全文获取类型
收费全文 | 44711篇 |
免费 | 2056篇 |
国内免费 | 4428篇 |
专业分类
林业 | 3630篇 |
农学 | 4876篇 |
基础科学 | 3417篇 |
5684篇 | |
综合类 | 20166篇 |
农作物 | 2675篇 |
水产渔业 | 1646篇 |
畜牧兽医 | 5194篇 |
园艺 | 1429篇 |
植物保护 | 2478篇 |
出版年
2024年 | 274篇 |
2023年 | 777篇 |
2022年 | 1464篇 |
2021年 | 1617篇 |
2020年 | 1607篇 |
2019年 | 1904篇 |
2018年 | 1230篇 |
2017年 | 2043篇 |
2016年 | 2341篇 |
2015年 | 2176篇 |
2014年 | 2603篇 |
2013年 | 2655篇 |
2012年 | 3904篇 |
2011年 | 3760篇 |
2010年 | 2985篇 |
2009年 | 2774篇 |
2008年 | 2408篇 |
2007年 | 2619篇 |
2006年 | 2184篇 |
2005年 | 1699篇 |
2004年 | 1258篇 |
2003年 | 944篇 |
2002年 | 742篇 |
2001年 | 612篇 |
2000年 | 569篇 |
1999年 | 555篇 |
1998年 | 475篇 |
1997年 | 417篇 |
1996年 | 352篇 |
1995年 | 385篇 |
1994年 | 294篇 |
1993年 | 263篇 |
1992年 | 282篇 |
1991年 | 236篇 |
1990年 | 214篇 |
1989年 | 204篇 |
1988年 | 144篇 |
1987年 | 84篇 |
1986年 | 46篇 |
1985年 | 14篇 |
1984年 | 5篇 |
1983年 | 5篇 |
1982年 | 9篇 |
1981年 | 10篇 |
1979年 | 5篇 |
1978年 | 7篇 |
1977年 | 4篇 |
1962年 | 9篇 |
1956年 | 5篇 |
1955年 | 15篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 718 毫秒
141.
鸡痘病毒通用高效表达载体的构建及其初步应用 总被引:4,自引:0,他引:4
利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后将 FPV早晚期启动子 PE/ L 及其启动的鹅源新城疫病毒 NDV ZJ1株的 F基因一并插入 p N1 1 S中 ,使PE/ L 与 Ps反向串联 ,从而构建出 1个含 NDV ZJ1株 F基因的重组 FPV高效双表达载体 p N1 1 SEF,其 MCS可以用于插入其他外源基因。在此基础上 ,将 NDV ZJ1株的 HN基因插入 p N1 1 SEF的 Ps启动子下游的 MCS中 ,构建了共表达 NDV ZJ1株 F和 HN基因的重组 FPV双表达载体 p N1 1 SEFHN。将 p H1 1 SEFHN质粒 DNA与 FPV2 82 E4株共转染 CEF,得到共表达 NDV ZJ1株和 HN基因的重组 FPV,间接免疫荧光实验初步证明外源基因得到了较好的表达。表明所构建的通用高效 FPV表达载体有利于高效基因工程活载体疫苗的研制 ,具有广阔的应用前景 相似文献
142.
从动物耳皮肤组织采样 ,采用将组织块剪碎后直接贴附于培养瓶底部的方法进行原代培养 ,该方法使原代细胞出现率及可传代率均达到 10 0 %。根据上皮样细胞和成纤维样细胞贴壁紧实程度的不同 ,用 0 .0 5 %的胰蛋白酶-EDTA对其进行消化 ,可将两种不同类型的细胞进行分离和纯化。通过脂质体介导 ,以BLG -hINS(含乳球蛋白调控基因的人胰岛素原基因 )基因作为目的基因、GFP(绿色荧光蛋白 )基因作为标记基因共转染绵羊成纤维细胞 ,经G - 4 18筛选后 ,得到转染细胞。对转染的细胞分别用单细胞显微操作法和有限稀释法进行细胞克隆 ,两种方法均可得到克隆细胞。选形态正常、生长均匀的 5个细胞克隆进行PCR检测 ,结果 5个克隆均转有GFP基因 ,其中两个转有BLG -hINS基因。高代培养细胞、转染细胞和克隆细胞经核型分析后 ,染色体数目均为 2 7对 ,表明绵羊耳的成纤维细胞建立细胞株后 ,可以作为外源基因转染的有效供体细胞。 相似文献
143.
将除去3'端跨膜区的猪瘟病毒E2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb,获得重组质粒pFBHT-E2,转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,发生转座作用,经抗性及蓝白斑筛选得到含E2基因的重组载体质粒rBacmid-E2,以脂质体介导的方法将此重组载体质粒转染sf9昆虫细胞,获得重组病毒,命名为rvBac-E2.经SDS-PAGE和Western-blot及ELISA等方法检测,结果表明,此E2基因在昆虫细胞中正确表达,表达的蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应. 相似文献
144.
猫细小病毒NS部分基因的克隆及序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
将疫苗用猫细小病毒(FPV)株提取基因组DNA,针对NS特定片段设计引物,利用PCR扩增出了部分基因并将该基因克隆到pMD18-T Vector中测序.结果表明,该基因长613bp,编码204个氨基酸.分离株基因与犬的细小病毒(CPV)、貂的细小病毒(MEV)毒株核苷酸同源性均为99%.氨基酸同源性达到97%、98%以上,与犬、貂的肠炎病毒有密切的亲缘关系. 相似文献
145.
三种优良禾本科牧草与本地品种生长性状对比分析 总被引:1,自引:0,他引:1
分析了三种引进优良禾本科牧草与一种当地禾本科牧草的生长性状,结果表明:三种引进禾本科牧草的鲜重均比当地禾本科优良牧草垂穗披碱草高,种植第三年引进牧草品种的鲜草产量为无芒雀麦19316kg/hm^2,达乌里披碱草16457kg/hm^2,猫尾草15754kg/hm^2。引进的三种牧草品种表现出较好的抗逆性,推广价值较高,适宜在高寒地区种植。 相似文献
146.
提取实验室保存禽副粘病毒-2标准毒株Yucaipa株和3株分离毒株F4、F6、F8株的RNA,经RT—PCR,获得4株毒株的HN基因,同时测得F基因与HN基因之间的序列。序列分析结果表明,HN基因的ORF全长为1743 nt,编码一个由580个氨基酸组成的蛋白。运用DNAMAN软件分析,4株毒株与GenBank上已发表毒株的HN基因的核苷酸和氨基酸之间的同源性相比,同源率分别为99.89%和99.69%。分析F基因与HN基因间序列发现两基因间序列与副粘病毒科其他病毒的基因间序列相似,含有基因起始信号和终止信号,但不含3个碱基的连接序列。通过序列分析,在分子水平上进一步证实分离于同一批进口七彩文鸟的F4、F6株是抗原性存在差异的两个毒株。毒株间的血清学关系与分子水平的核苷酸序列、氨基酸序列的比较关系一致。 相似文献
147.
Aleksa Obradovic Athanassios Mavridis Klaus Rudolph Jaap D. Janse Momcilo Arsenijevic Jeffrey B. Jones Gerald V. Minsavage Jaw-Fen Wang 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》2004,110(3):285-292
During the last two decades bacterial strains associated with necrotic leaf spots of pepper and tomato fruit spots were collected in Serbia. Twenty-eight strains isolated from pepper and six from tomato were characterized. A study of their physiological and pathological characteristics, and fatty acid composition analysis revealed that all of the strains belong to Xanthomonas campestris pv. vesicatoria. Being non-amylolytic and non-pectolytic, pathogenic on pepper but not on tomato, containing lower amounts of fatty acid 15 : 0 ante–iso, the pepper strains were designated as members of the A group of X. campestris pv. vesicatoria. However, the tomato strains hydrolyzed starch and pectate, caused compatible reactions on tomato but not on pepper, had higher percent of 15 : 0 ante–iso fatty acid, and were classified into B phenotypic group and identified as X. vesicatoria. PCR primers were developed which amplified conserved DNA regions related to the hrp genes of different strains of X. campestris pv. vesicatoria associated with pepper and tomato. Restriction analysis of the PCR product resulted in different patterns and enabled grouping of the strains into four groups. When xanthomonads isolated from pepper and tomato in Serbia were analyzed, they clustered into two groups corresponding to the grouping based on their physiological and pathological characteristics. According to the reaction of pepper and tomato differential varieties, the strains from pepper belong to races P7 and P8 and tomato strains belong to the race T2. All strains were sensitive to copper and streptomycin. Advantages and disadvantages of various bacterial spot management practices are discussed. 相似文献
148.
149.
150.