体细胞核移植生产转fat-1基因克隆Holstein牛

为培育含ω-3多聚不饱和脂肪酸(ω-3polyunsaturated fatty acids,PUFAs)丰富的转基因奶牛新材料,本试验将fat-1基因转染到Holstein奶牛胎儿成纤维细胞,筛选获得的转基因阳性克隆细胞株,通过核移植方法构建转基因重构胚胎,比较了非转基因与转基因重构胚体外发育情况,并移植到代孕母牛子宫角。妊娠足月产下犊牛后,对犊牛进行转基因的DNA以及mRNA的表达鉴定。结果显示,非转基因与转基因重构胚囊胚率分别为32.1%和28.1%,两者之间无显著差异(P0.05)。受体母牛的妊娠率为66.7%(6/9),其中3头母牛妊娠足月(50%)。自然分娩3头克隆牛,体细胞克隆牛的效率为20%(出生小牛头数/移植胚胎数)。经PCR鉴定,这3头小牛中有1头为转fat-1基因阳性,其余2头均为阴性,转基因阳性率为33.3%。     

白菜(Brassica campestris ssp.chinensis)BcMAX2调控腋芽生长的功能分析

MAX2(MORE AXILLARY GROWTH 2)是独脚金内酯信号转导相关基因，其功能与腋芽生长有关。以白菜（Brassica campestris ssp. chinensis）分蘖菜品种‘马耳头’和普通白菜品种‘苏州青’为材料，探究MAX2对腋芽生长的影响。结果表明：从两种材料中克隆得到的BcMAX2其开放阅读框序列没有差异，‘马耳头’的BcMAX2启动子序列有2个碱基的缺失。亚细胞定位分析表明BcMAX2定位在细胞核。在拟南芥中过表达BcMAX2抑制腋芽生长，BRC1表达量升高。在‘马耳头’中沉默BcMAX2能引起BcBRC1表达量降低并促进腋芽伸长。通过对白菜cDNA文库筛选得到197个与BcMAX2互作的候选蛋白，其中多数候选互作蛋白具有结合活性和催化活性，部分候选蛋白还参与植物的信号转导和逆境响应。通过酵母双杂交和双分子荧光互补技术验证最终得到2个与BcMAX2互作的蛋白。试验表明，白菜BcMAX2可能通过促进BcBRC1的表达来负调控腋芽的生长。     

氮肥用量对水稻宁粳3号稻米品质的影响

大田试验条件下,研究了不同氮肥用量对水稻宁粳3号稻米品质的影响,结果表明:氮肥用量对稻米粒长、粒宽、粒长宽比、糙米率、精米率、碱消值无显著影响。垩白大小、垩白度、垩白粒率随着氮肥用量的增加表现出先升高后降低的趋势。胶稠度、直链淀粉含量以及食味评分均表现出随着氮肥用量的增加而降低。     

玉米新品种通育99

通育99是通化市农科院最新育成的高产高抗优质玉米单交种,审定编号:吉审玉2006042,品种权号:CNA20040153.X。该品种产量高,抗性好,米质优,脱水快,易下棒,容重高,粮好卖。适应广大东北中熟、中晚熟区种植。一、特征特性:1.植株性状:种子拱土能力强,幼苗叶鞘紫色,叶缘绿色,苗齐苗壮,无分蘖,叶片数为20片,半紧凑型,叶片厚,株高270厘米,穗位110厘米。     

黄芩中FNSII-1与CHS-2真核表达载体的构建

[目的]FNSII-1与CHS-2分别是黄芩叶与根中合成黄芩活性物质通路中的关键酶基因,本试验拟通过构建FNSII-1和CHS-2与载体pYES-dest52的重组质粒,进行酵母真核表达,为探索黄芩活性物质体外大规模合成途径奠定基础。[方法]通过设计特异性引物,RT-PCR扩增目的基因,利用Gateway重组技术将目的基因FNSII-1和CHS-2整合至目的载体pYES-dest52上得到重组质粒,随后将其转到酿酒酵母INVSc1菌株中,通过SDS-PAGE检测分析并确定酵母蛋白表达最佳条件。[结果]经RT-PCR扩增得到的目的基因FNSII-1与CHS-2,其片段长度分别为1 491bp、1 205bp,与理论值相符。重组质粒经测序与比对,2个基因与其相应NCBI数据库的信息相似性分别为94.18%和91.77%。酵母菌株在5种不同OD600值下蛋白均能稳定表达。[结论]本研究成功构建了pYES-dest52-FNSII-1和pYES-dest 52-CHS-2重组载体和FNSII-1和CHS-2蛋白表达体系,为黄芩中活性物质的体外合成奠定基础。     

Cloning and Protein Structure Analysis of Hypoxia Inducible Factor-1α Gene in Yak

In this study,hypoxia inducible factor-1α(HIF-1α) gene was cloned from yak spleen by RT-PCR,and it was divided into two sections for amplification.The sequence and protein structure were analyzed using related bioinformatics tools.The length of the coding region was 2 472 bp,which encoded 823 amino acids.Its molecule mass was 92.13 ku,and PI was 5.09.It displayed as a hydrophilic protein,whose secondary structure was mainly composed of random coil and α-helix.It had 69 phosphorylation sites and 4 N-glycosylation sites.Phylogenetic tree displayed that Maiwa yak,Bos grunniens,Bos mutus and Bos taurus gathered into one cluster.Maiwa yak HIF-1α gene was successfully cloned in this study,it provided a viable reference for further study of genetic characteristics of HIF-1α.     

猪博卡病毒VP1蛋白抗原表位分析及其克隆表达

为研究猪博卡病毒(PBo V)VP1蛋白在血清学诊断中的作用,用DNAStar软件预测了PBo V NP08株(Gen Bank登录号KR014255.1)VP1蛋白的主要抗原表位,确定1-334个氨基酸为优势抗原表位区,构建重组质粒p ET32a-VP1,将其转化感受态细胞BL21(DE3),并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子量为56.7 ku的重组蛋白VP1,主要以包涵体形式存在。纯化后蛋白的Western blot结果表明,表达的VP1蛋白与临床阳性血清具有良好的反应性。用该蛋白包被ELISA板,检测10份临床感染PBo V的猪血清样品和3份未感染猪的血清,结果表明其具有很好的特异性,不与未感染猪的血清发生反应,为建立PBo V感染血清学诊断方法奠定了基础。     

马鞍山地区皖椒10号早春辣椒多层覆盖栽培技术

近年来我市从安徽省农业科学院园艺研究所引进大果型早熟辣椒品种皖椒10号，经两年试种，种植效益较好。该品种在早春低温、弱光环境下座果率高，整个生长势强，株型松散， 全生育期131 天。相对于老品种可适当推迟播种，减少管理成本。多层覆盖为钢架大棚棚膜、室内小拱棚膜、小拱棚膜上无纺布、地膜共四层覆盖。棚型为二代塑料大棚（GP—C9532型复式日光温棚）。播种方式为平盘撒播（2叶1心时分苗）或 50孔穴盘播种，播后覆膜，采用地热线辅助加温，加盖无纺布保温。病虫害防治原则以预防为主、综合防治，优先采用农业防治、物理防治、生物防治，科学使用化学农药防治。     

中矮1号矮化中间砧对三季梨生长发育和结果影响的研究初报

三季梨（Dr.Jules Guyot）又称伏巴梨、线梨等,其肉质细腻、柔软多汁,是我国西洋梨主栽品种之一,目前在辽南半岛、山东半岛等地广泛栽培。乔化砧嫁接的三季梨结果前营养生长旺盛,拉枝、修剪等工作量大。中矮1号是中国农业科学院果树研究所选育的梨半矮化砧木,是从锦香梨（南果梨×巴梨）实生后代选育出来的,具有西洋梨系统血缘。本试验是利用中矮1号的矮化作用,来达到矮化树体、早结果、早丰产、方便田间管理的目的。