生长因子和体细胞共培养对牛体外受精的影响

为研究表皮生长因子（EGF）和胰岛素（Insulin）对牛卵母细胞体外发育的影响以及体细胞共培养对体外受精胚胎体外发育的影响,将获取的牛卵泡卵母细胞在含有30μg,LEGF或50mg／L Insulin或30μg／LEGF＋50mg／L Insulin的成熟培养液中进行成熟培养,比较不同生长因子对牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响;将受精卵用颗粒细胞单层培养系统或牛输卵管上皮细胞单层培养系统进行体外培养,比较体细胞共培养系统对体外受精胚胎体外发育的影响。结果表明,成熟培养液中添加30μg／LEGF或者30μg／LEGF＋50mg／L Insulin可以显著提高卵母细胞的成熟率和受精后的卵裂率（P〈0．05）;输卵管上皮细胞共培养系统可以显著提高受精后的囊胚发育率（P〈0．05）,可以用于牛体外受精胚胎的体外培养。     

可持续的生态农业是我国农业现代化道路的选择

  目的  基于稻鳝生态种养长期定位试验,探讨稻鳝生态种养模式下不同施肥处理对稻田土壤（0 ~ 20 cm和20 ~ 40 cm）理化性状和微生物群落数量的影响。  方法  采用大田小区试验,共设置6个处理：无稻鳝种养 + 施肥处理(RT),稻鳝种养 + 无肥空白(CK),稻鳝种养 + 施肥处理(IRT),稻鳝种养 + 70%施肥(IT70%),稻鳝种养 + 70%施肥 + 秸秆还田(ITS70%),稻鳝种养 + 70%施肥 + 30%有机肥(ITO70%)。  结果  与RT相比,ITS70%处理使0 ~ 20 cm和20 ~ 40 cm土层的土壤容重显著降低,0 ~ 20 cm和20 ~ 40 cm土层的土壤R_0.25、MWD、GWD显著提升,分别提高了32.15%、75.47%、103.20%和41.04%、100%、118%,使0 ~ 20 cm和20 ~ 40 cm土层的土壤有机质含量显著提升,分别提高了31.03%和39.23%,使0 ~ 20 cm和20 ~ 40 cm土层的土壤细菌拷贝数显著提升了27.28%和29.28%,使20 ~ 40 cm土层的土壤真菌拷贝数显著提升了21.43%;ITO70%处理使0 ~ 20 cm土层的土壤容重显著降低了29.63%;IRT处理则使0 ~ 20 cm和20 ~ 40 cm土层的土壤全钾含量显著提高了31.65%和23.63%,使0 ~ 20 cm和20 ~ 40 cm土层的土壤速效钾含量显著提升了31.88%和45.68%。  结论  综上所述,与常规稻田施肥相比,稻鳝生态种养不同施肥类型均使稻田土壤理化性状和微生物群落数量得到有效改善,其中70%施肥并配合秸秆还田改善效果最佳。     

Transwell contact co-culture promotes growth and differentiation of single-dissociated iPSCs

AIM：To investigate the promoting role of Transwell contact co-culture system in the growth and differentiation of single-dissociated induced pluripotent stem cells (iPSCs). METHODS：Bovine corneal endothelial cells (CECs) at passage 1~2 (P1~2) were seeded on the underside of Transwell inserts placed into culture plates and were cultured in 37 ℃ and 5% CO2 for 8 h. Accutase digestion and 40 μm filter process disaggregated colony-aggregated iPSCs into single-dissociated iPSCs, and the cells were seeded on the inside of Transwell inserts with CECs in medium of mTeSR1 for 3 d and then in low-glucose DMEM supplemented with 10% FBS for 2 weeks. The characteristics and differentiation markers were evaluated by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (qPCR), immunofluorescence staining, live & dead cell staining and alkaline phosphatase (ALP) staining. The group of iPSCs cultured in conventional medium was used as control group 1. The group of single-dissociated iPSCs co-cultured with CECs was set as experimental group, while single-dissociated iPSCs without co-culture were as control group 2. RESULTS：The bovine CECs showed typical hexagonal cobblestone shape. iPSCs showed colony-like growth, while became single-dissociated cells after Transwell contact co-culture with bovine CECs for 3 d. The single-dissociated iPSCs positively expressed the undifferentiated markers, Nanog and Oct4. The mRNA expression levels of Nanog, Oct4 and Sox2 between experimental group and control group 1 were both positive and had no statistical significance difference (P>0.05). The dead cells in experimental group decreased significantly, and there was statistically significant difference compared to control group 2 (P<0.01). After 14 d of induced differentiation co-culture, the single-dissociated iPSCs showed rather uniform polygonal morphology, increased dimension and no obvious colony existence. Negative ALP staining, positive immunofluorescence staining for ZO-1, AQP1 and CD31, and negative for CD34 and CD133 were also observed. The results of qPCR showed that the mRNA expression of Oct4, Nanog and Sox2 significantly decreased, and had statistically significant difference compared with control group 1 (P<0.01). CONCLUSION：When co-cultured with bovine CECs, iPSCs morphologically changed to endothelial-like cells and expressed some markers of CECs. Transwell contact co-culture system not only enhances the growth of single-dissociated iPSCs, but also promotes their differentiation.     

虾稻共作对稻田土壤线虫群落结构的影响

农业生态系统利用种间互惠将种植业与养殖业相结合,既能提高农作物产量,也能减少化肥农药等对环境的危害。本研究以土壤线虫作为指示生物,研究外来物种克氏原螯虾与水稻种养结合模式对稻田土壤生态系统的影响,为虾稻共作模式下稻田生态系统的健康和可持续利用提供依据。通过比较水稻单作和虾稻共作,分别在水稻分蘖期、抽穗期和成熟期采集土壤样品,分析土壤线虫群落结构。结果表明:与水稻单作相比,虾稻共作土壤中食细菌线虫的百分比较高(分蘖期增加了26.52%,抽穗期增加了19.85%,成熟期增加了32.65%),同时机会主义cp1线虫类群所占百分比较高(分蘖期增加了31.13%,抽穗期增加了24.91%,成熟期增加了19.49%),说明虾稻共作生态系统中农田土壤养分循环较快,土壤呈养分富集。但是,虾稻共作农田土壤中捕食杂食性线虫、cp3~5线虫类群百分比较低(P0.05),同时成熟度指数也显著低于水稻单作。因此,在克氏原螯虾的影响下,稻田土壤食物网趋于简化,土壤的生物稳定性有下降趋势,故需要进一步加强虾稻共作对稻田土壤健康长期影响的监测和研究。     

提升稻鱼共生模式的若干关键技术研究

新一轮稻田生态养殖在国内已经广泛开展,为了提升传统的稻鱼共生模式的产量,探讨了不同水平的水稻移栽密度和复合肥(N:P:K=14:2:7)施用量对稻田养鱼产量的影响,以及在不产生面源污染的情况下最适宜稻鱼共生系统的生产模式,通过田间试验对不同的处理所得到的产量进行测定和分析。结果表明：在田鱼产量为750 kg/hm²模式下,适当的增加水稻移栽密度(25 cm×25 cm)能显著增加水稻产量(P=0.005)而不影响田鱼产量(P=0.175);稻鱼共生系统的水稻产量可以降低对复合肥的依赖,将复合肥施用量水平从750 kg/hm²减少到600 kg/hm²,水稻和鱼产量都没有显著性改变,生产成本下降,环境面源污染风险降低。本试验研究提出适合本地生态条件和生产习惯的稻鱼系统管理模式是：水稻移栽密度30 cm×30 cm,复合肥施用480 kg/hm²,投放规格为55±3 g的冬片9000尾/hm²,设计产量为稻7500 kg/hm²、鱼1500 kg/hm²。实践证明,这种优化模式能较好地利用稻鱼共生系统中的各种资源而不产生面源污染等环境压力,可以推荐到全球重要农业文化遗产保护项目青田稻鱼共生系统保护地所在的青田县及其周边乃至全国范围内生态条件及生产消费习惯类似的地区。     

诱导Paracin1.7生成的刺激因子的分离与纯化

旨在分离纯化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中能够诱导细菌素Paracin1.7分泌的刺激因子,并探明其对副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei) HD1.7细菌素生成量及群体感应相关基因luxS表达的影响。本研究通过60%硫酸铵沉淀、CM Sepharose Fast Flow弱阳离子交换柱层析中度纯化及Superdex 75凝胶层析精度纯化,将获得的层析分离物与L. paracasei HD1.7共培养,检测共培养发酵液的抑菌活性及luxS基因的转录水平,并用SDS-PAGE与Native-PAGE检测分离物质。结果表明L. paracasei HD1.7抑菌活性为126.68%;luxS基因上调表达,为对照菌株的2.43倍;刺激因子的表观分子量约为30 kDa。本研究利用三步法初步分离纯化出诱导Paracin1.7生成的刺激因子,明确该刺激因子可以启动种间群体感应相关基因luxS,为L. paracasei HD1.7的群体感应研究奠定了理论和技术基础。     

NaCl筛选法获得无标记耐盐转基因水稻的高效转化技术研究

NaCl筛选法是培养无标记耐盐转基因水稻的有效方法。以中华11、秀水11、春江06这3个粳稻品种成熟胚愈伤组织为材料,以SKC1为目标基因,研究NaCl筛选条件下,热激与液体共培养对农杆菌介导耐盐基因转化水稻效率的影响。结果显示,热激处理和液体共培养都能提高耐盐基因对水稻的转化率,其中,热激处理最高转化提高率达到46.2%,液体共培养后最高转化提高率达到60.7%。     

鸡胚成纤维细胞与鸡气管黏膜上皮细胞共培养体系的建立

【目的】建立鸡气管黏膜上皮细胞(Chicken trachea epithelium cells,CTECs)和鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEFs)共培养体系,为CTECs体外培养研究与应用奠定基础。【方法】利用细胞套皿培养方法,使CEFs与CTECs体外共培养在一个营养体系中,用含有不同促细胞生长因子(氢化可的松(HC)、转铁蛋白(TF)、人表皮生长因子(HEGF)或牛垂体提取物(BPE))和血清(胎牛血清、鸡血清)的培养液培养,观察各组CTECs的生长情况,绘制生长曲线,记录CTECs体外生长增殖的特点。【结果】与单独培养的CTECs相比,共培养体系中的CTECs体外贴壁、生长增殖能力均显著提高,72h能够铺满整个培养皿,并呈典型的上皮细胞"铺路石"状排列。共培养体系中的CTECs,在缺少3种重要哺乳动物气管黏膜上皮细胞培养所需的促细胞生长因子培养液中,仍能保持较好的生长能力,大大降低了CTECs的培养成本。【结论】成功建立了CTECs与CEFs的共培养体系,为CTECs的体外培养和应用提供了技术支持。     

重寄生真菌盾壳霉与核盘菌对峙培养的差异代谢物分析

运用基于液相质谱联用技术的代谢组分析手段,检测重寄生真菌盾壳霉和宿主植物病原菌核盘菌对峙培养时的代谢物差异。结果发现:盾壳霉与核盘菌对峙接触能显著诱发盾壳霉代谢物的分泌,构建盾壳霉特定代谢物数据库检测到3种代谢物涉及重寄生过程,分别为Macrosphelide A,Benzenediol和5-Aminopentanoate,且对峙接触2d时检测到的代谢物积累量最大。对盾壳霉重寄生过程代谢物变化的分析结果表明,真菌重寄生能诱发代谢物水平的交流和次级代谢物积累。     

玉足海参与凡纳滨对虾的混养效果

在室内条件下进行了玉足海参与凡纳滨对虾的混养实验,分析了单养与混养两种条件下养殖水体营养盐结构以及底质成分的变化,测定了对虾与海参的存活率与生长性能。结果显示,混养海参可以明显改变养殖系统的营养盐结构,可使水体中的磷酸盐和硝酸盐浓度有所升高,同时也可有效地控制系统中氨氮浓度。混养海参也可以大幅度地降低沉积物中有机质和硫化物含量,实验结束时混养组硫化物含量为(7.71±1.33)mg/kg,仅相当于单养组浓度的1/3。混养海参对对虾生长及存活具有明显的促进作用,其中混养组对虾体长特异增长率为(0.69±0.13)%/d,显著优于单养组(0.45±0.06)%/d;混养组对虾成活率可达72.5%±22.9%,显著高于对照组55.0%±17.5%。在混养系统内,对虾不会对海参的生存造成负面影响,海参能够有效地选择摄食和利用沉积物中的营养物质(对食物中有机质的同化率可达36.36%±13.79%),并以较快的速度生长。结果表明,在对虾养殖系统中混养玉足海参具有明显的环境与经济效益。本研究可为我国海水养殖业的可持续发展提供一定的科学依据。