西藏低温放线菌的多样性及其生物活性

【目的】研究西藏低温环境下放线菌的组成及其抑菌效果和酶活性,为放线菌新药物先导化合物和高活性酶的筛选提供资源。【方法】从西藏低温地区采集16份土样,用平板稀释法分离放线菌,经形态学和培养特征初步鉴定后得到有代表性的低温放线菌,对这些代表性菌株的16S rRNA基因序列进行系统发育分析,对其进行鉴定;采用菌丝生长速率法测定代表性低温放线菌菌株发酵液对11种农作物真菌的抑菌活性,并对其纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等活性进行测定。【结果】从16份土样中共分离到22株有代表性的低温放线菌,其在10~25℃均能生长。16S rRNA基因序列分析表明,这22株菌分布于放线菌门放线菌纲2个亚目3个科的3个属,即链霉菌亚目(Streptomycineae)链霉菌科(Streptomycetaceae)链霉菌属(Streptomyces)、假诺卡氏亚目(Pseudonocardineae)束丝放线菌科(Actinosynnemataceae)伦茨氏菌属(Lentzea)和假诺卡氏亚目(Pseudonocardineae)假诺卡氏菌科(Pseudonocardiaceae)拟无支酸菌属(Amycolatopsis),其中以链霉菌属最多,占分离菌的91%。在分离的22株代表性低温放线菌菌株中,27.3%的菌株有抑菌活性;40.9%的菌株具有纤维素酶活性,22.7%的菌株具有淀粉酶活性,18.2%的菌株具有蛋白酶活性。【结论】西藏低温生境中蕴藏着丰富的低温放线菌资源,其中一些菌株具有拮抗活性和酶活性。     

海洋放线菌F-1013对几丁质的利用及其发酵液的优化

研究了分离自海洋虾壳的一株放线菌F-1013对几丁质的利用及其发酵液的优化。结果表明：该菌具有较高的几丁酶活力。通过对该菌发酵液的筛选和优化,认为该菌在pH8-9、5%的虾壳粉培养液中发酵5-7d,甲壳低聚糖含量达到0.3mg.mL-1,产菌量优于其他基质的培养基。     

海洋微生物活性物质的研究进展

对海洋放线菌、海洋细菌、海洋真菌及海洋微藻产生的生物活性物质进行综述。     

广谱拮抗放线菌C28的鉴定及其对甜瓜蔓枯病的防治效果

【目的】研究放线菌C28对12种植物病原真菌的抑菌作用及对盆栽甜瓜蔓枯病的防治效果,并对该放线菌进行分类鉴定。【方法】采用琼脂块法、生长速率法研究放线菌C28对靶标病原真菌的抑菌作用;通过盆栽试验研究C28对甜瓜蔓枯病的防治效果;根据形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析确定C28的分类地位。【结果】①放线菌C28对供试病原真菌具有一定的广谱拮抗性,拮抗圈直径为10.0～22.5 mm;其无菌发酵滤液对病原真菌菌丝生长具有明显的抑制作用,无菌发酵滤液原液对木贼镰刀菌（Fusarium equiseti）、层出镰刀菌（F.proliferatum）及葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）的抑菌率分别高达95.0%,90.0%及93.1%。②用放线菌C28无菌发酵滤液稀释10⁴倍处理甜瓜种子后,甜瓜胚轴、胚根长度较对照（无菌水处理）增加37.1%和12.5%;种子简明活力指数高达141.7,与对照差异显著（P<0.05）。③用C28无菌发酵滤液原液喷施处理后,甜瓜蔓枯病病情指数较对照显著下降（P<0.05）,预防和治疗效果分别为42.4%和40.0%。④根据形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析,将放线菌C28鉴定为球孢链霉菌球孢亚种（Streptomyces globisporus subsp.globisporus）。【结论】球孢链霉菌球孢亚种C28对多种病原真菌具有广谱拮抗性,对甜瓜蔓枯病具有良好的抑菌和生防效果,对瓜类种子萌发和生长具有一定的促进作用。     

放线菌HN20对黄瓜和生菜的促生作用

为探究放线菌HN20菌株对黄瓜、生菜的促生潜力,通过培养皿法及盆栽法,测定不同浓度放线菌HN20发酵液处理黄瓜、生菜的各项生长指标。结果表明:HN20发酵液对黄瓜促生作用不明显,对生菜促生作用显著;100倍发酵稀释液能明显促进生菜各项生长指标,尤其能显著增加植株可溶性糖的含量,提高植株的根系活力。     

New Benzoxazine Secondary Metabolites from an Arctic Actinomycete

Two new secondary metabolites, arcticoside (1) and C-1027 chromophore-V (2), were isolated along with C-1027 chromophore-III and fijiolides A and B (3–5) from a culture of an Arctic marine actinomycete Streptomyces strain. The chemical structures of 1 and 2 were elucidated through NMR, mass, UV, and IR spectroscopy. The hexose moieties in 1 were determined to be d-glucose from a combination of acid hydrolysis, derivatization, and gas chromatographic analyses. Arcticoside (1) and C-1027 chromophore-V (2), which have a benzoxazine ring, inhibited Candida albicans isocitrate lyase. Chromophore-V (2) exhibited significant cytotoxicity against breast carcinoma MDA-MB231 cells and colorectal carcinoma cells (line HCT-116), with IC₅₀ values of 0.9 and 2.7 μM, respectively.     

根结线虫拮抗放线菌的筛选及菌株HA10002的鉴定与活性物质分析

为了筛选获得对根结线虫具有拮抗能力的强活性放线菌菌株,并从菌株中发现新的杀线虫活性化合物,从海南东寨港红树林采集海泥样品9份,从五指山原始森林等地采集土壤样品51份,用平板稀释法对海泥和土壤样品进行分离;以南方根结线虫2龄幼虫为靶标线虫,采用24孔细胞培养板液体线虫法进行初筛和复筛;根据形态特征、培养特征、生理生化特征和16S rDNA序列对复筛出的活性菌株进行鉴定;菌株发酵液经溶媒萃取、硅胶柱层析、Sephadex LH 20凝胶过滤和制备薄层板层析,采用活性跟踪法从中分离纯化杀线虫活性化合物;化合物经光谱及波谱分析和文献对照,进行结构鉴定。从60份样品中分离得到356株菌落形态有差异的放线菌。初筛得到16株对根结线虫校正死亡率在80%以上的菌株,复筛获得3株线虫校正死亡率在95%以上的菌株,其中分离自海泥样品中的菌株HA10002抗线虫活性最强,发酵原液的校正死亡率达100%。HA10002经鉴定为白浅灰链霉菌,从其发酵液中分离获得2个活性化合物,其中A26 3为Nocardamine,A22 1的结构正在进一步鉴定中。上述结果表明,筛选出的放线菌HA10002能合成2种以上杀根结线虫的活性代谢产物,是一株遗传稳定且具有开发潜力的活性菌株。     

土壤拮抗放线菌的分离及其抗菌活性筛选

以常见植物病原真菌和细菌为指示菌,从分离的422株放线菌中筛选出28株可代谢抗细菌活性物质的菌株,其中N331、N393菌株发酵液对供试12种真菌有显著的抑制作用。离体条件下,N331、N393菌株发酵液对供试真菌菌丝生长的抑制中浓度(EC50)均小于15 mL/L;对玉米弯孢病菌、棉花枯萎病菌、小麦根腐病菌、黄瓜霜霉病菌孢子萌发的EC₅₀亦小于15 mL/L。盆栽试验结果表明,N331、N393菌株发酵原液对黄瓜霜霉病的保护效果分别为97.4%和85.6%,治疗效果分别为83.3%和59.3%。     

花生白绢病互作研究进展

花生白绢病是由齐整小核菌Sclerotium rolfsii Sacc.引起的发生在花生茎基部的真菌病害,严重制约花生的品质与产量。本研究利用稀释涂布法从怀牛膝根际土壤中分离纯化了116株放线菌,并从中筛选鉴定了能够防控花生白绢病的菌株。通过平板对峙试验筛选得到两株抑菌活性较好且稳定的菌株Soil-1-5和Soil-3-28,它们对齐整小核菌的抑制率分别为80.43%和92.34%。根据形态学观察、生理生化试验及16S rRNA基因序列分析鉴定,两株菌分别被鉴定为疮痂链霉菌Streptomyces scabiei和藤黄灰链霉菌Streptomyces luteogriseus。采用菌丝生长速率法测定了拮抗菌株无菌发酵滤液对植物病原菌的抑制作用。结果表明,菌株Soil-1-5和Soil-3-28的无菌发酵滤液稀释5倍后对齐整小核菌的抑制率分别为73.67%和57.11%,且对禾谷镰孢菌等6种植物病原菌均有不同程度的抑制作用。此外,两菌株的无菌发酵滤液对齐整小核菌菌核萌发和菌核形成也有较好拮抗作用。盆栽试验结果表明,菌株Soil-1-5和Soil-3-28对花生白绢病的防治效果分别为51.92%和31.74%,其中菌株Soil-3-28对花生生长有促进作用。综上,菌株Soil-1-5和Soil-3-28对花生白绢病有较好的防治效果,具有潜在应用价值。

     

防治辣椒疫病的生防放线菌固体发酵培养基优选试验

采用固体发酵的方式研究了2株防治辣椒疫病生防放线菌固体发酵培养基的种类和配方。结果表明:采用固态发酵工艺培养2株生防放线菌可获得活孢子数高的生防菌剂。玉米粉是适于A3和A5的2株放线菌固态发酵优良C、N源物质,玉米粉Ⅴ培养基可作为2株生防放线菌共同发酵的固态培养基质。