茄子遗传转化体系的建立

三月茄下胚轴外植体在含1mg/L ZT和1mg/L-3mg/L BA的MS培养基上芽再生率可达70％以上。150mg/L的卡那霉素可以有效地抑制三月茄下胚轴产生愈伤组织、诱导出不定芽和根。200mg/L-300mg/L氨苄青霉素或羧苄青霉素能够完全抑制农杆菌的生长。通过农杆菌介导,获得了表达绿色荧光蛋白基因（gfp)的转基因茄植株。     

Pseudomonas putida GM6的gfp基因标记及在活性污泥中的定殖

强化生物除磷（EBPR）工艺在废水生物除磷中广为应用,但由于对EBPR工艺的微生物学和分子机理尚不了解,对大规模生活污水处理厂EBPR工艺处理效果突然恶化和运行不稳定等状况难以预测和控制。本研究利用本实验室分离鉴定的高效聚磷菌Pseudomonas putida GM6,来进行投菌试验以快速恢复和强化活性污泥的除磷能力。为了解GM6菌株在装置中的定殖情况,首先,通过三亲结合对Pseudomonas putida GM6成功进行了gfp基因标记;其次,将标记菌株GMTR投至实验室规模除磷效果不好的序批式反应器（SBR）装置中,研究GMTR在活性污泥中的定殖情况,投菌初期,GMTR占污泥细菌总数的1.5%～3%;至21d时,GMTR所占比例升至9.2%,GMTR在活性污泥中得以定殖。与此同时,研究了投菌后R2的聚磷能力变化,投菌5d后,磷的去除率逐渐提高,运行21d时磷的去除率升至96%,28d后出水浓度稳定在0.2mgL^-1左右。结果表明,Pseu-domonas putida GM6能快速启动强化废水生物除磷功能。这为下一步的大规模的工程化应用提供了科学依据。     

生防菌枯草芽孢杆菌CQBS03的绿色荧光蛋白基因标记及其在柑橘叶片上的定殖

【目的】利用绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因标记枯草芽孢杆菌生防菌株CQBS03,以研究其在柑橘叶片上的定殖规律。【方法】采用重叠PCR方法将p43启动子和gfp进行融合,并与大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体pHY300PLK连接构建重组质粒pHY43G,以重组质粒电脉冲转化生防菌株CQBS03,培养后于荧光显微镜下观察并通过SDS-PAGE分析工程菌株GFP的表达情况,然后进行工程菌株对柑橘溃疡病菌的抑菌试验、生长动力学分析、稳定性测试。采用叶片喷雾方法接种,平皿稀释分离培养方法测定CQBS03-pHY43G在柑橘叶片上的定殖情况。【结果】重组菌CQBS03-pHY43G高效表达GFP,电泳后出现约29kDa的特异蛋白条带,外源质粒对宿主菌的生长未带来明显不利影响,质粒稳定性实验表明重组质粒pHY43G经30次传代后的稳定性为55%,室内平板抑菌实验结果显示CQBS03-pHY43G对柑橘溃疡病菌生防效果与出发菌株没有明显差异(P0.01),CQBS03-pHY43G菌株在叶片喷雾接种后的0—15d,在柑橘叶片上的数量呈现急剧下降趋势,15d后下降速度稍缓,最后保持相对稳定的较低水平(1.73×103cfu·g-1)。【结论】成功地将gfp转入野生型枯草芽孢杆菌生防菌CQBS03中,构建了荧光标记菌株,初步明确了生防菌的定殖规律。     

绿色荧光蛋白及其在农作物研究中的应用

作为一种新型、方便的报告标记,来自多管水母属的绿色荧光蛋白(GFP),相对于其他报告蛋白(如β-半乳糖苷酶和萤火虫荧光素酶)在原位、实时动态研究中具有很多优越性,已广泛应用于农作物科学研究的各个领域。就GFP的特性及其在农作物研究中应用作一简要阐述。     

Genetic tagging of Azotobacter chroococcum for colonization on wheat (Triticum aestivum) and cotton (Gossypium sp.) roots

Abstract

Azotobacter chroococcum strains E12, HT57 were genetically tagged with lac Z, gfp to study the colonization behaviour on wheat (Triticum aestivum) and cotton (Gossypium sp.) in soil under controlled conditions. 10³ – 10⁴ cfu g^?1 soil of HT57 lac Z were found to colonize roots of both cotton and wheat crops whereas 1.7 × 10⁴ – 7.2 × 10⁴ cfu g^?1 soil of E12 gfp was colonizing wheat roots and 1.6 × 10⁴ – 9.3 × 10⁴ cfu g^?1 soil of E12 gfp colonized cotton roots respectively. Tagged strains colonized mostly on root tips compared to basal roots in both the crops.     

溶杆菌SNNU513基因gfp标记及在玉米根部定殖

溶杆菌属细菌在植物病害生物防治中有着广阔的应用潜力。本文以本实验室从中药材远志分离筛选的溶杆菌属新菌株Lysobacter sp. SNNU513为材料,筛选出高效制备该菌株感受态细胞Inoue法,电击转化条件为场强20 kV/cm、电脉冲时间5 ms时可将含绿色荧光蛋白基因gfp的质粒pGLO导入该菌株感受态细胞中,重组菌SNNU513-pGLO能高效、稳定表达绿色荧光蛋白基因,与出发菌株的生长特性、抑菌活性等生物学特性差异不显著。将成功构建的重组菌SNNU513-pGLO用于检测该菌株在玉米根部的定殖规律,结果表明,定殖量从表皮到韧皮部有明显减少趋势。