猪圆环病毒2型山东分离株全基因组的克隆与序列分析

根据猪圆环病毒2型(PCV-2)全基因组序列,设计一对特异性引物,从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)病料中扩增出PCV-2基因组DNA,将基因片段克隆于pMD18-T载体,筛选获得含有相应片段的阳性重组质粒pMD18-T-PCV-2。对筛选出的阳性质粒进行测序。结果表明,PCV山东株的全基因组为1 767 bp,与国内外毒株核苷酸同源性高达99.6%。     

氨基酸硒叶面肥对吐鲁番秋季露地甜瓜叶片早衰生理特性的影响

[目的]研究叶面喷施不同浓度氨基酸硒肥,对新疆吐鲁番秋季露地甜瓜早衰生理的影响,筛选出秋季露地甜瓜早衰延缓和调控技术中氨基酸硒肥的最佳施用浓度和频次.[方法]在吐鲁番秋季露地栽培条件下,以露地甜瓜主栽品种'西州密17号'为试材,从初花期开始设置叶面喷施不同浓度氨基酸硒肥处理,以清水为对照,分析不同浓度氨基酸硒肥对甜瓜叶...     

Cloning and analysis of cross-intron genomic gene encoding ACO in Paeonia suffruticosa Andr.

The last step of ethylene biosynthesis in higher plants is to convert 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid (ACC) to ethylene by ACC oxidase (ACO). In our investigation, a cross-introns genomic DNA gene encoding ACC oxidase, PsgACO, was isolated from Paeonia suffruticosa. It revealed that PsgACO (FJ855434) has 1281 bases, containing four exons and three introns, encoding 312 amino acids. The four exons stretched from 1 to 105, 217 to 434, 592 to 925 and 1000 to 1281 bases. A splicing junction sequence of all the exon-introns conformed to the GT-AG rule in the cross-intron genomic DNA sequence of the ACO gene. PsgACO showed high homology to many characterized ACC oxidases both at the nucleic acid and amino acid levels. As well, twelve amino acid residues were conserved among many ACOs from other species. A phylogenetic tree analysis indicated that the amino acid of ACOs is quite conserved among the different eudicots. The phylogenetic tree showed that both the tree peony and herbaceous peony are quite isolated taxa. Bioinformatic analysis showed that the molecular weight of ACO is 35.29 kD, with a theoretical pI of 5.25. It is a non-secrete, stable hydrophilic protein, located in the cytoplasm.     

TBTV卫星RNA不同分离物的序列测定及系统进化分析*

  利用RT-PCR方法对烟草丛顶病毒（tobacco bushy top virus,TBTV）卫星RNA不同分离物进行扩增和克隆测序,同时运用DNAMAN,MEGA,ClustalX等生物软件对TBTV和其它幽影病毒的卫星RNA核苷酸序列进行同源性比较,构建了幽影病毒属成员卫星RNA的系统进化树。E结果显示：TBTV不同分离物卫星RNA的核苷酸同源性为792%～990%。它们与幽影病毒属其它成员卫星RNA的核苷酸同源性为325%～441%。通过构建幽影病毒属成员卫星RNA的系统进化树可以看出：TBTV的卫星RNA与GRV的卫星RNA亲缘关系最近,与CMoMV的亲缘关系最远。     

草莓镶脉病毒（SVBV）启动子的克隆及序列分析

【目的】对草莓镶脉病毒(SVBV)启动子进行序列测定和分析,为进一步研究该启动子稳定表达活性、表达类型及驱动外源基因稳定表达提供理论依据。【方法】用CTAB法从感染SVBV的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV启动子,克隆并测序。将SVBV启动子与花椰菜花叶病毒属其他成员的启动子核苷酸序列进行比较,并构建其系统关系树,再用PlantCARE软件分析SVBV启动子序列中的各个作用元件。【结果】获得全长为1017 bp的SVBV启动子。序列比列表明,本研究构建的中国SVBV启动子与美国SVBV启动子序列相似性最高,达77.29%。从构建的系统关系树可以看出,中国SVBV启动子与美国SVBV启动子单独聚成一个亚分支,说明来源于草莓的2个SVBV启动子亲缘关系最近。另外,SVBV启动子和花椰菜花叶病毒(CaMV)启动子亲缘关系虽然相对较近,但二者序列相似性较低,说明SVBV启动子与CaMV 35 S启动子的结构差异较大。进一步分析表明,SVBV启动子除了具有一般植物启动子的典型作用元件TATA-box和CAAT-box外,还具有一些与组织特异性表达或诱导表达相关的调节因子。【结论】SVBV启动子具有多种转录顺式作用元件,可能是一个在双子叶植物中具有较强驱动活性的组成型启动子。     

紫苏种子油成分自然变异的研究

对山西省内12份野生紫苏种子含油量及脂肪酸的组成成分进行了测定分析,结果表明,各样品的含油量介于30.83%～32.76%之间,样品间没有明显差异;通过气相色谱法测定分析,紫苏籽油中脂肪酸由软脂酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生烯酸等组成,不饱和脂肪酸含量约占脂肪酸总量的90%以上,其中亚麻酸含量介于57.8%～62.1%之间,油酸含量介于20.2%～23.6%之间。表明紫苏籽油是一种极具开发潜力的营养保健油。     

高价铁肠杆菌素受体蛋白FepA表面抗原决定簇基因的克隆及序列同源性分析

用PCR技术获取高价铁肠杆菌素受体蛋白FepA表面抗原决定簇基因,分析其在大肠杆菌种内的序列同源性。以提取的大肠杆菌基因组DNA为模板,设计一对基因特异引物,用PCR扩增的方法获得目的基因。将PCR扩增后得到的片段纯化并克隆至pMD19-T Simple Vector载体,用菌落PCR及酶切鉴定阳性菌落,对阳性菌落进行测序,并与Gene Bank公布的大肠杆菌区段进行序列同源性分析。扩增出598bp的含有受体蛋白FepA表面抗原决定簇基因的目的片段,经测序分析其种内的序列同源性为95%～99%,为今后制备针对该区段的抗体奠定了基础。     

不同低蛋白日粮添加氨基酸对生长猪生长性能及血液生化指标的影响

采用完全随机设计,选用体重为(18.0±0.5)kg的杜长大三元杂交猪54头,随机分为3个处理,每个处理3个重复,每个重复(栏)6头猪.对照组日粮配制参照美国NRC(1998)猪饲养标准和当前福建省规模养猪常用的日粮营养水平,粗蛋白为18.59%,表观可消化赖氨酸(Lys)为0.85%.试验Ⅰ、Ⅱ组日粮在对照组日粮基础上粗蛋白浓度下调为16.96%和15.53%,相应补充合成的赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸,各处理日粮赖氨酸浓度相同.结果表明,Ⅰ组、Ⅱ组的日增重分别比对照组提高3.83%和2.59%(P>0.05),料重比Ⅰ组比对照组增加3.54%(P>0.05),Ⅱ组比对照组降低1.18%(P>0.05);与对照组相比,Ⅰ组、Ⅱ组血清尿素氮浓度分别降低10.43%(P<0.05)和26.78%(P<0.01),血清总蛋白、血清白蛋白各处理间相近(P>0.05);随日粮蛋白质浓度的降低(1.5和3.0个百分点),生长猪的生长性能、相关血液生化指标得到一定改善.     

大豆抗原蛋白对草鱼肌肉营养成分的影响

以健康的初始体质量(50.66±0.26)g草鱼(Ctenopharyngodon idellus)为试验对象,在室内[(19±3)℃]单循环控温养殖系统中进行6周饲养试验,以鱼粉为对照组,β-伴大豆球蛋白的添加量为40 mg/g,大豆球蛋白的添加量为60 mg/g,配制成3种等氮(粗蛋白质量分数为30%)、等能(15.6 MJ/kg)的半精制饲料,探讨大豆主要抗原蛋白对草鱼肌肉主要营养成分的影响。结果表明:大豆主要抗原蛋白使草鱼肌肉中粗蛋白含量极显著下降(P0.01),对肌肉中水分、粗脂肪、粗灰分、氨基酸总量、必需氨基酸总量和鲜味氨基酸总量影响不显著(P0.05)。可见,在本试验条件下,草鱼配合饲料蛋白水平为30%时,在其配合饲料中分别添加β-伴大豆球蛋白(40 mg/g)和大豆球蛋白(60 mg/g)显著影响了草鱼肌肉中粗蛋白的含量。     

柑橘类植物GPAT基因片段克隆和SNP分析

甘油-3-磷酸酰基转移酶基因是与植物抗冷性强弱密切相关的基因。根据已报道的各种植物GPAT基因的氨基酸序列上前后两个保守区设计1对简并引物,采用RT-PCR技术,分别从琯溪蜜柚、马家柚、莽山野橘等8种柑橘类植物中克隆得到315bp的GPAT基因片段。使用DNA Star5.0软件对8个片段序列进行同源性比较,8个片段的核苷酸同源性高达97.8%,与其它植物GPAT基因核苷酸序列的同源性都在72.5%以上;经过氨基酸序列推导,每个GPAT基因片段分别编码105个氨基酸,8个片段的氨基酸同源性为95.2%,与其它植物GPAT基因的氨基酸序列同源性在68.9%以上。试验克隆所得8种柑橘类植物GPAT基因片段序列存在明显的单核苷酸变异,在14个核苷酸位点存在SNPs(single nucleotide polymorphisms),导致6个氨基酸位点发生变异,多态性频率为1SNP/22.5bp,核苷酸变异度为4.45%,氨基酸变异度为5.71%。采用NJ聚类法对克隆片段的核苷酸序列进行了遗传多样性分析。