双抗体夹心ELISA检测水牛γ-干扰素方法的建立及初步应用

纯化2株针对水牛γ-干扰素的单克隆抗体,其中1株进行HRP标记作为检测抗体,另1株单抗作为捕获抗体,建立检测水牛γ-干扰素的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)。通过对封闭液、抗体稀释液等条件进行优化,经过方阵滴定试验确定捕获抗体的最佳浓度为625 ng/mL,检测抗体的工作效价为1∶100;所建立的DAS-ELISA方法检测灵敏度25 ng/mL,批内变异系数为0.52%～6.86%,批间变异系数为5.6%～7.07%。采集60头单次皮内注射结核菌素的水牛肝素钠抗凝全血,利用牛结核杆菌特异性抗原rHIS-CFP10/ESAT-6融合蛋白体外刺激外周血淋巴细胞释放IFN-γ,用所建立的夹心ELISA检测所有样本,与皮内变态反应试验比较,结果显示,自制夹心ELISA方法检测水牛结核病的敏感性为62%,特异性为87%,符合率为75%,表明可应用于水牛结核病的检测。     

黑麦草属28个引进品种辐射子一代的生长性状比较

本研究利用400、500 Gy的60Co γ射线辐射28个欧洲引进黑麦草（Lolium）干种子,结合大田试验比较了辐射对不同黑麦草品种发芽、分蘖数、株高、鲜质量、抽穗期等生长性状的影响。结果表明,28个品种对γ 射线辐照处理的反应存在明显差异,Gordo、Ligrande、Barmultra对60Co γ射线敏感,低剂量处理即导致死亡,高剂量处理后Remy、Bartissimo死亡。γ 射线辐照处理能够改变黑麦草分蘖数、株高、鲜质量、抽穗期等生长性状,并显著增加Zarastro、Barfort、Tosca、Orlando诱变材料的分蘖数,Lolita诱变后植株高度和鲜质量比未辐照处理材料高20%以上,表明60Co γ射线辐照处理是快速提高牧草分蘖数、株高和鲜质量的有效途径之一,可作为新材料用于进一步的新品种选育。     

犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒的真核共表达及免疫学评价

为对犬孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒进行免疫学评价,本实验以含有MAG1-IFN-γ基因片段的克隆质粒为模板,扩增MAG1-IFN-γ目的片段,构建pVAX-MAG1-IFN-γ重组真核表达质粒,将其转染Vero细胞,采用间接免疫荧光(IFA)和western blot技术检测MAG1基因在Vero细胞中的表达,并免疫BALB/c小鼠,进行免疫学评价。结果表明,PCR扩增获得基因片段大小为1 536 bp,与GenBank中登录的MAG1和IFN-γ核苷酸序列的同源性为99%;IFA检测MAG1基因在Vero细胞中获得瞬时表达,转染的Vero细胞呈现特异性绿色荧光;western blot分析表达蛋白的分子量为57 ku,具有较好的反应原性。将构建的重组真核表达质粒免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和T淋巴细胞亚群含量测定表明,重组质粒具有较好的免疫原性。本实验为新孢子虫病核酸疫苗的深入研究奠定了基础。     

肺炎链球菌感染的猕猴肺及气管内IFN-γ蛋白与mRNA表达

采用常规苏木精-伊红(hematoxylin-eosim,HE)染色、免疫组织化学和组织原位杂交技术,观察感染肺炎链球菌的猕猴肺及气管组织的病理学变化与γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)在其中的蛋白与mRNA表达.结果表明:在光镜下感染组的肺呈现大面积充血、出血,淋巴细胞浸润及肺泡腔内出现浆液性渗出物;IFN-γ蛋白表达面积均高于健康组(P<0.05);IFN-γ蛋白产物在肺血管内的光密度值极显著高于健康组(P<0.01),在气管和肺的其他部位光密度值显著高于健康组(P<0.05);IFN-γmRNA在肺气管上皮层、肌层内阳性产物的光密度值均极显著高于健康组(P<0.01),肺泡隔、血管内、气管固有层内阳性产物的光密度值均显著高于健康组(P<0.05).说明肺炎链球菌感染的猕猴肺出现了明显的红色肝变期病理变化,且肺及气管中IFN-γ蛋白及mRNA表达显著增加,表明IFN-γ在肺炎链球菌感染猕猴肺及气管的免疫调节中起到了重要作用.     

辐照灭菌对10种中药有效成分含量的影响

用不同剂量的γ射线对10种中药材进行灭菌试验，并测定其辐照前后有效成分的变化。结果表明，灭菌剂量下的γ射线辐基本不影响10种中药材的有效成分含量。     

Study on the Phenotypic Mutation Generated from ~(60)Coγ-ray Irradiated Oxlias triangularis Purpurea Regeneration System

Mutations induced from tissue culture are easily to be separated,which might be propagated in the same medium,especially for the color-leaf ornamental grass,Oxalis triaggularis purpurea.Mutations of the ornamental traits in the tissue culture bottle could be investigated easily.The 35 d regeneration system group showed the lowest adventitious bud number and adventitious root number among 4 inoculation dates by 50 Gy dose of ~(60)Coγ radiation.More studies were carried out based on the 35d differentiation state of O.triangularis purpurea regeneration system.The 35 d regeneration system was then irradiated by 10,25 and 50 Gy doses of ~(60)Coγ rays.Numbers of adventitious buds and roots induced from the regeneration system were cut down with the increment of radiation doses.Seedling length was not distinctly reduced at the absorbed doses of 10 and 25 Gy,but reduced distinctly under 50 Gy of ~(60)Coγ irradiation.The optimal irradiation dose for 35 d O.triangularis regeneration system survival and mutation induction was approximately 25 Gy.The M_2 phenotypic mutation rate was 2.9%,especially,and the leaf number mutation accounted for 76%of the total mutation.The phenotypic mutations,especially in the 10 Gy group,on 0.1 m M Vc containing MS medium were recovered,which indicated that ROS plays a key role in the phenotypic mutation induced by ~(60)Coγ -rays.     

60Co-γ辐照对洋紫荆种子萌发及幼苗生长的影响

为了探讨辐照对洋紫荆种子萌发及幼苗生长的影响,本研究分别采用不同辐照率和辐照时间的^60Co-γ射线辐射洋紫荆(Bauhinia variegata)种子。结果表明:总辐照剂量相同时,不同辐照率对洋紫荆种子的出苗率和成苗率没有显著影响;在0~375Gy辐射剂量内,对照组(0Gy)的出苗率和成苗率最高,分别为82.67%和74.00%,随着辐照剂量的增加,出苗率和成苗率呈非线性逐渐降低的变化趋势,致死剂(量)为375Gy。γ射线辐照处理获得的诱变苗株高、地径和相对叶绿素含量同样受剂量效应的影响,尤其是225Gy的辐照剂量能够显著增加洋紫荆地径和相对叶绿素含量。     

水蜜桃果皮中色素和芳香物质变化与其内在品质的相关性

为了探讨果皮色泽和芳香族化合物含量与果实内在品质的关系,以‘湖景蜜露’水蜜桃为试材,对果皮色泽及其所含芳香族化合物和果肉中糖酸含量进行测定。结果表明,果皮中花色苷含量的上升伴随着叶绿素和类胡萝卜素含量的下降。1-己醇、顺-3-己烯醇、己醛、反式β-紫罗兰酮、乙酸乙酯、乙酸己酯、γ-六内酯、δ-癸内酯和γ-癸内酯为果皮中特征性芳香族化合物。果肉中蔗糖、果糖和葡萄糖含量与果皮花色苷含量呈极显著正相关,果肉中苹果酸和奎宁酸含量与果皮中花色苷含量呈极显著负相关,果肉中蔗糖、果糖和葡萄糖含量与果皮中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量呈显著负相关,果肉中苹果酸和奎宁酸含量分别与果皮中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量呈显著正相关。己醛、乙酸乙酯和γ-六内酯与果实内在品质关联度较高。调控果皮特征性物质的代谢是提升果实内在品质的一种途径。     

辐照对烟草抗氧化酶活性的影响

以K326烟草植株为材料,研究了60Co-γ射线辐照对烟草叶片抗氧化酶活性及其基因转录水平的影响。结果表明,经300Gy 60Co-γ射线辐照后0~48 h期间,烟草叶片的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)三种抗氧酶活性以及其相应酶基因转录水平都逐渐提高,SOD、POD和CAT酶活性及其基因转录水平在12 h均达最大值,三者的活性及其基因转录水平随后都逐渐降低。我们的实验结果表明烟草叶片的抗氧化酶活性在其耐辐射能力起了重要作用。