroblasts,FF)和乳腺上皮细胞(Mammary Gland Epithelial,MGE)细胞进行克隆。在96孔板中,首先用3种浓度(V/V:0、50%和100%)的适应性条件培养基对单个转染细胞进行细胞单克隆的制备,进而把转染细胞单克隆与非转染细胞共培养进行扩大培养,neo基因被用于筛选基因,以PCR方法鉴定转染细胞基因组DNA。并对单克隆细胞进行染色体核型分析。[结果]与非适应性条件培养基相比,100%适应性条件培养基能够显著提高细胞单克隆存活率;与对照相比,转染细胞单克隆与非转染细胞共培养,显著提高了转染细胞单克隆扩大培养后的比率(FF:53.33%vs.10.00%;MGE:33.33%vs.6.670%),且明显缩短了扩大培养汇合时间(20~30 d);PCR鉴定结果表明,上述方法获得的克隆细胞整合有hLF目的基因;核型分析表明,大部分细胞克隆染色体正常。[结论]该研究可为分离转基因细胞、理想载体的插入及诊断提供一种可靠的方法,并能节省转基因动物生产的及费用时间。 相似文献
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本研究对制备出的单克隆抗体进行鉴定,并以此为基础构建鼠棒状杆菌免疫层析检测方法,制备检测试纸。试验结果表明:试验获取的单克隆抗体效价高(1.6×103~1.28×104),特异性和灵敏度好。免疫层析胶体金试纸最低检出限为10-6CFU/mL,与大肠杆菌、沙门氏菌等无交叉反应,具有一定的临床意义。 相似文献