花生AhPLDα基因植物过表达载体构建及对拟南芥的遗传转化

为了明确花生AhPLDα基因在响应干旱胁迫信号传导中的功能和作用机制,以ABA处理的冀花4号花生叶片c DNA为模板,用RT-PCR方法扩增AhPLDα1和AhPLDα2的全长CDS片段,采用酶切-连接的方法分别将这2个基因定向克隆到植物表达载体p Bar-F3上,冻融法将重组子转入根癌农杆菌GV3101,利用改良Floral-dip法将过表达质粒转入拟南芥。菌落PCR和酶切结果表明,Ca MV35S启动子驱动的过表达载体重组质粒p Bar-AhPLDα构建正确。通过RT-PCR和qRT-PCR验证,表明AhPLDα1和AhPLDα2基因整合到拟南芥基因组中并能过量表达,获得了阳性转基因纯合株系。干旱胁迫试验表明,转基因植株的耐旱性较野生型明显增强。可见,AhPLDα基因参与了干旱胁迫应答过程,是转基因途径提高作物耐旱性的潜在候选基因。     

卡那霉素筛选转基因小麦种子关键技术研究

对影响小麦卡那霉素筛选效果的培养基质和药剂处理方式进行了比较研究.结果表明:在种子吸胀阶段进行充分有效的卡那霉素浸种处理是提高卡那霉素筛选效果的关键技术;种子不经卡那霉素溶液浸种吸胀而直接在蛭石基质上,或用水浸种吸胀后再在蛭石等培养基质上进行卡那霉素处理,会降低小麦卡那霉素抗性筛选的效果.小麦种子幼苗的卡那霉素筛选,可用100 mg/L卡那霉素浸种至露白后再放到装有蛭石的培养皿上浇水即可,不需要再浇卡那霉素溶液.     

山羊转人乳铁蛋白基因成纤维细胞和乳腺上皮细胞单克隆的制备及扩大培养

[目的]为探索单个转基因阳性细胞快速扩大培养成为细胞克隆的技术体系。[方法]对转染人乳铁蛋白(Human lactoferrin,hLF)基因乳腺特异性表达载体pBLM-C1的单个山羊胎儿成纤维细胞(Fetal Fibroblasts,FF)和乳腺上皮细胞(Mammary Gland Epithelial,MGE)细胞进行克隆。在96孔板中,首先用3种浓度(V/V:0、50%和100%)的适应性条件培养基对单个转染细胞进行细胞单克隆的制备,进而把转染细胞单克隆与非转染细胞共培养进行扩大培养,neo基因被用于筛选基因,以PCR方法鉴定转染细胞基因组DNA。并对单克隆细胞进行染色体核型分析。[结果]与非适应性条件培养基相比,100%适应性条件培养基能够显著提高细胞单克隆存活率;与对照相比,转染细胞单克隆与非转染细胞共培养,显著提高了转染细胞单克隆扩大培养后的比率(FF:53.33%vs.10.00%;MGE:33.33%vs.6.670%),且明显缩短了扩大培养汇合时间(20～30 d);PCR鉴定结果表明,上述方法获得的克隆细胞整合有hLF目的基因;核型分析表明,大部分细胞克隆染色体正常。[结论]该研究可为分离转基因细胞、理想载体的插入及诊断提供一种可靠的方法,并能节省转基因动物生产的及费用时间。     

转ScMV-CP基因甘蔗的分子生物学分析与鉴定

采用改良的CTAB方法提取转基因甘蔗幼苗的基因组DNA,核酸蛋白测定仪分析及凝胶电泳结果表明,提取的DNA具有典型的DNA分子的标准紫外吸收光谱特点,DNA产量为45～60μg／100mg。同时根据质粒载体设计合成了2对引物,分别扩增新霉素磷酸转移酶(nptⅡ)基因和甘蔗花叶病毒外壳蛋白(ScMV-CP)基因。PCR检测结果表明,在53株待检测的样品中有24株同时含有这2种转基因成分,其中13株在Southern杂交中有杂交信号出现,其拷贝数为1～3个。     

抗虫基因及其在转基因棉花中的应用

随着现代分子生物学技术的发展,植物基因工程研究为植物抗虫育种开辟了新的途径,转基因抗虫棉的出现也有效地抑制了害虫对棉花作物的危害。本文讨论了多种抗虫基因,并论述了转基因抗虫棉的研究进展及其现实应用中出现的问题和对策。     

PiggyBac转座元件的构建及其在团头鲂基因组中的转基因效率

鳞翅目昆虫粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)的PiggyBac(PB)转座子已用于模式生物小鼠的转基因及插入诱变研究,目前,该转座子在养殖鱼类中的转基因效率如何还不清楚。构建了带PiggyBac转座子左臂、右臂、EF1α启动子和绿色荧光蛋白(eGFP)编码框的pPBs-EF1α-eGFP供体质粒。以50 ng/μL供体质粒和100 ng/μL体外转录的PB转座酶mRNA共同显微注射入团头鲂(Megalobrama amblycephala)1~2细胞期受精卵中,团头鲂eGFP的荧光表达率可达58.26%,PCR检测结果显示,该转座系统在团头鲂成鱼基因组中的整合效率为53.04%。表明PiggyBac转座子可高效介导基因在团头鲂基因组中的插入,为进一步开展团头鲂插入诱变研究奠定了基础。     

Advances in Insect-resistant Transgenic Rice and Its Developing Tendency

Focusing on several commonly used insect resistance genes,we reviewed the advances in insect-resistant transgenic rice,and analyzed the problems and developing tendency in transgenic rice research in this paper.     

Yield benefit and underlying cost of insect-resistance transgenic rice: Implication in breeding and deploying transgenic crops

The rapid development of transgenic biotechnology has greatly promoted the commercialization of genetically modified (GM) crops including the insect-resistant crops worldwide. Apart from the enormous yield benefits brought by the GM crops, the cryptic fitness cost associated with transgenes has also been detected under experimental conditions although it is considered to be rare. To estimate the yield benefit and cost of insect-resistant GM rice, we studied field performances of three insect-resistant GM rice lines, involving their non-GM parental variety as comparison. Great benefits as estimated by the yield-related traits were observed in the GM rice lines when high insect pressure was recorded, but a cryptic yield loss was detected when the level of insect pressure was extremely low. Given the fact that cryptic yield loss presented in the GM rice lines under the low insect pressure, a strategic field deployment should be required when insect-resistant GM rice are commercialized to circumvent the unnecessary yield losses. This is probably true for other insect-resistant GM crops. Effective biotechnology and breeding measures are also needed to particularly minimize the potential underlying cost of an insect-resistance transgene before commercial production of the GM crops.     

农杆菌介导玉米H99遗传转化体系的优化

遗传转化率低是转基因技术进一步发展的限制因素。优化玉米转化体系的研究大多以幼胚为受体材料、以GUS基因为报告基因,在一定程度上限制了取材的时间和数量。研究利用携带pCAMBIA1302（含绿色荧光蛋白基因-Green Fluorescent Protein）质粒的 EHA105菌株对玉米自交系H99的愈伤组织进行侵染,借助活体荧光检测技术对GFP基因的瞬时表达进行评价。结果表明,农杆菌侵染液浓度OD₆₀₀为 0.7～0.8、侵染时间20 min、共培养60 h时,GFP瞬时表达率最高,达到23.47%。     

国内外紫苏研究进展概述

本文概述了紫苏在开发利用、种质资源收集评价、栽培与生理、活性物质提取、组织培养、转基因及基因克隆表达分析等生物技术研究方面的国内外研究进展情况,以期为紫苏的深入研究和进一步开发应用提供参考,有效促进紫苏产业的发展。