关键加工工艺和酶解对大豆涂抹型干酪品质的影响

为了进一步优化和提高完全豆浆制作可涂抹的干酪状产品的品质,通过检测组成成分、质构分析、粒径测定和感官评价,对比不同方式凝乳制备的大豆涂抹型干酪的成分组成、硬度、涂抹性及风味,进一步优化乳化条件。结果表明,乳酸菌发酵凝乳得到的大豆涂抹型干酪的水分含量略低,乳清更易排出,醛类物质明显降低,而香味物质(2,3-丁二酮)增多,感官评价最高。在搅拌温度80℃,转速1 800 r/min,时间30 min条件下制备的大豆涂抹型干酪具有最佳的质构、粒径等特性。当蛋白酶A添加量达0.3%时,大豆涂抹型干酪的品质较好,颗粒较小,细腻程度与市售涂抹型干酪相近。     

番木瓜凝乳蛋白酶基因启动子的克隆及功能研究

 采用 PCR技术从番木瓜品种‘穗中红’克隆了木瓜凝乳蛋白酶基因的部分序列及其5'侧翼序列,构建含有两种长度启动子片段的植物表达载体,并用基因枪轰击番木瓜叶组织和农杆菌转化烟草叶盘。结果表明,克隆产物长719 bp,163 bp 3'侧翼序列与 GenBank中的番木瓜凝乳蛋白酶基因序列同源性为99%,556 bp的 5'侧翼序列有基础启动子区,转录起始位点位于ATG上游38bp的T。序列登录号为 AY803756。预测在启动子区存在 TATA-box、CAAT-box、WUN和HSE等顺式作用元件。两种启动子片段驱动的GUS基因瞬时表达和稳定表达结果表明,该启动子片段具有乳管特异表达活性。     

微生物酶和小牛皱胃酶凝乳特性的研究

以黑白花奶牛的新鲜奶为原料，研究了微生物酶和小牛皱胃酶的最适作用温度、热稳定性、酸度影响、pH稳定性、金属离子及有机溶剂的影响。结果表明：微生物酶和小牛皱胃酶的最适作用温度分别为65℃和60℃；两种酶在温度分别低于50℃和45℃时，热稳定性较好；二者的活力随酸度增加而上升，并且在pH值为4时其稳定性最好；Ca^2 、Fe^2 是两种酶的激活剂，Cu^2 是二者的抑制剂，Na^ 、Mg^2 对二者无显著影响；丙酮有一定的促凝乳作用。     

美汁在混合乳干酪生产中的应用

利用胃蛋白酶和姜汁按一定比例配合替代部分皱胃取得了理想效果。在混合乳干酪最佳工艺参数的基础上,用复合凝乳酶Ⅱ（2%皱胃酶0.05%,2%胃蛋白酶0.02%,姜汁0.15%）,代替皱胃酶（如仅用皱胃酶添加量为0.375%）对混合乳进行凝乳,所加工的混合乳干酪经感官评定认为与精制皱胃酶加工的干酪具有相似的感官质量。电镜扫描观察,干酪成熟过中pH4.6可溶性氮分析,复合凝乳酶Ⅱ的可溶性氮高于皱胃酶干酪制品。     

聚乙二醇修饰对木瓜凝乳蛋白酶酶学及药物生物学性质的影响

采用活化的单甲氧基聚乙二醇（mPEG-5000）对木瓜凝乳蛋白酶（Cp）进行了共价修饰,修饰产物经毛细管电泳检测与分析表明：主产物为平均每分子Cp偶联3—4个mPEG。长链的低修饰度修饰酶．以此修饰酶为研究对象,进行了Cp在修饰前后的主要酶学、药物生物学性质的比较研究．结果表明：Cp经mPEG,修饰后,Kn^app（酪蛋白为底物）有所增加,但与Cp相比,mPEG1修饰酶的pH稳定性、热稳定性以及抗胰蛋白酶的水解能力却均有增强;药代动力学结果还显示,mPEG1-Cp的体内活性半衰期延长,修饰酶体内半衰期是原酶的1．6倍,表明mPEG1修饰酶具有更好的临床应用前景．     

天然干酪生产中凝乳形成的基本机理

干酪是通过酶反应和酪蛋白沉淀,然后把乳清从凝乳中排出而得到的固体凝块。凝乳的形成是制作干酪的关键。介绍了天然干酪的生产工艺,主要研究了在干酪生产中,牛乳在凝乳酶等的作用下形成凝乳的基本原理。     

中草药添加剂对断奶仔猪消化道酶活性的影响研究

 选择30头去势“杜长大”7.0 kg左右的断奶仔猪,随机分成对照1组（空白对照组）、对照2组（添加复合饲用抗生素）和试验组（添加中草药添加剂）。结果表明,中草药添加剂能显著改善断奶仔猪生长性能,并明显提高消化道淀粉酶、脂肪酶、胰凝乳蛋白酶和粘膜二糖酶的活性。     

木瓜凝乳蛋白酶的单链单甲氧基聚乙二醇修饰产物的检测与分析

在底物保护下,采用三聚氰氯活化的单链单甲氧基聚乙二醇(mPEG1)对木瓜凝乳蛋白酶(Cp)进行了共价修饰,反应混合物经毛细管电泳(CE)分析及Sephadex G-75分离纯化获得修饰度为平均每分子Cp偶联3～4个mPEG1长链的修饰纯酶(mPEG1-Cp)．以三硝基苯磺酸(TNBS)法与CE法作对比测定了该修饰酶的平均氨基修饰度;以-ELISA法检测mPEG1-Cp的抗原性;用紫外吸收光谱和荧光发射光谱对mPEG1-Cp进行了结构的测定分析．结果表明：Cp的mPEG1修饰产物经毛细管电泳检测为多组分体系,最大产物峰为平均每分子Cp偶联3～4个mPEG1的低修饰度修饰酶,其相对分子质量为40712～46044;该修饰酶抗原抗体结合能力完全消失,体内活性半衰期是原酶的1．6倍,同时酶活力保持在36．5％;紫外吸收光谱和荧光发射光谱分析表明:mPEG1-cp结构有轻度的改变．     

菜青虫胰凝乳蛋白酶基因PrCT1的克隆及表达分析

胰凝乳蛋白酶是昆虫的主要消化酶,可能参与多种消化以外的生理过程。为了解该蛋白质基因表达特性,基于菜青虫(Pieris rapae)转录组数据,克隆了1个菜青虫胰凝乳蛋白酶基因PrCT1并进行相关分析。该基因编码区全长861 bp,编码286个氨基酸,含有典型的丝氨酸蛋白酶催化三联体(H_(57)、D_(102)、S_(195)),经丝氨酸蛋白酶底物特异性口袋分析,显示其属于胰凝乳蛋白酶。PrCT1与黑脉金斑蝶胰凝乳蛋白酶(GenBank登录号:OWR53227)同源性最高,达到49%,且亲缘关系最近。构建pET28a-PrCT1原核表达重组载体,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株进行原核诱导表达。结果发现,重组PrCT1蛋白以包涵体形式存在,分子质量为33.26 ku。利用实时荧光定量PCR检测菜青虫不同组织中PrCT1 mRNA表达及饥饿、决明胰蛋白酶抑制剂喂食处理后PrCT1 mRNA的表达情况显示,PrCT1基因主要在菜青虫的中肠中表达,且在饥饿、决明胰蛋白酶抑制剂喂食处理后表达水平均下调,推测PrCT1可能是菜青虫中肠中发挥食物消化作用的重要蛋白酶,且可能是重要的抗虫靶点。     

水牛κ-酪蛋白基因（CSN3）外显子4序列多态性研究

 分别设计位于CSN3 5个外显子旁侧引物,采用DNA测序法对沼泽型和河流型水牛CSN3编码区结构进行了分析,并对10个水牛群体共106个样本CSN3第4外显子序列进行了变异检测。结果表明,两类水牛CSN3编码区由848个核苷酸组成,包括ORF序列573 bp、5′-UTR序列69 bp和3′-UTR序列206 bp。在水牛CSN3第4外显子中共检测到4个SNP,其中c.445G>A,c.467C>T和c.516A>C为异义替换,导致相应的κ-CN成熟肽中氨基酸发生p.Val128Ile、p.Thr135Ile和p.Glu151Asp改变,c.467C>T和c.516A>C替换可能对κ-CN功能产生了影响。群体遗传分析表明,在河流型水牛中,等位基因c.445G、c.467C、c.471C和c.516A均为优势等位基因,而在沼泽型水牛中,仅c.445G、c.467C和c.471C为优势等位基因,河流型和沼泽型水牛的遗传差异主要体现在SNP516位点的群体遗传组成上。