应用假病毒和假型病毒制备抗猪瘟病毒E2蛋白中和性单克隆抗体的初步研究

为制备抗猪瘟病毒(CSFV)单克隆抗体(MAb),本实验以表达CSFV E2囊膜糖蛋白的水泡口炎假病毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合;利用间接ELISA方法和携带荧光素酶(Luciferase)报告基因的HIV-luc/CSFV-E1E2假病毒系统筛选分泌中和性E2MAb的杂交瘤细胞;测定MAb亚型并纯化后,间接ELISA方法测定MAb的效价;采用western blot鉴定MAb的特异性亲和力;利用HIV-luc/CSFV-E1E2假病毒进行体外中和试验,分析MAb抑制病毒感染的能力。结果表明本实验获得了1株分泌中和性MAb的杂交瘤细胞9C8,该MAb能与E2蛋白特异性结合,而且体外抑制试验中和效价大于1∶25600。     

酶联免疫分析技术及其在进出口动物产品兽药残留检测中的应用

进出口动物产品兽药残留对食品安全的影响越来越明显,日益成为阻碍国际间贸易的重要因素,这对食品兽药残留的快速检测提出了高要求。作者主要介绍酶联免疫分析技术的基本原理、分类和技术要点,并对其在动物产品兽药残留检测中的应用、问题和前景进行综述。     

八点黑獭兔不同发育时期盲肠组织结构变化的研究

为了研究獭兔不同发育时期盲肠组织结构变化特点,总结其发育规律,采用石蜡切片、HE染色技术,对相同条件下饲养的不同生长阶段(出生后1,15,30,60d)獭兔各6只进行解剖,并在显微镜下观察其盲肠组织结构.结果发现,獭兔盲肠黏膜的单层柱状上皮细胞的高度、杯状细胞的体积都随年龄的增长而变大,半环形皱襞间的距离随着年龄的增长逐渐变小,皱襞的长度和体积也随年龄增长有所增加.此外还发现,随年龄的增长八点黑獭兔盲肠蚓突内的淋巴小结数目明显增多,黏膜下层内的淋巴小结和弥散淋巴组织随年龄增长也越来越多,黏膜皱襞变得密集.     

实时光电微生物检测技术在乳品质控中的应用

对酸奶中的霉菌酵母菌同时采用实时光电微生物检测系统与国标法进行检测,分析比较两种检测方法所得的检测数据.本实验利用实时光电微生物检测系统的霉菌酵母检测试剂瓶对市售酸奶及阳性添加样品采用半定量的检测方法进行快速检测,能快速地检测到目标菌存在,继而给系统提前预警.结果表明,当霉菌酵母菌含量在10～3.5×105CFU/mL时,实时光电微生物检测方法在1.8～33h内预警.当平板计数法的检测结果小于10CFU/mL时,实时光电微生物检测方法的检测时间均大于33h,在仪器设置运行48h内未出现预警现象.实时光电微生物检测技术与国标平板法两种检测方法的检测结果相当吻合.应用实时光电微生物检测技术能快速便捷,对酸奶产品中霉菌酵母菌进行监测,其检测速度和灵敏度均能满足工厂实验室的快速筛选检测,还利于产品的关键控制点的监测.     

山羊和绵羊嗜血支原体PCR检测方法的建立与应用

为建立羊嗜血支原体(M.ovis)病快速检测方法,本实验根据GenBank中登录的羊M.ovis 16S rRNA基因序列设计一对引物,以山羊和绵羊M.ovis基因组DNA为模板,建立M.ovis PCR检测方法,并进行特异性、敏感性及临床应用试验。结果显示,建立的M.ovis PCR检测方法扩增片段大小为508 bp,与GenBank中M.ovis参考株同源性达99%以上,该方法与猪嗜血支原体、牛嗜血支原体等病原体无交叉反应,最低检测40个拷贝的DNA;通过对延边地区60份山羊和绵羊血液样本的检测结果表明,建立的PCR检测方法具有特异、敏感、准确等优点,完全适用于M.ovis的检测。     

猪外周血单个核细胞cDNA酵母表达文库的构建及与猪瘟病毒E2蛋白相互作用细胞蛋白的筛选

为研究猪瘟病-毒(CSFV)蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用,本研究通过SMART技术合成猪外周血单个核细胞(PBMC)双链cDNA,以携带与载体pGADT7-Rec重组位点同源序列的特异引物经long-distance PCR扩增双链cDNA.纯化双链cDNA并与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌株Y187,经同源重组构建PBMC cDNA酵母表达文库.以CSFV E2蛋白为诱饵进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证.结果显示筛选到17个与CSFV E2蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,基因注释(GO)分析表明这些蛋白分别参与免疫、代谢、细胞生长与增殖、生物调节等过程,为研究它们与CSFV E2的相互作用奠定了基础.     

鸡肝脏和肌肉组织中常山酮残留的ELISA检测

将常山酮进行人工改造,制备了半抗原常山酮琥珀酸衍生物（Hal-suc）.采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将半抗原与牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OVA）偶联,制备免疫原和包被原.动物免疫6次后采血制备抗血清,以间接ELISA法测定血清效价,测得抗血清的最佳工作浓度为1∶102 400.建立了常山酮在鸡肝脏和肌肉组织中检测的ELISA法,该方法在50、100、500 ng/g 的添加浓度水平下,在鸡肝脏和肌肉组织中测得的平均回收率范围分别为74.2%～96.8%和74.3%～90.0%,检测限分别为28和19 ng/g.     

"黑土型"退化草地人工植被施肥试验研究

采用四因素二次通用回归旋转设计,以产草量为标准对“黑土型”退化草地上人工植被的施肥时间和氮磷钾的用量进行2年定位试验,建立牧草产量函数模型。结果表明,单因素增产效应为施肥当年:氮肥>磷肥>钾肥>施肥时间;第2年:氮肥>磷肥>施肥时间>钾肥。确定“黑土型”退化草地上人工植被的施肥组合方案为施肥时间在分蘖~7月上旬、N:75~130 kg/hm2、P2O5:50.0~112.5 kg/hm2、少施或不施钾肥,可取得较高的产量和经济效益。同时,为获得较高牧草产量,以每2年施肥1次为好。     

猪胸膜肺炎放线杆菌荚膜多糖基因的原核表达及其产物的细胞毒性

参考GenBank中猪胸膜肺炎放线杆菌（App）血清2型荚膜多糖基因的序列分别设计了3对特异性引物，通过PCR分别扩增了CpsA、CpsB、CpsC3个基因，获得长约1137、429、1146bp的片段，将其分别克隆到pMD18-T中，经酶切鉴定和序列分析获得了阳性克隆子；再将CpsA、CpsB、CpsC分别插入原核表达载体pGEX-KG后，转化BL21，在IPTG诱导下获得高效表达，经Western-blotting检测证实，表达产物CpsC有生物学活性，CpsA、CpsB无活性；将3种表达产物等量混合，做10倍递进稀释后，与分离出的猪嗜中性粒细胞作用，37℃、50mL／L CO2培养箱中温育4h后加入底物液，测定D492nm值。结果表明，App荚膜多糖对猪嗜中性粒细胞无毒性作用。     

A pilot study to investigate the measurement of immunoglobulin A in Welsh Cob and Welsh Pony foals’ faeces and their dam’s milk

ABSTRACT

Aims: To determine if an ELISA for measurement of IgA in equine serum could be used to measure concentrations of IgA in foal faeces and to determine correlations with concentrations in the milk of the dam.

Methods: Faeces from 20 Welsh Cob and Welsh Pony foals and milk from their dams were collected within 12?hours (Day 0) and at 6 days after parturition (Day 6). On Day 6, faeces could not be collected from 2/20 foals, and milk samples could not be collected from 3/20 mares. An equine IgA ELISA validated for serum and plasma was used to measure concentrations of IgA in all samples in triplicate. The precision of the assay for each sample type was determined using modified CV.

Results: IgA was not detectable in 7/20 Day 0 faecal samples and in 2/18 Day 6 faecal samples. For samples with detectable IgA, the mean modified CV was 10.5 (95% CI?=?6.0–15.0)% for Day 0 faecal samples, and was 6.8 (95% CI?=?4.3–9.4)% for Day 6 faecal samples. Median concentrations of IgA in faeces on Day 0 were lower than concentrations on Day 6 (0.7?mg/g vs. 37?mg/g dry matter; p?=?0.003). Concentrations of IgA in milk and faeces on Day 6 were statistically correlated (r?=?0.59; p?=?0.006).

Conclusions and clinical relevance: The IgA ELISA showed acceptable precision when used to estimate concentrations of IgA in foal faeces during the first week of life, but IgA could not be detected in 37% of meconium samples collected on Day 0. This assay may be useful for investigation of the role of maternal milk IgA in the gastrointestinal tract of neonatal foals, but further assessment of both accuracy and precision of the ELISA is required.