尼帕病毒流行病学研究进展

尼帕病是由副黏病毒科中的尼帕病毒引起的新型烈性人畜共患传染病,其严重威胁人类与猪等动物的健康。作者就尼帕病毒的病原学特征、流行病学和临床症状等进行了概述,以期初步了解尼帕病毒。     

MDCC—MSB1培养基上清液中DNA活性的定性研究

将 Ｍ Ｄ Ｃ Ｃ Ｍ Ｓ Ｂ１ ４８ 小时培养物 １０００ｒ／ｍ ｉｎ 离心的上清液分别用 Ｒ Ｎ Ａ 酶、 Ｄ Ｎ Ａ 酶和蛋白酶 Ｋ 处理后,进行体外试验。结果表明,只有 Ｄ Ｎ Ａ 酶处理后的上清液失去了体外抑制 Ｍ Ｄ Ｖ“８１４”增殖的作用。将该上清液 １００００ｒ／ｍ ｉｎ 离心所得的沉淀分别用上述酶处理后进行体内试验。结果表明,只有 Ｄ Ｎ Ａ 酶处理的样品失去了体内促进 Ｍ Ｄ Ｖ 京１ 株致瘤的作用。同时,电泳分析结果证明,该上清液中确实存在 Ｄ Ｎ Ａ。     

减蛋综合征病毒末端片段的克隆及细胞内DNA重组

采用９～１０日龄非免疫鸭胚增殖的减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＡＡ－２毒株,经差速离心法浓缩纯化后,提取病毒基因组ＤＮＡ。采用碱变性法除去病毒基因组共价结合的末端蛋白（ＴＰ）。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ水解纯化的ＥＤＳＶ基因组ＤＮＡ。经低熔点琼脂糖凝胶电泳后,回收Ｃ、Ｄ、Ｅ片段。克隆到ｐＵＣ１９载体的ＨｉｎｄⅢ和ＳｍａⅠ双酶切位点及ＨｉｎｄⅢ位点上,经蓝白斑筛选和单、双酶切鉴定,获得了ｐＵＨＣ、ｐＵＨＤ、ｐＵＨＥ重组质粒,其中ｐＵＨＣ含有末端片段。将ＥＤＳＶＳａｌⅠ水解产生并回收的大片段与ｐＵＨＣ在９５℃水浴中变性,６５℃复性后,用钙离子介导法,共转染５０％～７０％的单层鸭胚成纤维细胞,转染后３６ｈ开始产生细胞病变（ＣＰＥ）。４８ｈ后将病变细胞反复冻融,经尿囊腔接种９～１０日龄鸭胚,回收的尿囊液能凝集鸡红细胞,这种血凝性能被ＥＤＳＶ高免血清抑制,电镜下观察到腺病毒样颗粒。     

脑心肌炎病毒及其蛋白结构和功能研究进展

脑心肌炎病毒(EMCV)是一种重要的人畜共患病病原,高危感染动物是猪,自然宿主是啮齿动物,人也可以感染这种病毒。也有研究报道,病毒可分解为前体蛋白P1、P2、P 3和L蛋白,最终切割成11个蛋白终产物,其中VP1蛋白存在主要抗原表位,具有良好的中和作用。目前尚不能阐明病毒感染后的发病机制,宿主感染病毒的影响因素等。因此,对病毒特性进行的研究有助于对该病的预防及控制,对病毒基因组及它所编码蛋白的结构与功能的研究对新型疫苗及动物机体的抗感染免疫机制的研究有重要的生物学作用。论文综述了脑心肌炎病毒基因组结构及其编码蛋白的结构和功能。     

猪流行性腹泻病毒ORF3和M基因的克隆与序列分析

为了解福建省猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)毒株ORF3和M基因变异情况,本研究从4个不同规模猪场发生仔猪“顽固性腹泻”疾病的病料中扩增到4株PEDV的ORF3和M基因,并进行了序列分析.结果表明:4株PEDV ORF3基因均含有675个碱基,编码224个氨基酸,与GenBank中登录的代表性PEDV核苷酸的同源性为89.7％～100.0％,氨基酸的同源性为94.7％～99.6％,其中FJPT毒株核苷酸的同源性与CV777 truncated毒株最低,仅为89.7％,FJNP毒株核苷酸的同源性与中国北方流行的CH ZKFG 11毒株最高,达100.0％.M基因含有681个碱基,编码226个氨基酸,与GenBank中登录的代表性PEDV核苷酸的同源性为94.8％～100.0％,氨基酸的同源性为94.8％～99.6％,其中FJPT毒株核苷酸的同源性与日本D89752毒株最低,仅为94.8％,FJNP毒株核苷酸的同源性与韩国CPF193、泰国毒株最高,达100.0％.4株PEDV毒株均与国内外流行强毒株的亲缘关系较近,与attenuate DR13弱毒株的亲缘关系较远.     

番鸭小鹅瘟病胶乳凝集试验与病毒分离的比较研究

应用GPV胶乳凝集方法（LPA）和病毒分离（VI）检测人工感染病例9份、健康对照6份,临床疑似送检病鸭28份。其中人工感染样品检测LPA和VI符合率为93.3%（14/15）;临床疑似样品检测LPA和VI符合率为89.3%（25/28）;两者总符合率达90.7%（39/43）。LPA方法具有简便（肉眼可判定,不需仪器）、快速（检测抗原20min内）、特异、准确等优点,比VI更适合临床使用。     

Isolation and biological properties of virulent subpopulations from lentogenic Newcastle disease virus strains

From each of two lentogenic Newcastle disease virus (NDV) strains of the type LaSota and Hitchner B1 a virulent subpopulation could be obtained. The two subpopulations were—in comparison to the two parent viruses—more resistant to the lipid solvent chloroform and more stable against thermal degradation. Also, the glycoproteins haemagglutinin and F (fusion) were more stable against thermal inactivation. Electron microscopic observations revealed in terms of size and morphology all of the characteristics of NDV. Both subpopulations possessed, however, the same elution kinetics as their respective parent strains. The intracerebral and intravenous pathogenicity indices as well as the mean death times of the two subpopulations allow to classify these viruses as virulent Newcastle disease viruses.     

脂质体介导抗猪瘟病毒基因转染小鼠胚胎成纤维细胞的研究

本研究旨在探索脂质体介导抗猪瘟病毒基因重组质粒PGPUG/GFP/Neo转染小鼠胚胎成纤维细胞的条件,为构建疾病模型动物及抗猪瘟病毒转基因猪提供技术平台。本研究比较了不同的小鼠胚胎成纤维细胞分离培养方法,将培养至3~5代的胚胎儿成纤维细胞,通过脂质体(LiPofectamine^TM 2000)介导转染抗猪瘟病毒基因重组质粒PGPUG/GFP/Neo。结果显示,在所选用的不同浓度脂质体和重组质粒,以及不同转染时间的组合中,2 μL脂质体介导1.5 μg重组质粒,转染6 h时可获得19%的转染效率,极显著高于其他剂量和时间组合(P＜0.01)。这些结果表明,脂质体、重组质粒及转染时间的优化组合,能有效介导抗猪瘟病毒基因重组质粒PGPUG/GFP/Neo转染小鼠胚胎成纤维细胞。