猪圆环病毒2型ORF2基因的原核表达

猪圆环病毒是引起猪多系统衰竭综合征的重要病原,全病毒培养十分困难,避开培养病毒,得到大量的检测抗原,对诊断本病有着重要的意义。本研究对疑似猪圆环病毒2型感染猪脾脏提取病毒DNA,进行套式PCR扩增获得了猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因序列,并将扩增片段定向插入质粒载体pPRO-HTb,转化BL21大肠杆菌后,构建了表达猪圆环病毒2型ORF2蛋白的重组原核表达系统。经IPTG诱导,对表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析,表明ORF2基因在大肠杆菌中得到了表达,表达产物以包涵体形式存在于菌体中,通过提取包涵体,获得了初步纯化的ORF2蛋白,为进一步利用PCV2ORF2蛋白抗原进行PCV血清学检测提供了基础。     

Study on the Inhibition of Fermented Soybean to Cancer Cells

In the experiment, the inhibition of isoflavones extracted from soybean and tempe to SP2/0 and Hela cells was studied, and the inhibition rate of each unit for cancer cells was also studied. The results showed that the inhibition rate of tempe isoflavones to SP2/0 was 96.9% and to Hela cells was 69.5% when the concentration was 20μg·mL^-1. In the same condition, the inhibition rate of soybean isoflavones was 83.16% and 60.5%. With the decline of concentration, the inhibition rate decreased. The inhibition of isoflavones to SP2/0 did not exist when the concentration was 5-1.25μg·mL^-1.     

KF／Al2O3催化合成2-溴-2-硝基-1，3-丙二醇

目的 采用KF/Al2O3催化剂催化合成2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇,并确定最佳反应条件.方法 制备KF/Al2O3催化剂,用该催化剂对硝基甲烷与甲醛的羟基化反应进行催化合成,再经过溴化反应制得产物,最后由红外光谱及熔点测定对产物进行确定表征.结果经测定,产物2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇的红外特征峰为3240 cm-1、3190 cm-1、1810 cm-1、1920 cm-1、960 cm-1、840 cm-1,熔点为126.7 ℃.当溴化反应条件固定为反应温度10 ℃,反应时间0.5 h时,KF/Al2O3催化剂对硝基甲烷与甲醛的羟基化反应的最佳反应条件为反应温度25 ℃,反应时间2 h,反应物硝基甲烷、甲醛与催化剂使用量物质量的比为2∶5∶2.在最佳反应条件下,该催化合成反应收率可达78.1%.结论 KF/Al2O3催化剂实现了对2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇的催化合成,且反应具有收率高,操作方法简单,反应时间短,反应条件容易控制,反应对环境友好的特点.     

公猪精液PRRSV变异株检测及NSP2、ORF5基因序列分析

用荧光RT-PCR方法从某猪场精液中检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异株(NSP2 1 594～1 680 bp缺失)核酸阳性.提取1份阳性样品病毒核酸测定和分析其NSP2和OBF5全基因序列,结果表明NSP2基因由950个氨基酸组成,与CH-1a、VR-2332等经典PRRSV相比481位缺失1个氨基酸、532～560位连续缺失29个氨基酸,与JXA1、HUN4等毒株具有相同的缺失特性;ORF5基因第13、151位为具有强毒特性的精氨酸(R),存在4个潜在的糖基化位点,分别位于30～32、35～37、44～46和51～53位氨基酸.遗传进化分析表明,测定序列与JX-A1、HUN4等毒株关系最近,与CH-1a、NVSL等同属一个大分支,而与BJ-4、P129、RespPRRS MLV、VR-2332等处于不同分支.研究证实公猪精液可携带PRRSV变异株,因此猪场(群)在人工授精和引进精液时必须强化检疫和生物安全措施.     

SiO2溶胶制剂防治番茄叶霉病的研究

SiO2水溶胶制剂和百菌清可湿性粉剂对番茄叶霉病防治效果的研究结果表明,SiO2水溶胶和百菌清可湿性粉剂对番茄叶霉病均有明显的抑制作用.0.5,1.0,2.0,3.0 g/L的SiO2水溶胶和500倍75%的百菌清可湿性粉剂对番茄离体叶片叶霉病的防治效果在处理7 d后分别为43.34%、55.03%、60.46%、55.75%、58.18%;对室内盆栽番茄苗叶霉病的防治效果在处理15 d后分别为12.47%、17.79%、43.61%、24.61%、41.85%,以2 g/L的SiO2水溶胶防治效果最好.     

家鸡冠型性状的微卫星标记连锁分析

 【目的】构建具有冠型性状记录的鸡F2资源群的2号染色体连锁图谱,并结合表型分析对调控鸡冠型性状的基因进行初步定位。【方法】通过测交选择豆冠冠型基因型纯合的吐鲁番斗公鸡2只和玫瑰冠冠型基因型纯合的玫瑰冠母鸡6只为亲本,采用F2代试验设计建立F2代资源群436只,参考EL（East Lansing）家系的遗传连锁图谱,在鸡2号染色体上筛选14对微卫星标记,运用MapMaker/EXP3.0软件初步构建此家系2号染色体遗传连锁图谱,同时运用LOD记分法进行鸡的冠型基因连锁分析。【结果】经χ2检验,F2资源群冠型分化比例符合经典孟德尔遗传学的独立分离规律。在连锁分析中除MCW0157外,其余13个微卫星标记均能连锁,所构建的鸡2号染色体连锁图谱与EL家系的遗传连锁图谱相似。【结论】鸡2号染色体上MCW0082位点与玫瑰冠冠型基因可能存在连锁。     

不同施肥处理对春玉米穗位叶光合指标的影响

从高产施肥的角度,研究了不同氮、磷、钾肥用量对旱作春玉米穗位叶净光合速率(Pn)、气孔导度(Cond)、胞间CO2浓度(Ci)、蒸腾速率(Tr)等光合指标的影响.结果表明:各施肥条件下,穗位叶全展后期Pn、Cond随玉米生育期的推进呈现逐渐下降的变化趋势,而Ci、Tr则呈先降低后增加的趋势.不同氮、磷、钾用量对穗位叶4个光合指标的影响也较明显:穗位叶全展前期,Pn、Cond、Ci和Tr均随施氮、磷水平的提高而增加,而随钾肥水平的提高,Cond、Ci、Tr均降低;而后期,表现出适宜氮、磷、钾施肥量有提高光合能力的优势,即氮、磷、钾养分缺乏或过量均会使后期光合能力降低.可见,适宜的氮、磷、钾用量(N240kg·hm-2、P2O5150kg·hm-2、K2O75kg·hm-2)可保持春玉米穗位叶净光合速率、气孔导度、胞间CO2浓度、蒸腾速率等光合指标的适宜状态,并能保持较长的高光合持续期,有效地提高玉米的光合作用,增加产量.     

小鼠激活素受体相互作用蛋白2的原核表达及抗血清制备

[目的]克隆小鼠激活素受体相互作用蛋白2（ARIP2）cDNA序列,利用大肠杆菌表达ARIP2,制备兔抗小鼠ARIP2的多克隆抗血清。[方法]采用RT-PER方法,将小鼠ARIP2基因克隆到pET-32a（＋）质粒,构建ARIP2原核表达载体并转化到大肠杆菌,IgrG诱导融合蛋白的表达,经亲和层析纯化获得可溶性重组蛋白,免疫家兔后制备ARIP2抗血清,分别采用ELISA,Western blot检测抗体效价和特异性。[结果]测序结果表明重组质粒pET32a（＋）-ARIP2构建成功;SDS-PAGE分析表明获得的重组蛋白为可溶蛋白;经过亲和层析后得到有效分离;Elisa法测定的抗血清效价为1：50000;Westernblot鉴定结果表明抗血清能与目的蛋白特异性结合。[结论]成功将ARIP2进行了原核表达并制备了高效价、高特异性的兔抗小鼠ARIP2抗血清,为进一步研究ARIP2功能提供了有力工具。     

猪链球菌2型epf基因的原核表达及其蛋白纯化

为了克隆、表达SS2菌株轲基因片段,分析蛋白活性,根据GenBank SS2 epf基因序列设计引物,克隆epf基因片段并进行序列分析,构建原核表达质粒pGEX4T-2-epf,在大肠杆菌中诱导带有GST标签的融合蛋白rEF-GST的表达;亲和层析法纯化融合蛋白rEF-GST,用凝血酶切除重组蛋白中的GST,获得纯化的EF抗原。经Westernblot鉴定,EF可与SS2多克隆抗血清发生特异性反应。     

五昧子醇甲的超临界CO2流体萃取及RP-HPLC分析

通过正交设计试验,探讨了超临界CO2法萃取北五味子果实中五味子醇甲的工艺条件,并建立了五味子醇甲的质量分数高效液相色谱测定方法。研究表明：最佳提取条件为萃取压力25MPa,萃取温度45℃,萃取时间60min,提取率可达到0.970％;以乙腈-水溶液为流动相,在zorbax Eclipse XDB-C18柱进行高效液相色谱分析,平均回收率为98.64％,相对标准偏差为2.908％,检出限为0.02μg/L。