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101.
RT—PCR一步法检测鸡传染性支气管炎病毒的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
根据已发表的IBVS基因核苷酸序列,自行设计合成了一对跨幅约0.9kb的引物。该区段包括了S1基因C末端的400bp和S2基因N末端的500bp。用该引物对5株IBV参考毒株Gray、M41、H120、H52和MA5进行RT-PCR一步法扩增均获得预期的PCR产物,该引物的RT-PCR灵敏度检测结果表明,可以检测出0.112pg/μL的模板。用该引物对30个地方分离株进行检测,18株呈阳性,与鸡胚传代及电镜观察结果一致。 相似文献
102.
嗜水气单胞菌HEC毒素单克隆抗独特型抗体研究 总被引:2,自引:0,他引:2
用嗜水气单胞菌HEC毒素免疫Balb/C小鼠,通过一次性杂交瘤融合,在筛选HEC毒素单克隆抗体(McAb1)的同时,用兔抗HEC毒素血清(PAb)包板的ELISA方法,筛选到两株抗HEC毒素的单克隆抗独特型抗体(McAb2)。两株McAb2腹水ELISA效价分别为1:20480和1:5120,属于IgG1亚类。HEC毒素的模拟抗原McAb2不能溶解人的O型红细胞,但能与相应的PAb反应,并能阻断PAb与HEC毒素的结合。将McAb2连接到同源小鼠红细胞(MRBC)后免疫小鼠,用HEC毒素包板的ELISA检测其血清,呈阳性结果,说明McAb2能模拟HEC刺激机体产生抗HEC毒素的抗体(Ab3)。 相似文献
103.
104.
根椐GenBank 中已发表的美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)2 种病毒基因序列,分别设计2 对引物。在建立2 种病毒单项一步法RT-PCR 检测方法的基础上,优化一步法二重RT-PCR 反应条件,建立了2 种病毒的一步法二重RT-PCR 检测方法,用这2 对引物对同一样品中的美洲型PRRSV、欧洲型PRRSV 核酸模板进行一步法二重RT-PCR 扩增,结果可同时扩增美洲型PRRSV 的265 bp 和欧洲型PRRSV 的451 bp 的特异性片段,而对其他4 种猪病原的扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明,该方法能检出10 pg 的美洲型PRRSV 和10 pg 的欧洲型PRRSV 模板。通过对175 份临床病料检测,将建立的一步法二重RT-PCR 技术和单项一步法RT-PCR 方法进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为100%。表明建立的一步法二重RT-PCR 检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对美洲型和欧洲型PRRSV 的同时检测和鉴别诊断。 相似文献
105.
苹果褪绿叶斑病毒一步法RT-PCR检测 总被引:1,自引:0,他引:1
RT-PCR技术在植物病毒检测方面有着快速、灵敏、特异性强等优点。然而传统的RT-PCR是在两个酶(逆转录酶和Taq酶)分别催化下在两个体系中的两步反应,即由RNA逆转录为cDNA,再以模板cDNA进行PCR扩增,操作步骤比较繁琐,而且很容易造成交叉污染。笔者建立的一步法RT-PCR是在逆转录酶(M-MLV)和Taq DNA聚合酶共同作用下,只需在一个反应管中就可以完成反转录和cDNA扩增的全过程,两个步骤一步完成,以达到对苹果褪绿叶斑病毒快速、简便、敏感的检测。 相似文献
106.
不同添加物对石斛兰壮苗生根的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
以石斛兰(Den. Sharifa Fatimah)幼芽为材料进行组织培养研究.结果表明:苹果是对石斛兰壮苗生根较有效的水果添加物;对具备根、茎、叶分化的小苗可以3 g/L花宝1号+MS(除大量元素外其余全量)+苹果1.7%+香蕉1.7%+马铃薯1.7%培养基采用"一步法"壮苗生根;对于较弱小的丛生苗宜用2 g/L花宝1号+MS(除大量元素外其余全量)+苹果1.7%+香蕉1.7%+马铃薯1.7%及3 g/L花宝2号+MS(除大量元素外其余全量)+苹果1.7%+香蕉1.7%+马铃薯1.7%采取"两步法"壮苗生根;鉴于花宝2号的长效性,可选择用于长期保存组培材料. 相似文献
107.
108.
109.
为了建立一种能够同时、快速鉴别检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCV)的方法,根据BVDV 5’UTR基因、BEV 5’UTR基因、BRV VP6基因、BCV N基因设计引物,建立了能够同时鉴别检测BVDV、BEV、BRV、BCV的四重一步法RT-PCR方法,该方法检测IBRV、BPIV-3、BRSV均为阴性,对BVDV、BEV、BRV、BCV的核酸检测下线分别为3.28、28.2、23.6、25.0 pg,与现有标准或商品化RT-PCR试剂盒的符合率均为100%,批内和批间重复性试验的检测结果均完全一致,检测222份临床样品的BVDV、BEV、BRV、BCV阳性率分别为15.32%、18.02%、6.31%和4.05%。说明四重一步法RT-PCR方法特异性好、灵敏度高、稳定性强,可用于BVDV、BEV、BRV、BCV的临床鉴别诊断、流行病学调查以及疫病防控。 相似文献
110.
一步法扩增IBDV上海株全长基因组cDNA 总被引:1,自引:0,他引:1
为了研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)上海株的全部核苷酸序列,应用蛋白酶K消化、割胶纯化获得了高纯度的dsRNA,应用随机引物合成了cDNA的第一链。参照基因库中相关IBDV毒株的基因序列,设计合成了两对引物,一步扩增出IBDV上海株全长基因组cDNA的A片段和B片段。为了验证获得的A片段和B片段的正确性,以扩增出的A片段为模板,成功扩增出的IBDV的VP2基因,并应用T载体进行了克隆和测序,测序结果显示,其与国内外数株IBDV毒株的同源性很高,表明醉建立的扩增IBDV全长基因组cDNA的一步法正确、可行。 相似文献