Gene clone, expression and enzyme activity assay of a cytosolic malate dehydrogenase from apple fruits

Malate dehydrogenase (MDH) ubiquitously exists in animals, plants and microoganisms, and catalyzes the interconversion from oxaloacetate to malate. Cytosolic NAD-dependent MDH gene (cyMDH) encodes a key enzyme crucial for malic acid synthesis in the cytosol which has not been extensively characterized in plants. In this study, a full-length cDNA of cyMDH was isolated from apple fruits with RT-PCR as well as 3′ and 5′ rapid amplification of cDNA ends, and designated as Mal-cyMDH (GenBank accession No. DQ221207). It contained a 996-bp ORF and its sequence analysis shows a high similarity to other plant cyMDHs. Phylogenetic analysis indicated that almost all the cyMDHs could be clustered into the same group and it was likely to represent the original MDH. A roughly 37-kDa fused protein was obtained by the recombinant prokaryotic expression and its enzyme activity assay showed that it mainly catalyzed oxaloacetate to malate. It was also discovered that the enzyme activity of cyMDH exhibited remarkable difference between the high-and low-acid apple germplasm. __________ Translated from Acta Horticulturae Sinica, 2008, 35(2): 181–188 [译自: 园艺学报]     

马铃薯花青素转录激活基因stwd40的克隆与表达分析

根据GenBank中报道的茄属植物矮牵牛花青素wd40类转录激活基因an11及番茄wd40基因113964R的mRNA序列的保守区结构,设计简并引物,从紫色马铃薯皮中克隆了马铃薯wd40类转录激活基因的保守片段,再分别利用RACE技术获得了该基因的3'端和5'端。序列分析表明,该基因核苷酸序列为1292bp,具有完整的编码框,推导其编码362个氨基酸,命名为stwd40。推测的氨基酸序列与GenBank数据库中大量物种的花青素转录激活蛋白stwd40有较高的同源性,其中与矮牵牛的花青素转录调控基因an11的相似性达86%。RT-PCR表达分析显示stwd40在紫色马铃薯叶、茎、皮、肉及根中都有表达,其中在茎中的表达量最高,肉中表达量最低,且在白色马铃薯的叶、皮和肉中也有表达,推测该基因为组成型表达。     

杨树溃疡病菌温度依赖性的研究

通过对菌落最大生长速率、直径加倍时间的测定和所得结果的聚类分析,将供试菌株分为4个温度依赖型,并分析了杨树溃疡病菌(Botryosphaeria dothidea)的极限温度和对连续高温的忍受能力及扩散趋势.     

橡胶树无性系PR107种植密度试验

以橡胶树PR107为试验材料,采用固定行距,由不同的株距形成不同的种植密度,设500,667,833株/hm2 等3种种植密度。结果表明:(1)密度越大,对茎围生长的抑制作用越强烈,其个体间的分化现象也越严重;(2)树龄越长,同一群体内个体间的差异越大;(3)密度越大,单株年产干胶量越低,然而,由于单位面积有效割株与种植密度成正比,种植密度大的单位面积干胶产量也较高,667株/hm2和833株/hm2的单位面积干胶产量极显著高于500株/hm2的,前两者之间无显著差异;(4)种植密度对干胶含量有显著的影响,500株/hm2的干胶含量显著高于667株/hm2和833株/hm2的,后两者之间的干胶含量无显著差异;(5)种植密度在667株/hm2以下时,密度对树皮的生长和再生没有影响,密度达到833株/hm2时,树皮的生长受到明显的抑制;(6)不同种植密度间的风害断倒率和死皮停割率均无显著差异;(7)以提高单位面积干胶产量为主要目的多因素综合考虑,PR107的种植密度应以略低于667株/hm2为宜。      

11个黑杨无性系物候期变异分析

对11个黑杨无性系的8个物候期进行了观测分析.结果表明,不同无性系的物候期有较大的差异,极差为24 d,各无性系间的差异主要表现在物候期后期,用主分量分析法将11个无性系分为物候期特点各异的3类.生长后期诸物候期的早晚可作为速生无性系早期选择的参考依据.     

Molecular Cloning and Characterization of Citrate Synthase Gene in Rice （ Oryza sativa）

The full-length OsCS encoding citrate synthase was isolated from rice （Oryza sativa L. subsp, japonica）, OsCS is 1477-bp long and encodes a 474 amino acid polypeptide, Its putative protein sequence is highly identical to Daucus carota, Nicotiana tabacum Beta vulgaris subsp., Arabidopsis thaliana, and Citrus junos （〉70%）. The deduced amino-terminal sequence of OsCS showes characteristics of mitochondrial targeting signal. Southern blot analysis using ORF of the OsCS as the probe indicated that this gene exists in multiple copies in rice genome. The band with predicated size of 82 kD was detected by Western blot after being induced by 0,4 mmol/L IPTG.     

截形苜蓿生物数据分析平台的构建与应用

为更有效地利用截形苜蓿(M.truncatula)的表达序列标签和其他公共数据,加快对截形苜蓿功能基因的研究步伐,构建了“M.truncatula Home”生物数据分析平台,并以此为中心,整合了专门为截形苜蓿定制的电子克隆系统。该数据分析平台具有序列基本信息查询、电子克隆系统、试验一致性序列动态分类查询的功能。进一步利用“M.truncatula Home”生物数据分析平台大规模预测了截形苜蓿盐胁迫相关基因,从截形苜蓿的36878条试验一致性序列中预测出650条与耐盐相关的序列,为进一步克隆截形苜蓿耐盐相关功能基因奠定了基础。     

转座子标签法克隆水稻基因前景

转座子标签法克隆基因是近年来发展起来的一种非常有效的分子生物技术。介绍了转座子标签技术克隆基因的基本原理及研究进展,并对转座子标签技术在水稻基因克隆上的应用进行了讨论分析。     

利用RCR-RAPD法和同功酶分析法日本柳杉无性系的识别方法研究

以日本福岛县林业试验场日本柳杉种子园的 ２４个无性系为材料,利用 ＰＣＲ—ＲＡＰＤ法和同功酶分析法对日本柳杉无性系的识别方法进行了比较研究。结果显示：同功酶法和由７个标记构成的ＲＡＰＤ分析法不能完全识别２４个无性系,用１７个和２７个标记构成的ＲＡＰＤ分析法识别这２４个无性系是可能的;同功酶标记是一种基因型标记,具有稳定性高的特点,适合于分析遗传构造的相似程度,特别适合于群体遗传分析,但是,由于能获得清晰话带的同功酶种类有限,在用于个体识别上比较困难;ＲＡＰＤ标记是一种显性标记,稳定性较差,但只要反应体系和条件稳定,利用ＲＡＰＤ标记正确进行无性系识别是完全可能的。     

猪的微卫星DNA的克隆与分析

本研究应用多种DNA限制性内切酶切割基因组DNA从而浓缩微卫星DNA的方法克隆测定了8个不同位点的猪的微卫星序列,统计分析结果表明（1）猪的基因组中大于或等于40bp的微卫星序列约占基因组全部微卫星序列的10％,（2）GTG）n和（GAG）n类型的微卫星序列,在猪的基因组中分别约每250－500kb的片段中就有一个。