三种中国原产雄性柿种质花粉离体萌发条件优化及其活力快速检测

本文以原产我国大别山区的两份完全雄性柿种质,‘雄株3号’、‘雄株8号’,以及偶开雄花的完全甜柿‘鄂柿1号’为试材,探讨不同浓度的蔗糖(100 g/L、150 g/L、200 g/L)、硼酸(100 mg/L、150 mg/L、200 mg/L)和硝酸钙(100 mg/L、150 mg/L、200 mg/L)对悬滴培养条件下花粉萌发的影响,同时比较碘-碘化钾(I₂-KI)和TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)染色法在花粉活力检测效果上的差异。结果表明,蔗糖对柿花粉离体萌发的影响最大;这三种花粉在蔗糖含量为200 g/L、硼酸含量为150 mg/L、硝酸钙含量为100 mg/L时萌发率最高;I₂-KI和TTC染色均可快速测定柿花粉活力,但前者测定需时更短;I₂-KI和TTC染色检测结果均低于悬滴培养法。因此,花粉活力检测以不同技术相结合的方式为宜。本研究结果可为柿遗传改良中花粉活力的检测提供科学依据。     

水稻种子TTC染色及萌发特性研究

[目的]开展水稻种子TTC染色试验条件及最佳组合筛选,探讨水稻种子萌发过程中主要生理指标的变化规律,对于完善水稻种子质量检测具有重要指导意义.[方法]应用单因素试验和正交试验设计比较种子吸水时间、TTC浓度、染色温度和染色时间4个因素对染色效果的影响,并筛选最佳的TTC染色试验组合;应用分光光度法测定不同萌发条件下水稻...     

基于TTC自交一代家系的粳稻品质性状遗传分析

运用3倍体的遗传模型对粳稻丙8979和C堡为亲本产生的TTC自交一代家系稻米品质进行了遗传分析.结果表明,垩白米率性状存在显著的上位性效应,糙米率、精米率、精米粒长、精米粒宽、长宽比、糊化温度、胶稠度、直链淀粉含量8个品质性状存在极显著的上位性效应,垩白大小性状未检测到显著的上位性,其遗传变异主要由加性、显性效应所引起,且加性变异分量起着主要作用.     

TTC染色指数配合Logistic方程鉴定山葡萄种质抗寒性

为了能简便、准确地鉴定山葡萄种质抗寒性,该研究以40份山葡萄种质1 a生休眠期枝条为试材,利用连有图像分析软件的扫描仪对各低温处理下枝段染色图像进行可视化评估,配合Logistic方程建立回归方程,确定其低温半致死温度。结果表明,枝段染色指数随温度降低而下降,染色指数变化规律符合Logistic方程;40份山葡萄种质低温半致死温度在-39.41～-29.75℃范围内,拟合度在0.956 4～0.999 3范围内,种质抗寒性差异明显;各种质低温半致死温度与其平均隶属度及田间萌芽率均呈极显著负相关,相关系数分别为-0.883 03和-0.876 70。研究结果证明TTC染色图像可视化评估配合Logistic方程鉴定山葡萄种质抗寒性可行,同时为山葡萄种质抗寒性评价及抗寒亲本选择提供了简单、可靠的鉴定方法。     

嗜热链球菌对乳中残留抗生素检测影响因素的分析

[目的]采用嗜热链球菌抑制法,检测牛乳中抗生素残留时指示菌嗜热链球菌,研究菌活力、添加菌量、菌传代数、培养温度、培养时间等因素,对其在多种条件下的生长状况及最低灵敏度的影响进行分析比较.[方法]采用GB/T 4789.27-2008嗜热链球菌抑制法(TTC法)所用嗜热链球菌的菌种纯化、活性、稀释比例、剂量、培养温度、培养时间进行筛选,对阳性,阴性对照结果进行比较,找出最低灵敏度.[结果]新复活的嗜热链球菌其活力逐渐提高,该菌适宜培养温度为37℃,1∶1稀释菌液适宜加入量为1 mL,培养时间2h,牛奶中抗生素残留最低检出限为0.004 IU/mL.[结论]TTC法具有简便、价廉、易于开展的优点,不需昂贵的仪器和设备,不受所检测的抗生素种类所限,各种影响细菌生长的抗生素均可检出,适用于各奶站及牛乳检测机构的抗生素残留检测.     

四唑染色法测定木豆种子生活力的研究

试验研究TTC浓度、染色温度和染色时间对木豆种子生活力的影响,探寻木豆种子生活力测定的最佳条件。结果表明:TTC法能够很好地检测木豆种子生活力,可用来估测种子的潜在发芽能力。30℃下浸种40 min后,置于40～50℃黑暗条件下、TTC浓度1.0%、染色40～60 min为木豆种子生活力测定的最佳条件,TTC浓度和染色时间在生活力测定中呈一定的线性关系。     

TTC和ELISA法检测纯牛奶中抗菌药物残留比较

采用TTC法、ELISA检测法对随机抽取的50份纯牛奶样品进行抗生素残留分析.TTC法测出抗菌药物阳性率为16%;ELISA法测出抗菌药物阳性率为20%,其中四环素残留阳性率为5%,链霉素残留阳性率为15%,青霉素残留阳性率为8%,磺胺二甲嘧啶检测全部为阴性,二者结果基本一致.结果显示,部分牛奶中有抗菌药物残留.     

青枯雷尔氏菌Tn5转座子无致病力突变株构建及其生物学特性

青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)是植物细菌性青枯病的病原菌,为研制植物疫苗菌剂提供遗传稳定且突变位点明确的青枯雷尔氏菌无致病力菌株,本研究利用EZ-Tn5转座子随机插入青枯雷尔氏菌(Rs91)构建青枯雷尔氏菌无致病力突变体库,通过电击转化,筛选获得13株具有无致病力菌株形态的突变株。研究了其中5株突变株的插入位点和生物学特性,结果表明,其插入位点分别位于phcA和pchS基因,其生长速率和相对胞外多糖含量显著低于Rs91,而最适pH值和温度未改变。其发酵液经分光光度计扫描,结果显示,突变株在同一波长下的光吸收值均大于Rs91,经聚类分析,显示它们与Rs91可聚为不同的3类,即Rs91为第Ⅰ类,phcA基因突变株为第Ⅱ类,phcS基因突变株为第Ⅲ类。经番茄(Lycopersicon esculentum)盆栽苗致病力检测,15d后均未发病,确定为无致病力青枯雷尔氏菌。本研究为研制防治青枯病的植物疫苗菌剂提供了基础资料。     

3种方法测定黑麦种子活力的比较研究

[目的]比较3种测定黑麦(Secale cereal L.)种子活力的方法,以确定适宜的测定黑麦种子活力的方法。[方法]以黑麦种子为研究材料,分别用TTC法、红墨水法、紫外吸收分光光度法3种常用的方法测定其种子活力,以蒸馏水法为对照。[结果]TTC法测定的黑麦种子平均发芽率与对照间不存在显著差异。红墨水法测定的黑麦种子平均发芽率比对照高出了10.13%,两者之间存在极显著差异。应用紫外吸收分光光度法测定时,在波长260 nm下,浸泡8 h后的黑麦种子浸提液的吸光值与种子活力之间有较好的相关性,能够在较大程度上反映黑麦种子的活力。[结论]该研究可为黑麦种子的生产、贮藏和检验提供理论依据。     

中国红豆杉种子超低温保存技术研究

【目的】探索中国红豆杉种质资源的超低温保存技术,为红豆杉种质资源的开发利用提供支持。【方法】采用多重单因素试验法,将中国红豆杉种子前处理后,采用9种不同的冷冻保护剂处理,之后分别进行0 ℃冷浴静置、25 ℃室温0.6 MPa抽真空和冰浴250 W超声波处理,处理时间分别为0,5,10和15 min;然后按照4种不同的冷冻方式投入液氮中冷冻保存,保存结束后分别采用37 ℃水浴快速、20 ℃流动自来水、5 ℃慢速和25 ℃室温静置进行解冻,最后探讨了在较优的3种冷冻保护剂条件下保存时间对红豆杉种子活力的影响。以氯化三苯基四氮唑（TTC）还原法测定冷冻保存后种子的活力。【结果】冷冻保护剂、保护剂处理方式和处理时间、冷冻方式、解冻方式、保存时间均对超低温冷冻保存后的红豆杉种子活力具有明显影响。9种冷冻保护剂中较优的是体积分数8%二甲基亚砜（DMSO）、体积分数5%乙二醇和PVS-4,冻存后中国红豆杉种子TTC还原量分别为（2.679 7±0.255 6）、（2.290 4±0.040 7）和（2.055 5±0.009 9） mg/g;冰浴250 W超声波处理10 min的效果最好,TTC还原量为（2.143 1±0.098 6） mg/g;4种冷冻方式中－20 ℃预冻1 h后投入液氮保存红豆杉细胞活性相对较高,TTC还原量为（2.454 4±0.069 5） mg/g。37 ℃水浴快速解冻后细胞活力更高,TTC还原量为（2.469 7±0.022 1） mg/g。【结论】红豆杉种子的最佳超低温保存技术条件为：采收后的新鲜种子干燥后于5 ℃条件下放置9个月打破其休眠,然后机械去掉种子硬壳,用蒸馏水浸泡12 h,脱去种子内皮,在无菌条件下用体积分数75%酒精消毒30 s,无菌水冲洗2～3次,沥干,移入冷冻管中,加入体积分数8% DMSO冷冻保护剂,封口,于冰浴250 W超声波条件下浸泡处理10 min,于-20 ℃预冻1 h后置于液氮中冷冻保存72 h,然后在37 ℃水浴中快速解冻。在此条件下,中国红豆杉种子活力最高,TTC还原量可达（2.469 7±0.022 1） mg/g,而且同等条件下,选用PVS-4冷冻保护剂更有利于红豆杉种子的超低温长期（1个月以上）保存。