重筛野生黑木耳废渣中木质素过氧化物酶的研究

筛选野生黑木耳废渣中产木质素过氧化物酶的菌株,对存在的漆酶、锰过氧化物酶和木质素过氧化物酶的活力进行测定,并对3种酶的最适温度和最适p H进行考察。结果表明,在33株野生黑木耳菌株中,得到2株产木质素过氧化物酶菌株,废渣中3种酶的平均酶活力分别为54.3、37 200、6.7 U/L;3种酶的最适温度为28~32℃,最适p H为6.2~7.0。废渣中3种酶活力差别较大,锰过氧化物酶活力最强,在降解木质素上起主要作用,木质素过氧化物酶活力最小,作用差。     

漆酶/介体体系降解单一纸浆树脂模拟物的研究

以松香酸、亚油酸、油酸、β-谷甾醇、甾醇油酸酯分别作为纸浆中单一树脂的模拟物,采用一种产自黄孢原毛平革菌的漆酶对树脂模拟物进行降解,通过对比漆酶/介体体系的降解效率,筛选了该漆酶合适的介体,探讨了漆酶/介体体系对单一树脂模拟物的降解效果,研究了漆酶/介体体系降解亚油酸和油酸的动力学,并对漆酶降解亚油酸的工艺条件进行了优化。研究结果表明:1-羟基苯并三唑(HBT)是较为合适的介体;漆酶/HBT体系对松香酸、亚油酸、油酸、β-谷甾醇、甾醇油酸酯单一树脂模拟物均有较好的降解效果;漆酶/HBT体系处理亚油酸、油酸的米氏常数分别为1.38和1.86mmol/L,表明亚油酸更易与漆酶/HBT体系结合;该漆酶处理亚油酸的最佳工艺条件为酶用量2.0U/mg、1-羟基苯并三唑介体用量7.6mol/g、时间60min、温度50℃、pH值4.0,此条件下亚油酸的降解率为88.9%,当酶用量增加到4.0U/mg或者处理时间延长至120min时,亚油酸的降解率可达到100%。     

几种木腐菌漆酶活性的研究

对18种木腐菌胞外漆酶活性的测定结果表明,腐木生侧耳的漆酶活力最高,为605.0 u*mL-1,其次是多毛拴菌和云芝,其漆酶活力分别为440.0 u*mL-1和400.0 u*mL-1,其余菌株活性低于336.7 u*mL-1.腐木生侧耳漆酶作用的最适pH值为4.6,Cu2+ 、Mg2+、Na+、Co2+对漆酶活力有激活作用,Ag+、K+、Ca2+、Hg2+、Fe2+ 、Cl- 和Zn2+对其漆酶活力有明显抑制作用.     

纳米纤维制备过程中酶处理对分散性能的影响

植物纤维原料中少量的纤维素、半纤维素及木质素之间存在着醚键、酯键和苯基糖苷键等化学键联结,形成木质素碳水化合物复合体(LCCs),而这种共价键联接可能使微纤丝难以彻底解离成纳米纤维,由此影响到纳米纤维的分散及稳定性能.试验以漂白硫酸盐云杉木浆为原料,经打浆、磨浆及高压均质处理的常规制备纳米纤维流程,在高压均质前增加木聚糖酶/漆酶体系处理环节,研究探讨其对纳米纤维分散及稳定性能的影响.结果表明,经木聚糖酶和漆酶处理后,红外吸收光谱分析发现在811 cm-1处的半乳葡甘聚糖、896 cm-1处异头碳(C1)伸缩振动、1 056 cm-1处苯环伸展振动(木素)、1 161 cm-1处C-O-C不对称伸展振动、1 460 cm-1处-CH2变形振动(木质素苯环间侧链)等特征吸收峰强度均明显减弱或消失,表明存在于微纤丝之间的半纤维素和木质素发生降解,LC键发生断裂.同时,经过木聚糖酶和漆酶处理后,SEM显示纤维结构变得疏松、表面裂纹及孔隙变大;经高压均质处理后制得的纳米纤维,其水相分散及稳定性能得到明显提高.     

漆酶转化对氨基苯胂酸的研究

为全面了解对氨基苯胂酸(ARS)在环境中的归趋,研究了ARS在漆酶与邻苯二酚或丁香酸两种腐植酸模型化合物共同存在时的转化过程及产物鉴定。结果发现在漆酶-ARS单一体系中,漆酶并不能降解ARS;当体系中加入邻苯二酚或者丁香酸时,ARS的降解效果显著,且漆酶-邻苯二酚体系中ARS的转化更加彻底。在反应过程中,邻苯二酚和丁香酸首先在漆酶的作用下氧化成为1,2-醌和1,4-醌,然后分别和ARS发生亲核加成反应,形成聚合物,产物中均没有发现砷酸基团的脱落,始终以有机胂形态存在。     

耐铜菌株4bs的鉴定及其对染料脱色的效果

从土壤中筛选出1株具有较高漆酶活性的菌株,经分子生物学方法鉴定,该菌株为芽孢杆菌属细菌,将其命名为Bacillus sp.4bs。菌株4bs的最适生长温度和pH分别为37℃和7.0,其在6%(w/v)Na Cl溶液中能够正常生长,在含有2.0 mmol/L Cu~(2+)的培养基中仍生长旺盛。以丁香醛连氮为底物,菌株4bs的芽孢漆酶活性为35.66U/g(干重),其芽孢漆酶最适反应温度为80℃,最适反应pH值为6.8;0.1 mmol/L的半胱氨酸、二硫苏糖醇和叠氮化钠抑制其活性,10 mmol/L的Na~+, K~+, Cu~(2+)和Li~+能够增强其活性。在pH 6.8的体系中,菌株4bs芽孢漆酶对结晶紫和茜素红在6 h内的脱色率分别为83.57%和77.16%;加入乙酰丁香酮(Ace)作介体时,对靛红的脱色率由52.73%提高到94.98%,对活性黑5的脱色率由19.01%提高到90.10%。     

改良壳聚糖固定化真菌漆酶的研究

以改良壳聚糖-壳聚糖铜为载体,戊二醛为交联剂对真菌漆酶进行了固定化研究,探讨了其固定化条件及固定化酶的部分性质.结果表明:戊二醛最适浓度为0.5%,交联最佳时间14 h,最佳给酶量约1.3 mg,固定时间12 h或0.5 h.在此条件下获得的固定化漆酶酶活回收率分别为56.4%与51.2%.与游离酶相比,固定化漆酶与作用底物邻联甲苯胺的亲和力降低,但固定化漆酶的稳定性有明显改善.最适温度分别为40℃和80℃,分别比游离酶提高10℃和50℃;90℃条件下保温5 h后固定化酶活保留率分别为57.4%和40%,而相同条件下游离酶酶活明显下降.     

Molecular identification and enzymatic properties of laccase2 from the diamondback moth Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae)

Laccase(EC 1.10.3.2)is known to oxidize various aromatic and nonaromatic compounds via a radical-catalyzed reaction,which generally includes two types of laccase,Lac1 and Lac2.Lac1 oxidizes toxic compounds in the diet,and Lac2 is known to play an important role in melanizing the insect exoskeleton.In this study,we cloned and sequenced the cDNA of the diamondback moth,Plutella xylostella Lac2(PxLac2),from the third instar larvae using polymerase chain reaction(PCR)and rapid amplification of cDNA ends techniques.The results showed that the full-length PxLac2 cDNA was 1 944 bp long and had an open reading frame of 1 794 bp.PxLac2 encoded a protein with 597 amino acids and had a molecular weight of 66.09 kDa.Moreover,we determined the expression levels of PxLac2 in different stages by quantitative PCR(qPCR).The results indicated that PxLac2 was expressed differently in different stages.We observed the highest expression level in pupae and the lowest expression level in fourth instar larvae.We also investigated the enzymatic properties of laccase,which had optimal activity at pH 3.0 and at 35°C.Under these optimal conditions,laccase had a Michaelis constant(K_m)of 0.97 mmol L~(-1),maximal reaction speed(V_m)of 56.82 U mL~(-1),and activation energy(E_a)of 17.36 kJ mol~(-1) to oxidize2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid ammonium salt).Type II copper enhanced laccase activity below 0.8mmol L~(-1) and reduced enzyme activity above 0.8 mmol L~(-1) with an IC_(50) concentration of 1.26 mmol L~(-1).This study provides insights into the biological function of laccase.     

桦褐孔菌漆酶基因片段的克隆与序列分析

通过简并引物克隆得到了桦褐孔菌及同属真菌共11个菌株的漆酶基因片段,并对其结构与同源性进行了分析。结果表明:11个目的扩增产物均含有2个内含子,且内含子位置保守,推导的氨基酸序列中均包含有保守的铜离子结合位点;DNA序列与氨基酸序列的相似度都颇高,基于2类序列构建的NJ系统进化树均能将除俄罗斯采集的桦褐孔菌菌株外归为1组,该漆酶基因片段可用于鉴定桦褐孔菌。     

产酱香功能芽孢杆菌漆酶活性与曲料褐变的相关性

为研究芽孢杆菌漆酶是否在酱香型高温大曲的褐变中起作用,通过对贵州大学微生物实验室分离及保存的芽孢杆菌进行芽孢杆菌漆酶活性测定,分析芽孢生成情况与温度的关系以及酱香模拟曲褐变程度、漆酶活性和模拟发酵物氨基态氮含量之间的相关性,探索漆酶氧化愈创木酚褐变以及小分子化合物介导的酪氨酸氧化褐变途径。结果表明：1）在芽孢杆菌发酵模拟曲褐变的过程中,随着温度升高,发酵物中芽孢含量随之增加,发酵曲褐变程度也随之加深;2）芽孢杆菌漆酶在60℃时活性最高,与酱香型高温大曲的堆积温度相吻合;3）漆酶活性、发酵产物氨基态氮含量与发酵物褐变之间的皮尔逊相关系数分别为0．617和0．766,均呈显著相关;4）在酱香曲中存在的愈创木酚能被芽孢杆菌漆酶氧化产生褐色物质,芽孢杆菌漆酶在小分子介体物质存在情况下能够氧化酪氨酸,产生褐色物质。结论：芽孢杆菌漆酶所引起的酶促褐变在酱香型大曲的褐变中起着一定的作用。