四川白三叶根瘤菌遗传多样性及系统发育研究

为阐明四川部分地区野生白三叶根瘤菌的遗传多样性及系统发育地位,对分离自四川雅安、康定、泸定、西昌、成都和乐山6个地区白三叶根瘤的69株菌进行系统研究。采用16S rDNA限制性片段长度多态性分析(restriction fragment length polymorphism, RFLP)和16S rDNA基因、持家基因(recA、atpD、glnII)、结瘤基因(nodC)、固氮基因(nifH)系统发育分析的方法进行了研究。结果表明,16S rDNA PCR-RFLP中所有供试菌株产生了4种酶切图谱类型,表现出较为丰富的遗传多样性。持家基因与16S rDNA基因系统发育分析结果基本一致,9株代表菌株主要分布在α-变形菌纲(Alpha-Proteobacteria)的根瘤菌属(Rhizobium),并与豌豆根瘤菌三叶草生物型(R. leguminosarum bv. trifolii) ATCC 14480^T的亲缘关系较近。PCR可扩增出nodC和nifH基因片段,但从属于土壤杆菌属(Agrobacterium)的菌株LS1105中则扩增不出这两个基因。所有供试菌株被鉴定到了种的水平,证实了68株为白三叶根瘤菌,并通过不同采样地点菌株之间的比较,发现白三叶与根瘤菌的共生关系因地理分布不同而具有多样性,对于丰富白三叶根瘤菌资源及其开发利用具有重要意义。     

高加索三叶草×白三叶胚萌发条件的探索

以六倍体高加索三叶草Trifolium ambiguum与四倍体白三叶T.repens为亲本,通过远缘杂交,采用组织培养手段对杂交胚的萌发条件进行探索.结果表明:以高加索三叶草为母本、白三叶为父本,在花期8:00-9:00授粉,授粉后12～13 d取胚,用质量分数10%NaClO灭菌6.5～7 min,在不加任何外源激素的改良MS培养基上,胚萌发率最高,达8%.高频扩繁时,再附加0.25 mg/L 2,4-D+0.50 mg/L 6-BA可获得较高萌发率.     

Determination of isoflavones in red clover by capillary electrophoresis with electrochemical detection

Capillary electrophoresis with electrochemical detection (CE-ED) was employed to analyze isoflavones in red clover (Trifolium pratense). The effects of potential of working electrode, pH and concentration of running buffer, separation voltage and injection time on CE-ED were investigated. Operated in a wall-jet configuration, a 300 microm diameter carbon-disk electrode was used as the working electrode, which exhibits a good response at +0.85 V (versus saturated calomel electrode) for the analytes. The analytes could be separated in a 50 mmol/l borate buffer (pH 9.5) within 25 min. The response was linear over three orders of magnitude with detection limit (S/N=3) ranging from 2x10(-5) mg/ml to 5x10(-5) mg/ml for the analytes. This method has been used for the determination of daidzein, genistein and biochanin A in red clover with satisfactory results.     

白三叶基因工程改良研究进展

白三叶（Trifolium repens L.）作为优良牧草和地被植物具有重要的应用价值。但其耐盐碱、干旱能力差等原因致使应用受到广泛限制,转基因技术的快速发展为白三叶种质创新提供了有效技术手段,为开展白三叶分子育种奠定了基础。本文就近30年来有关白三叶组织培养、转化方法、转基因遗传改良方面的研究进展进行了综述,并对其应用进行了展望。     

移栽密度对白三叶密度和生物量的影响

通过研究移栽密度对白三叶(Trifolium repens)密度和生物量的影响,筛选出适宜的移栽密度,为我国生态畜牧业饲粮生产提供基础依据。试验设置6组移栽密度,分别为16株·m^-2、25株·m^-2、36株·m^-2、49株·m^-2、64株·m^-2和81株·m^-2,进行6期处理分别记为D₁,D₂,D₃,D₄,D₅,D₆,测定其密度和生物量。结果表明:前期移栽密度对白三叶的生物鲜重、生物干重均有极显著影响(P<0.01),随密度增加而增加,但增加幅度随刈割次数增加而减小;中期生物鲜重、干重基本无显著差异,其中以49株·m^-2的产量最高;第6次刈割时,密度对白三叶生物鲜重、干重有显著影响(P<0.05),但此时鲜重、干重产量最高的均是49株·m^-2;白三叶生物总产量随移栽密度增加而增加,增加幅度先增大后降低,在49株·m^-2时达到最大。因此,49株·m^-2为白三叶最适宜的移栽密度。     

种间互作对苹果/白三叶复合系统根系生长及分布的影响

设置苹果(Malus demestica Borkh)和白三叶(Trifolium repens L.)单作与间作栽培处理,通过根箱试验研究种间互作对苹果、白三叶根系生长及其分布的影响。结果表明:种间互作导致苹果根系生长发育的正效应和白三叶根系生长发育的负效应;苹果、白三叶不同径级根系对种间互作的响应能力不同,细根比粗根表现出较强的可塑性;苹果细根占总根中的比例提高,而白三叶细根占总根中的比例则降低;种间互作对苹果、白三叶不同径级根垂直分布格局影响不明显,但对不同径级根在各土层中的分布比例产生了明显影响,苹果粗根和细根均有下移的趋势,细根下移的趋势更明显,而白三叶细根分布有上移的趋势,粗根则无明显变化。总之,种间互作对苹果、白三叶根系生长发育及其垂直分布产生了一定的影响,对不同径级根生长及其垂直分布的影响不同。     

重庆地区野生红三叶耐热性比较研究

[目的]比较野生红三叶及现有国内外品种间耐热性的差异。[方法]以三峡库区采集的9个野生红三叶材料(CQ1~9)、2个国外品种(瑞德和多丽)和1个国内品种(巫溪)为材料,采用盆栽法在人工模拟高温环境下,评价了12个红三叶材料的生理指标和耐热性能。[结果]随着热胁迫时间的延长,12个红三叶材料的田间成活率递减,叶片相对电导率和游离脯氨酸含量均递增,叶绿素总含量则递降,SOD活性呈先增后降的趋势。其耐热性由强到弱的顺序为:CQ8>瑞德>CQ5>多丽>CQ1>CQ2>CQ4>CQ6>CQ9>巫溪>CQ7>CQ3。[结论]按聚类分析,12个红三叶材料可分为3类,CQ8的各项生理指标稳定,成活率最高,耐热性最好。其次为CQ2、CQ4、CQ5、瑞德和多丽;CQ1、CQ3、CQ6、CQ7、CQ9和巫溪表现较差。     

水培条件下烤烟间作草木樨对烟株氮磷钾含量的影响*

 通过水培试验,研究了烤烟单作、烤烟间作黄花草木樨的农业生物多样性种植措施对烤烟氮、磷、钾养分含量的影响。结果表明,与烤烟单作相比,烤烟与黄花草木樨间作使得烟叶的含氮量、含磷量和含钾量分别提高了0.28%～0.52%,0.01%～0.16%和1.1%～2.77%。黄花草木樨吸收了水体中的过多残留营养元素,使得水中的营养元素更趋于平衡。间作增加了水层中植株的根系,营养元素有效性得以提高,相对含量增加,烟株养分得以改善。     

红三叶新品系组织培养和植株再生

利用红三叶(Trifolium pratense L.)新品系无菌苗不同部位,通过愈伤组织诱导及分化途径获得再生植株。结果表明:子叶、下胚轴、叶柄、叶片及根段在MS+0.5mg·L^-1 6-BA+1～2mg·L^-1 2,4-D培养基上都极易诱导出愈伤组织。最佳继代培养基为MS+0.5mg·L^-1 6-BA+1.0mg·L^-1 2,4-D,添加2,4-D比NAA更利于愈伤的增长和保存;最佳分化培养基为MS+0.75mg·L^-1 6-BA+0.5mg·L^-1 NAA,最高分化率为16.67%,且分裂素6-BA优于KT,6-BA与NAA组合比与IBA组合更有利于红三叶愈伤组织的分化;茎芽增殖最佳培养基为MS+0.5mg·L^-1 6-BA+1.0mg·L^-1 IBA,再生苗的增殖效果IBA>NAA,2,4-D不利于茎芽生长;最佳生根条件为50mg·L^-1浓度的IBA中浸泡1h后植入含0.5mg·L^-1 IBA的MS中,生根率达80%,红三叶新品系IBA生根最大极限浓度为0.75mg·L^-1,浓度过高表现出对根系生长的毒害。     

Nitrogen and winter cover crop effects on spring and summer nutrient uptake

Overseeded winter annuals in bermudagrass [Cynodon dactylon (L.) Pers.] improve annual dry‐matter (DM) yield and capture nutrients in fields receiving manure application. This study determined the DM and nutrient uptake responses of annual ryegrass (Lolium multiflorum L.), cereal rye (Secale cereale), berseem clover (Trifolium alexandrinum L.) and bermudagrass‐winter fallow to 0, 50, 100 and 150 kg N ha^?1 applied approximately 2 months before a single spring harvest, and in addition to swine‐effluent N (258 and 533 kg ha^?1 in summer 2000 and 2001, respectively). Under drought conditions in 2000, DM yield at the spring harvest was highest in ryegrass, and summer DM yield of bermudagrass was greater at 100 and 150 kg N ha^?1 than 50 kg N ha^?1(P < 0·05). The concentration and uptake of N at the spring harvest increased linearly across N rates in both years (P < 0.05). Cover crops differed in N uptake in 2000 (P < 0.01) and values ranged from approximately 141 kg N ha^?1 in berseem clover to 86 kg N ha^?1 in rye. Per unit of N applied, uptake of N increased by approximately 0·409 kg ha^?1 in 2000 and 0·267 kg ha^?1 in 2001; uptake of P increased by 0·029 and 0·014 kg ha^?1 respectively. In 2000, uptake of P was responsive to N rate and this relationship was significant (P < 0·01) in winter fallow (slope = 0·032) and ryegrass (slope = 0·057). Increased uptake of N and P at the single spring harvest was due mainly to higher concentrations in herbage and not higher DM yield.