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71.
新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的表达 总被引:4,自引:1,他引:4
用SPF鸡胚繁殖新城疫病毒(NDV)F46E9株(强毒)、LaSotaE4株(弱毒),对病毒进行纯化,抽提RNA。用1对均为27个碱基的引物进行RT-PCR,扩增出了2个毒株的融合蛋白裂解位点(Fc)基因。将Fc基因定向克隆入pUC18的EcoRI和SalⅠ位点之间,获得2个毒株Fc基因克隆pUCF46Fc和pUCLaFc,用EcoRI/SalⅠ双酶切法、PstⅠ单酶切法、PCR法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的LaSotaE4Fc基因定向导入表达载体质粒pBV221,获得重组子pBVLaFc。PCR和内切酶酶切法鉴定表明,Fc插入的位置和方向都正确无误。用E.coliDH5α通过热诱导法进行了表达。用SDS-PAGE和Western-blot法检测了表达产物。结果表明,有1条能够与NDV多抗反应的特异条带,分子量约15700,与预期大小一致,说明是Fc基因的表达产物 相似文献
72.
[目的]通过研究羊胎盘转移因子注射液对实验动物免疫球蛋白、B淋巴细胞和抗体形成细胞数量变化的影响,探讨受试药品对实验动物体液免疫的调节作用,进而评估其临床体液免疫调节的使用价值。[方法]试验1:用小白鼠进行免疫球蛋白测定试验,比较给药前后小白鼠血清免疫球蛋白的变化;试验2:用大白兔进行EAC玫瑰花环试验,测定给药前后B淋巴细胞数量的变化;试验3:用小白鼠进行溶血空斑试验,比较试验组和对照组抗体形成细胞数的变化。[结果]试验1:试验组小白鼠血清免疫球蛋白含量显著提高(P<0.05);试验2:试验组受试动物EAC玫瑰花环的成环细胞数显著高于对照组(P<0.05);试验3:试验组小白鼠抗体生成细胞的数量极显著增加(P<0.01)。[结论]羊胎盘转移因子注射液对受试动物体液免疫有显著调节作用。 相似文献
73.
74.
将克隆到pGEM T-easy载体中的E0基因双酶切回收后,连接到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)中,利用LipofectamineTM2000将重组子转染PK-15、BHK-21、VERO 3种细胞,直接在荧光显微镜下用蓝光激发进行观察,在3种细胞中都可以观察到绿色荧光,而且在转染后的24、48、72 h 3个时间点上,观察到的荧光细胞数量逐渐增多,在72 h时荧光细胞的数量在3种细胞中都达到最多,总的来看,在PK 15中荧光细胞的数量最多。通过对细胞荧光的定位发现,重组质粒的荧光主要分布在胞浆内,而且细胞核周围的荧光较强,胞核与胞浆的界限明显,尤其是在PK-15细胞和VERO细胞中这种现象尤为明显。未携带E0目的DNA的pEGFP-N1 Vector转染3种细胞后,都可以观察到绿色荧光,但是整个细胞中是均匀出现荧光的。经酶切、PCR、单抗间接免疫荧光检测,PK-E0细胞中有大量的HCLV的E0表达,单纯的PK-15细胞中没有E0的表达。HCLV株在PK-E0细胞中从48h开始到72h的滴度比在PK-15细胞中的滴度要高。证明PK-E0细胞中E0蛋白的大量表达增加了HCLV在细胞中的复制。 相似文献
75.
噬菌体表面展示技术的发展及应用 总被引:2,自引:0,他引:2
随着噬菌体展示技术自身建库、筛选方法等方面的进一步改进和完善,目前已被广泛应用于生命科学的许多领域,特别是噬菌体表面展示技术在蛋白质相互作用方面的成功应用,为筛选新的结合蛋白提供了一种简单、有效的手段,还为功能基因组学的研究提供了一个新的方法。该技术还在药物研制和疾病机理方面显示出很大的应用潜力,目前已成为筛选对人类疾病有诊断和治疗价值的生物活性分子的重要手段,并已广泛用于癌症、艾滋病、心血管病、组织器官移植、神经性疾病等领域药物的研究和开发。 相似文献
76.
家蚕病原性微孢子虫孢子表面蛋白的选择性分离与总蛋白比较分析 总被引:2,自引:2,他引:2
选择性分离了Nosemabombycis孢子表面蛋白和总蛋白,采用SDS-PAGE检测发现,孢子表面蛋白由分子量不同的3种亚基(32000、26000、24500Da)组成,其总蛋白至少包括25个条带。同时将从养蚕生产中收集到的两种微粒子MA-1和MD-1以及从野外昆虫收集到的微孢子虫Pha-M和Ha-M与N.bombycis进行了比较,发现不同微孢子虫间蛋白组成有差异。 相似文献
77.
本试验旨在研究日粮粗蛋白质水平对黄羽鹌鹑产蛋性能和血液生化指标的影响。以粗蛋白质水平分别为:17.75%、19.95%、21.85%、24.08%的日粮作为4个处理(处理1、2、3、4),选用35日龄蛋用黄羽鹌鹑120只随机分为4组,每组3个重复,每个重复10只。试验预试期15 d,正试期30 d,试验结果表明:不同蛋白质水平的处理,平均蛋重差异不显著(P>0.05);处理2的平均产蛋率显著高于其他处理(P<0.05);料蛋比显著低于其他处理组(P<0.05);处理1的干物质采食量显著高于处理3和处理4(P<0.05);谷丙转氨酶处理1(17.75%)显著低于处理3(21.85%)(P<0.05)。谷草转氨酶各处理差异不显著(P>0.05);处理3(21.85%)的血清总蛋白显著高于处理1(17.75%)(P<0.05),其他处理血清总蛋白差异不显著(P>0.05);血清尿氮和磷各组差异不显著(P>0.05),血清尿氮处理2(19.95%)最高,磷处理1(17.75%)最高。结果表明,日粮粗蛋白质水平对黄羽鹌鹑产蛋性能和部分血清生化指标有显著影响。 相似文献
78.
抗猪输血传播病毒1型Cap蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
为制备抗猪输血传播病毒1型(TTV1) Cap蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究采用PCR法扩增TTV1ORF1 (1501nt~2475nt)编码重组Cap蛋白的C末端截短序列,将PCR产物克隆于pGEX-6P-1载体中,并在大肠杆菌Rosetta (DE3)菌株中诱导表达,获得含GST标签的重组蛋白(rCap),经SDS-PAGE和western blot鉴定表明rCap约为64.0.ku,以包涵体形式存在.用纯化的rCap免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术获得8株稳定分泌抗rCap蛋白的杂交瘤细胞株,MAb亚类均为IgGl/κ型;western blot鉴定表明有7株MAbs与rCap产生特异性反应,另1株MAb呈阴性.为验证8株MAbs与真核表达的Cap蛋白的免疫反应性,将全长与截短的TTV1ORF1基因片段克隆于pcDNA3.1载体,转染293T细胞进行蛋白瞬时表达,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法检测表明,这8株MAbs均能够与瞬时表达的全长rCap产生特异性反应,其中6株与截短表达的rCap反应.本研究表达的rCap蛋白及制备的MAbs,为该病毒检测方法的建立及抗原表位的鉴定奠定了基础. 相似文献
79.
80.
为探索简化的核移植程序,本研究分析不同成熟培养时间、去核过程中紫外光照时间、融合电压强度、激活剂种类、不同培养方法对绵羊去透明带卵母细胞核移植的影响。结果表明:卵母细胞成熟培养18~19 h后去除透明带,其极体排出和附着效果最佳。采用1.9 kV/cm直流电压融合去核卵母细胞与颗粒细胞,融合率为88.2%,效果最好。离子霉素对重构胚具有较好的激活效果,卵裂率为82.1%,囊胚率为10.4%;压制WOW(s孔中孔)发育组卵裂率和囊胚发育率与四孔板培养组相比无显著差异,但卵裂率和囊胚发育率并不高;去除透明带的绵羊卵母细胞采用衰减1/4的UV照射10 s辅助去核后,卵裂率为35.6%,但重构胚未能发育至囊胚。结果显示,通过去透明带辅助显微操作去核的方法进行的绵羊体细胞克隆程序较易掌握。 相似文献