内生放线菌Fq24的拮抗筛选及其代谢产物生物活性研究

通过对番茄内生放线菌的拮抗筛选和其代谢产物生物活性的研究,为防治番茄灰霉病寻找新的生防菌源,并探索植物内生放线菌的生防机理。从健康番茄植株上分离到9株放线菌。通过平板对峙培养和发酵液抑菌活性测定、筛选对番茄灰霉菌有拮抗作用的菌株。以番茄种子及幼苗生长情况,防御酶活性变化,盆栽试验对其代谢产物的促生作用、抗病诱导作用、防病作用等生物活性进行了研究。结果表明：（1）菌株Fq24对番茄灰霉菌的抑菌圈半径大于10 mm,其发酵液的抑制作用可达到68.4%。（2）中浓度的Fq24发酵液促进根茎的生长,幼苗的干、鲜重及株高最大为对照的168.35%、286.30%和70.79%,均为显著增加。（3）番茄幼苗体内防御酶活性明显提高,POD、SOD活性最大增加为71.3%和62.3%。（4）喷施Fq24发酵液可明显降低灰霉病的发病率,取得82.14%的防效。Fq24是株有拮抗作用的菌株,其代谢产物能显著促进番茄种子和幼苗生长;诱导番茄体内抗性酶活性提高,增加植物抗性;明显降低发病率,防病效果好。     

可利用纤维素产油脂的意杨内生真菌的筛选与发酵条件研究

从意大利白杨韧皮部中筛选得到一株能够利用纤维素并高产油脂的内生真菌,初步鉴定为茎点霉属.利用意杨树叶粉碎物作为唯一碳源进行液体发酵,该菌株在培养至第8天时,油脂产量和滤纸酶活力达到最高,分别为0.78g/L、5.67mg/(L·min)(以葡萄糖计).通过单因子分析及正交优化试验,得到发酵条件最佳组合为:玉米秆50g/L,NH4NO3 3g/L,温度25℃,摇床转速150r/min,此时真菌油脂产量达到1.12g/L.分析菌体发酵获得的油脂成分,主要为软脂酸、硬脂酸、油酸、亚油酸,可以作为生物柴油的原料.     

珠芽蓼溶磷内生细菌Z14的鉴定

对1株具有溶磷能力的珠芽蓼内生细菌Z14的16S rDNA基因片段进行扩增、测序,并与GenBank中相似序列进行比对分析和构建系统发育树,结合生理生化测定结果将Z14鉴定为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus);通过定量测定Z14的溶磷量为902.14 mg.L-1.     

木槿根瘤内生放线菌的分离及系统发育分析

采用匀浆法利用S,JA,BAP这3种培养基从木槿根瘤内分离出6株菌株并把菌株进行系统发育分析。结果表明S培养基分离效果较好;系统发育分析表明4株小单孢菌属、2株野野村菌属、1株马杜拉菌属。     

棉花内生菌筛选纯化及抑菌效果研究

内生菌是一类新的微生物资源,能够产生多种生物活性物质,具有重要的研究价值,开发前景广阔[8]。本文对新疆地区健康棉花根部[7-9]幼叶进行表面消毒灭菌、分离、纯化、鉴定的研究,初步了解棉花内90%的内生菌都为芽孢杆菌[1]。参照《常见细菌鉴定手册》对菌株的属种及其形态、培养性状和生理生化特性进行鉴定,试验得出芽孢杆菌的分离频率最高,为优势种群。平板对峙试验表明,芽孢杆菌对两种植物病原真菌有抑制作用。     

植物内生真菌B3和不同施氮量对水稻生长和产量的影响

以转玉米磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEPC)水稻(PC)、未转基因野生型水稻(Kitaake)、H137和JAAS45为材料,在移栽前24 h接入植物内生真菌B3的菌液,在大田栽培条件下,研究了不同施纯氮量[150.0kg/hm~2(LN)、187.5 kg/hm~2(MN)、225.0 kg/hm~2(HN)]对供试水稻植株在返青期、分蘖期、拔节期和开花后的生长和生理指标及产量构成因子的影响.结果表明:与CK+HN(未施B3且施人225.0 kg/hm~2)相比,B3+HN处理供试水稻返青期叶片生长较快,分蘖较多,拔节期干物质累积较快,从而表现产量增加;而在B3+MN处理中,B3通过增加分蘖与维持叶片光合功能而使供试水稻与对照产量相近,保持产量相对稳定,表明水稻施用B3可以起到减少田间纯氮施入量的效果.     

11株侧柏内生真菌的农药活性及分子生物学鉴定

分别采用生长速率法和种子萌发法测定了11株侧柏内生真菌J46、J77、J80、J85、J86、J94、Y51、Y52、Y57、Y125、Y127发酵液对苹果腐烂病菌、番茄灰霉病菌等12种植物病原菌的抑菌活性及对反枝苋种子的除草活性。结果表明,有10株内生真菌对至少一种植物病原菌的抑制率大于50%;其中Y52、J94、Y127、J77、J46等5种内生真菌对苹果腐烂病菌的抑制率高于70%,J94、Y52、J77、J46等4种内生真菌对番茄灰霉病菌抑制率高于70% 。内生真菌对反枝苋种子幼根的生长表现出较强抑制作用,抑制率在70%以上的有8株。对筛选出的8株具有较好抑菌或除草活性的侧柏内生真菌进行了ITS 序列系统发育分析,确定其均为链格孢属链格孢菌（Alternaria alternaria）。     

一株苦参内生真菌的抑菌特性及活性成分的结构鉴定

 【目的】分离药用植物苦参内生真菌,明确其抑菌特性,确定内生真菌BS001发酵产生抗菌物质的种类及结构。【方法】采用常规的组织分离法对内生真菌进行分离,平板菌块法测定抑菌特性,捷克八层析试验确定其极性,柱层析及冷冻干燥的方法对其分离纯化,并利用TLC生物自显影进行跟踪,采用高效液相色谱法（HPLC）测定其纯度,1H-NMR、13C-NMR以及液相色谱-质谱（LC-MS）等方法对其进行结构鉴定。【结果】从苦参种子中分离出1株内生真菌菌株,编号为BS001。该菌株对辣椒疫霉病菌、番茄炭疽病菌、油菜菌核病菌、苹果斑点落叶病菌等病原菌具有抑制效果,其中对番茄炭疽病菌的抑菌直径达2.734 cm。其发酵液经进一步分离纯化后,用波谱学技术对其抑菌活性成分进行鉴定,结果表明其结构为6,7-(2′E)dibutenyl-5,8-dihydroxy-(Z)-cyclooct- 2-ene-1,4-dione。【结论】苦参中存在1株对多种病原菌具有抑制作用的内生真菌,经鉴定为土曲霉（Aspergillus terreu）。在该菌株发酵液中得到一种新抗菌活性物质,可用于生物药物及生物农药的开发。     

苹果树内生细菌G23的鉴定及其抑菌活性的研究

从苹果树木质部中分离到1株内生拮抗细菌G23,为明确其分类地位及抑菌活性,采用形态学、生理生化测定及16S rDNA序列分析对其分类地位进行鉴定,并对其发酵液进行过滤及高温处理,分析其抗菌物质类型。研究结果表明：该菌株为1株枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。该菌株发酵滤液对所测8种病原真菌的抑制率在63.4%~87.5%之间,发酵液经高温处理后活性降低,对8种病原菌的抑制率在57.4%~79.6%,因此推测该菌株可能分泌多种拮抗物质,包括对热不敏感的抗生素类,也包括对高温敏感的肽类及蛋白酶类。     

ZJUF0986活性代谢产物对稻瘟病菌致病性的影响

通过菌丝生长速率法和悬滴法测定ZJUF0986活性代谢产物对稻瘟病菌菌丝生长、孢子萌发和附着胞形成的影响。结果表明,ZJUF0986活性代谢产物对稻瘟病菌菌丝生长的有效中浓度EC50为18.55mg/L,与对照药剂三环唑的EC50(17.30mg/L)相比无显著性差异。活性代谢产物不仅影响孢子萌发,也显著降低附着胞的形成。浓度为10mg/L的活性代谢物可完全抑制孢子萌发及附着胞的形成;浓度为1.25mg/L时则明显延缓孢子萌发及附着胞的形成,处理48h后的孢子萌发率和附着胞形成率分别为62.17%和38.46%。以浓度为1.25mg/L活性代谢产物处理的稻瘟病菌孢子悬浮液接种离体大麦叶片,病原菌孢子在大麦叶片表面能部分萌发形成附着胞,但侵染栓形成延迟,致病性明显降低。