Effect of cumulus cell removal and sperm pre‐incubation with progesterone on in vitro fertilization of equine gametes in the presence of oviductal fluid or cells

In spite of many attempts to establish an in vitro fertilization (IVF) technique in the equine, no efficient conventional IVF technique is available. The presence of oviductal fluid or oviductal cells during IVF helps to improve embryo production in vitro but is not sufficient to reach high fertilization rates. Thus, our aim was to perform equine IVF either after sperm pre‐incubation with oviductal fluid or in the presence of oviductal cells, and to evaluate the effect of cumulus removal from the oocyte or sperm pre‐incubation with progesterone. In experiments 1 and 2, IVF was performed in the presence of porcine oviduct epithelial cells. The removal of cumulus cells from equine oocytes after in vitro maturation tended to increase the percentage of fertilization when fresh sperm was used (1/33 vs. 4/31, p > 0.05) but had no effect when frozen sperm was used (1/32 vs. 1/32). Equine sperm pre‐incubation with progesterone did not significantly influence the fertilization rate when fresh or frozen sperm was used (2/14 vs. 2/18 for fresh, 1/29 vs. 1/25 for frozen). In experiments 3 and 4, IVF was performed after pre‐incubation of sperm with porcine oviductal fluid. The removal of cumulus cells tended to increase the percentage of fertilization when fresh sperm was used (1/24 vs. 3/26, p > 0.05). Sperm pre‐incubation with progesterone did not significantly influence the fertilization rate when fresh or frozen sperm was used (2/39 vs. 2/36 for fresh, 2/37 vs. 1/46 for frozen), but two 3–4 cell stage zygotes were obtained with fresh sperm pre‐incubated with progesterone. This is an encouraging result for the setting up of an efficient IVF procedure in equine.     

小鼠Wip1基因的表达及其对受精能力的影响

本研究旨在探讨Wip1基因的表达及其对精子受精能力的影响,为阐明Wip1基因对雄性繁殖的影响提供新的着眼点。选取相同饲养环境、同一遗传背景的8周龄左右的野生型雄鼠,利用实时荧光定量PCR技术检测Wip1基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑组织及雄性生殖器官中的表达情况,利用免疫荧光技术检测Wip1蛋白在睾丸组织及精子细胞中的分布情况。以Wip1敲除型雄鼠为试验组,野生型雄鼠为对照组,利用ELISA试剂盒检测两组小鼠血清中睾酮水平;通过体外受精试验比较两组的2-细胞率及囊胚率。结果显示,Wip1基因mRNA在野生型雄鼠各组织中广泛表达,且在雄性生殖器官中表达量较高,其中睾丸中表达量最高,附睾体、附睾头、附睾尾次之;Wip1蛋白主要定位于睾丸组织中的长形精子细胞及附睾成熟精子细胞的头部。ELISA检测结果发现,与野生型雄鼠相比,Wip1敲除型雄鼠血清内睾酮含量极显著下降（P<0.01）。体外受精结果表明,Wip1敲除后2-细胞率及囊胚率均极显著下降（P<0.01）。结果表明,Wip1基因敲除能够引起雄性小鼠受精能力降低,这可能与Wip1基因在精子发生过程中发挥作用相关。     

牧草施肥研究进展

综述了牧草施肥的研究概况,主要内容包括牧草施肥的时期、方法与效果。提出了禾本科牧草、豆科牧草及混播牧草特点各异,针对不同的牧草采取相应的施肥方法具有十分重要的意义。已有的研究和实践表明,氮、磷、钾及中微量元素肥料合理施用对牧草的产量、品质及对食草动物的生长、发育与品质均会产生明显的促进作用。结合发达国家牧草施肥的先进经验,对我国当前牧草施肥存在的问题进行了分析,最后展望了牧草施肥的发展方向。     

施肥对苜蓿+无芒雀麦混播草地的产量影响

探讨了科尔沁地区草原2号杂花苜蓿+Carlton无芒雀麦混播草地基肥和追肥中氮,磷和钾配施对草地群落产量的影响。结果表明,氮,磷和钾合理配施有利于草原2号苜蓿和无芒雀麦生长。在配施中,草原2号苜蓿与磷肥效应最显著,无芒雀麦与氮肥和钾肥效应最显著。高钾组合与高氮组合显著降低了草原2号苜蓿产量(P<0.05)。对于春播的杂花苜蓿+无芒雀麦混播草地,为了保持混播群落组分种群的稳定性,较适宜的施肥组合是N2、P1、K2组合(基肥:尿素20 g/m2、过磷酸钙30 g/m2、氯化钾20 g/m2;追肥:尿素30 g/m2、过磷酸钙50 g/m2、氯化钾30 g/m2)。一年龄草地头茬草和二茬草中无芒雀麦产量组分比分别为44.47%和71.10%,占全年总产量的63.62%。二年龄草地三茬草中无芒雀麦产量组分比分别为39.23%,59.73%和37.76%,占全年总产量的46.64%。     

模拟增温与施肥对高寒草甸土壤酶活性的影响

摘要：采用开顶式生长室模拟增温的方法,研究了气温升高和施肥对高寒草甸土壤酶活性的影响。研究表明,单独增温导致高寒草甸土壤纤维素酶和磷酸酶活性分别提高了12.4%、29.1%,而脲酶活性降低了18.0%,过氧化物酶和多酚氧化酶活性无明显变化,说明增温促进高寒草甸土壤中碳磷循环。在不增温条件下,施肥抑制了土壤纤维素酶、多酚氧化酶和过氧化物酶活性,而施NPK则提高了脲酶和磷酸酶活性。增温条件下,施肥不会引起土壤纤维素酶、多酚氧化酶和过氧化物酶活性的显著变化,而施可溶性碳肥使脲酶活性显著升高（P<0.05）,施NPK使磷酸酶活性显著降低。增温和施肥的交互作用对土壤纤维素酶、过氧化物酶、磷酸酶和脲酶活性有显著影响,而对多酚氧化酶无明显影响。因此,预测在未来气候变暖背景下,高寒草甸土壤中的多种酶活性对施肥的响应可能不显著。     

施用不同壮果肥对猕猴桃产量和品质的影响

以树龄 10 年的“贵长”猕猴桃为供试材料,研究用不同肥料（常规用肥、专用肥、生物肥、生物肥 专用肥）作为猕猴桃壮果肥施用对果实品质、产量及贮藏性能的影响。结果表明,4 种追肥处理对猕猴桃的产量和果实品质有不同程度的提高和改善,其中0.25 kg 生物肥 1.0 kg 专用肥能显著地增加猕猴桃的单果体积、单果质量、产量和提高维生素 C、可溶性固形物、可溶性总糖的含量,改善猕猴桃后熟的贮藏性能,对糖酸比和果形指数也有改善作用,猕猴桃专用肥效果次之。用0.25 kg 生物肥 1.0 kg 专用肥作为猕猴桃壮果肥施用综合效果较为理想,可在猕猴桃实际生产中推广使用。     

春季施肥对多花黑麦草种子生产性能的影响

采用完全随机试验设计,研究了多花黑麦草Lolium multiflorum春季不同时期(分蘖期、拔节期和孕穗期)、不同施肥量对其种子生产性能的影响,结果表明,各处理对种子产量的影响极显著(P<0.01),处理B2[拔节期施肥N∶P∶K=20∶18∶22.5(kg/hm2)]种子产量最高,达到620.1 kg/hm2,比对照增产48.7%。与对照相比,千粒重和小穗数均显著增加。     

维生素C和中草药添加剂对夏季种公鸡精液污染率和种蛋受精率的影响

为研究维生素C和中草药添加剂对夏季种公鸡精液污染率和种蛋受精率的影响,选取40周龄体重相近的安卡红种公鸡30只,随机分为3组,分别为维生素C组、中草药组和对照组,对照组喂基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加250 mg/kg的维生素C和1.5％的中草药。结果表明：维生素C组和中草药组的平均精液污染率比对照组降低了24.34％和17.34％,且差异显著（P＜0.05）;维生素C组和中草药组的受精率分别比对照组提高了2.17%和4.35%,且差异显著（P＜0.05）。说明在热应激条件下,在日粮中添加适量的维生素C和中草药可显著降低种公鸡精液污染率,改善精液品质,进而提高种蛋受精率。     

脱防冻剂方法对牛体外受精胚胎冷冻后成活率的影响

为了观察脱防冻剂方法对牛体外受精冷冻胚胎在体内、外发育率的影响,应用常规冷冻法在０．７５ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．５ｍｏｌ／Ｌ丙二醇溶液中冷冻受精后７、８ｄ的囊胚,解冻后在０．２５、０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步或在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中三步脱防冻剂的胚胎孵化率（分别为６８．６％、６２．２％、６８．７％）与用ＰＢＳ／ＦＣＳ六步脱防冻剂的差异不显著（７０．４％,Ｐ＞０．０５）,但在０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中三步脱防冻剂后,孵化率显著降低（４７．６％,Ｐ＜０．０１）。用０．２５ｍｏｌ／Ｌ或０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖或海藻糖预先使胚胎脱水后冷冻,解冻后可使胚胎直接在ＰＢＳ中一步脱掉防冻剂,胚胎孵化率（４５．０％～４９．５％）与在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步脱防冻剂的相似（５１．５％,Ｐ＞０．０５）。移植试验表明,在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液中二步脱防冻剂获得的妊娠率与六步脱防冻剂相似,与在ＰＢＳ中一步脱防冻剂的亦无明显差异,但妊娠率均偏低（２１．４％～３７．５％）。     

高寒半干旱区油菜与豆科牧草混播草地施肥效应

油菜与豆科牧草混播草地施肥效应表明,氮磷合理配施促进土壤水分消耗,干草、植物量和施肥产投比显著提高。坡梁地最高植物产量施肥量Ｎ为７８．０６ｋｇ／ｈｍ２,Ｐ２Ｏ５为６１．１５ｋｇ／ｈｍ２,最高干草产量施肥量Ｎ为７６．６５ｋｇ／ｈｍ２,Ｐ２Ｏ５为５７．２９ｋｇ／ｈｍ２,增产效果Ｎ＞Ｐ２Ｏ５;旱滩地最高植物产量施肥量Ｎ为５８．３３ｋｇ／ｈｍ２,Ｐ２Ｏ５为５５．６８ｋｇ／ｈｍ２,最高干草产量施肥量Ｎ为５３．６０ｋｇ／ｈｍ２,Ｐ２Ｏ５为５９．１１ｋｇ／ｈｍ２,增产效果Ｐ２Ｏ５＞Ｎ;且氮磷具有明显的正交互效应。氮磷合理配施还显著提高了水分利用效率,坡梁地和旱滩地分别提高３．０５和２．６７ｋｇ／（ｍｍ．ｈｍ２）。