藏绵羊KLF7基因表达特征分析及其过表达对前脂肪细胞增殖分化的影响

【目的】分析藏绵羊Krüppel样因子7(Krüppel-like factor 7,KLF7)基因表达特征,研究过表达该基因对前脂肪细胞增殖及分化的影响。【方法】从藏绵羊脂肪组织中分离前脂肪细胞进行培养及成脂诱导,应用实时荧光定量PCR技术检测KLF7基因在藏绵羊7个组织(大脑、皮下脂肪、肾脏、背最长肌、瘤胃、睾丸和回肠)和前脂肪细胞不同分化阶段(第0、2、4和8天)的mRNA相对表达水平;应用RT-PCR方法从藏绵羊脂肪组织中扩增KLF7基因CDS区序列,并将其连接到pcDNA3.1(+)真核表达载体获得pcDNA3.1-KLF7过表达质粒,转染前脂肪细胞;应用实时荧光定量PCR方法检测脂肪细胞增殖及分化标志基因mRNA表达水平;采用EdU和CCK-8方法分别检测过表达KLF7基因对EdU阳性细胞数和细胞活力的影响;采用油红O染色检测过表达KLF7基因后脂肪细胞脂滴生成量。【结果】KLF7基因在藏绵羊7个组织中均有表达,其中在大脑中的表达量最高,其次为皮下脂肪和肾脏,均显著高于其他组织(P<0.05);诱导分化第2、4和8天脂肪细胞mRNA表达量均显著高于分化前(P＜0.05),且分化第2天表达量最高;pcDNA3.1-KLF7过表达质粒转染前脂肪细胞2 d后显著或极显著抑制增殖标志基因CDK4、CyclinB1和CyclinD1的表达水平(P＜0.05;P＜0.01),极显著降低细胞活力及EdU阳性细胞数量(P＜0.01);pcDNA3.1-KLF7过表达质粒转染前脂肪细胞,诱导分化8 d后,脂肪细胞分化标志基因PPARγ、Glut4和ELOVL6的mRNA相对表达水平显著或极显著下调(P＜0.05;P＜0.01),且脂质沉积极显著减少(P＜0.01),表明过表达KLF7基因可抑制藏绵羊前脂肪细胞增殖及分化。【结论】KLF7基因在藏绵羊多个组织中广泛表达,且大脑、皮下脂肪、肾脏中表达量较高;诱导分化后脂肪细胞表达量显著高于分化前,且分化第2天表达量最高;过表达KLF7基因可抑制藏绵羊前脂肪细胞的增殖及分化。试验结果为阐明藏绵羊脂肪沉积的分子调控机制提供了基础数据。     

外源添加短链脂肪酸调控断奶前犊牛胃肠道健康发育潜在功能和机制

胃肠道健康发育是影响犊牛生长及其潜在生产性能发挥的关键。研究报道,短链脂肪酸(SCFA)和胃肠道微生物可促进幼龄动物胃肠道健康发育,但具体机制还不明确。新生犊牛胃肠道发育不健全,胃肠道内微生物种类及丰度均较低,内源性产生的代谢产物SCFA较少。现有文献表明,SCFA具有通过影响断奶前犊牛胃肠道微生物的定植、维持肠道黏膜屏障的完整性及提高肠道抗炎能力,进而促进犊牛胃肠道健康发育的功能。本文拟从胃肠道上皮和微生物2个层次来探究并综述外源添加SCFA促进断奶前犊牛胃肠道发育的分子机制,及其对断奶前犊牛胃肠道微生物定植的影响及机理,为犊牛健康培育与科学饲养提供理论基础。     

九孔鲍人工育苗关键技术

九孔鲍属软体动物门,前鳃亚纲,鲍科,鲍属。九孔鲍已是我国南方海域、台湾省以及东南沿海鲍科中最重要的养殖种类。近几年随着南方地区的养殖规模和消费群体的不断扩大,九孔鲍市场需求量逐年增加,推进了人工育苗规模的不断拓展。但是由于受到海水水质及病害的影响,九孔鲍在南方育苗的成活率越来越低,而在北方育苗成活率却逐步提高,所以逐渐形成了一股南鲍北育的热潮。为此,我们于2004～2006年在北方进行了九孔鲍的生产开发和科技研究。现将九孔鲍人工育苗的关键技术及经验总结如下。     

母猪的发情鉴定及其配种时间

1 发情鉴定 排卵是在发情期内进行,但何时排卵肉眼是看不见的.要使母猪及时配准,并且多产仔猪,一定要选择在母猪排卵前2～3小时进行交配或输精.实践证明,当发情母猪允许公猪爬跨后平均31小时(24～36小时)开始排卵.     

提高鸡孵化率的种蛋孵前管理技术

为了提高鸡的孵化率,作者在种蛋的收集、选择、消毒、保存等方面进行了技术性探讨.     

不同前茬作物对秋茬大白菜根肿病及产量的影响

为了筛选出适宜北方露地秋茬大白菜生产的前茬作物,以当地常年种植模式大蒜—大白菜为对照,研究了小麦、分蘖洋葱、大豆3种前茬作物对秋茬大白菜根肿病及产量的影响.结果表明,以大豆、分蘖洋葱和小麦作前茬作物,均能降低春茬土壤中芸薹根肿菌休眠孢子含量;分蘖洋葱—大白菜处理的秋茬大白菜根肿病病情指数始终显著低于对照;分蘖洋葱—大白...     

鸽保健砂中主要矿物质元素含量及钙磷测定前处理方法的比较

为了解保健砂中主要矿物质元素的含量情况,试验采集了6省共11个地区的鸽保健砂产品,首先比较了用湿法消化、干法消化和酸溶解法对钙磷待测样品进行前处理的效果,分别按照GB/T 6436-2018和GB/T 6437-2018测定方法测定了样品中的Ca、P含量,接着采用GB/T 13885-2017方法测定了样品中Fe、Cu...     

苹果采前落果与内源激素的关系

为了探讨苹果采前落果与内源激素之间的关系,在采前8周间定期测定了不同苹果品种的果柄、果台和离层形成部位组织中IAA、ABA含量;在采收前20d内定期测定了离层部位组织中细胞壁分解酶(Cellulase)的活性;在收获期测定了果实乙烯的发生量。结果表明:不同品种果柄、果台和离层部位组织中IAA和ABA含量变化有差异,但它们变化的总趋势相似,都是随着果实成熟IAA含量下降,而ABA含量上升;不同品种的成熟果实中乙烯发生量有很大差异,以落果多的品种显著大于落果少的品种;采前落果重的品种离层部位组织中细胞壁分解酶的活性在果实成熟期急剧增加。由于果实进入成熟阶段后,IAA含量下降,ABA含量升高,ABA/IAA之间的相对平衡被打破,高ABA/IAA以及高乙烯会刺激离层组织中细胞壁分解酶的活性增高,进而促进离层形成,这可能是导致落果发生的原因。     

miRNA-27b-3p对猪脂肪前体细胞分化的影响

为研究miRNA-27b-3p对猪脂肪前体细胞分化的影响,试验首先对miRNA-27b-3p的靶基因进行预测,然后将miRNA-27b-3p和阴性对照分别转染猪脂肪前体细胞,使用qRT-PCR和ELISA试剂盒检测靶基因在24、48 h转录水平和翻译水平的表达量;甘油三酯检测试剂盒检测脂肪前体细胞中甘油三酯的含量。预测结果显示,miRNA-27b-3p靶向调控影响脂肪沉积的关键基因LPL(脂蛋白酯酶基因);qRT-PCR结果显示,miRNA-27b-3p转染24 h后猪脂肪前体细胞中LPL基因的表达量极显著下调(P<0.01),而转染48 h无明显差异;ELISA结果显示,miRNA-27b-3p转染24 h后猪脂肪前体细胞中LPL蛋白表达量显著下调(P<0.05),转染48 h后猪脂肪前体细胞中LPL蛋白表达受到极显著抑制(P<0.01);甘油三酯检测结果显示,猪脂肪前体细胞中的甘油三酯含量显著降低(P<0.05)。结论：miRNA-27b-3p可以靶向调控LPL基因的表达,抑制猪脂肪前体细胞的分化。     

条斑星鲽精子超微结构研究

分别以扫描电镜和透射电镜方法研究了条斑星鲽精子的超微结构。条斑星鲽精子全长45.57±3.23μm,主要包括三部分:头部、中段和鞭毛。头部呈圆形,主要结构为近圆形的细胞核;中段不发达,主要包括线粒体和中心粒复合体两部分,具有多个未分化的圆形小线粒体;鞭毛细长,结构为典型的"9+2"型双联微管结构,无侧鳍。这些特征表明,条斑星鲽的精子属于简单的原始类型。条斑星鲽精子不具顶体,但具有开口于核前端稍偏处呈不规则状的核前部凹陷及核内核泡结构,核前凹陷与染色质区无界膜分隔,部分精子在凹陷前端存在由核膜构成的凸起。凹陷区的前部及其开口处常有多个小的具单层界膜的囊泡,这些结构可能是顶体的遗迹,但也不排除其是向外释放核内物质的一种途径的可能性。