绵羊CCL19基因启动子活性分析及其转录调控元件筛选

【目的】 鉴定绵羊趋化因子C-C基序配体19(C-C motif chemokine ligand 19,CCL19)基因启动子的核心启动子区域和关键转录因子,探究该基因在转录调控方面的作用机制。【方法】 选取绵羊CCL19基因5'-侧翼序列1 000 bp,PCR扩增启动子的7个不同长度的截短片段,并连接至pGL3-Basic质粒;将重组质粒与pRL-TK质粒共转染到293T细胞中,结合双荧光素酶报告基因检测系统分析不同截短片段的相对荧光活性。利用在线预测软件分析和筛选CCL19基因核心启动子区域内的转录因子结合位点。采用定点突变技术构建转录因子结合位点缺失的荧光素酶报告载体,与pRL-TK质粒共转染到293T细胞,分析转录因子结合位点缺失质粒的相对荧光活性。【结果】 成功构建了7个不同长度(pGL3-P、pGL3-P1、pGL3-P2、pGL3-P3、pGL3-P4、pGL3-P5及pGL3-P6)的CCL19基因启动子片段的荧光素酶报告载体;采用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定出转录起始位点上游－256/－186 bp为CCL19基因启动子核心启动子区域,表明该区域对CCL19基因转录调控有重要作用。生物信息学分析预测到该区域存在POU5F1(-201/-189 bp)、ZBTB26(-228/-217 bp)、FOXI1(-239/-228 bp)、GLI2(-255/-243 bp)和SP2(-219/-211 bp) 5个转录因子的结合位点,并成功构建了转录因子结合位点缺失的荧光素酶报告载体。双荧光素酶报告基因检测系统分析显示,POU5F1转录因子的结合位点缺失后绵羊CCL19基因转录活性极显著降低(P<0.01),FOXI1、ZBTB26、SP2转录因子结合位点缺失后绵羊CCL19基因转录活性均极显著升高(P<0.01)。【结论】 试验成功构建CCL19基因启动子荧光素酶报告载体,确定CCL19基因启动子的核心启动子区域为转录起始位点上游－256/－186 bp,并鉴定出转录因子POU5F1结合位点可能是CCL19基因转录的重要调控位点,为下一步研究绵羊CCL19基因在先天性免疫、适应性免疫和淋巴细胞迁移等方面的功能提供理论基础。     

美洲黑杨优良品种T26和T66无性繁殖技术

美洲黑杨无性系T26和T66是山东省林科院于1987年由土耳其引进、1995年选育出的两个速生优良无性系，于1997年又在山东省各杨树栽培区，同引进的全国各地选育的50多个优良无性系一起，进行了育苗试验和区域化造林对比试验，结果表明：T26和T66在山东省具有生长速度快、材质好、抗逆性强和生态适应范围广等优良特性，是营建胶合板林和纸浆林的优良品系，2002年已通过山东省林木良种审定，     

竹材利用标难及其国际标难化的需要

文章阐明了制定竹材利用标准的意义、原则和思路，分析了我国竹材利用标准的现状，并对标准所涉及的内容进行了描述。通过与印度竹材物理力学性质标准的对比，和试验验证加载速度对竹材力学性质测试结果的影响，指出了我国竹材利用标准的不足及竹材利用标准的国际标准化的需要。     

工能基因组学:T-DNA介导的基因诱捕和植物基因鉴定(英文)

拟南芥菜、水稻、蕃茄、土豆、玉米、小麦和大豆的全基因组测序为植物细胞和发育生 物学研究提供了许多有用的信息。基因组学的中心任务是利用这些信息去探索蛋白质的功能 和鉴定与发育有关的重要基因。尽管依赖于毁坏基因和产生可识别的突变表型的经典遗传学 方法仍然是极为成功的基因鉴定方法，借助于报告基因结构，随机插入植物基因组的T-DNA 介导的基因诱捕正发展成为植物细胞和发育生物学研究的极强有力的技术。本文描述了基因 诱捕、启动子诱捕和增强子诱捕在植物生物学中的应用，并且希望这些基因鉴定方法有助于 植物分子生物学家和生物技术工作者的研究。     

改进马尾松育苗方法的试验

对马尾松采用控制苗木密度、芽苗截根移栽和接种菌根菌等技术进行育苗试验，结果表明：苗木密度应控制在１５０株／ｍ２，芽苗截根以保留主根长度１／２为宜；采用厚环乳牛肝菌进行人工接种效果较好。     

准连续T型梁桥支座替换工程施工技术

橡胶支座应用广泛，但由于产品质量、使用寿命、老化等问题，所以支座替换成为工程界关注的问题。本文着重介绍准连续T型梁桥支座替换工程施工技术，并分析支座病害原因。     

皮肤组织特异性VEGF基因抑制表达载体的构建

基于四环素基因表达调节系统,构建可特异性抑制皮肤组织VEGF基因表达的四环素转录沉默子表达载体。设计并合成含有限制性内切酶酶切位点的引物,以人类基因组DNA和实验室现有质粒为模板,分别PCR扩增出皮肤组织特异性启动子K14序列和四环素转录沉默子tet R-Krab序列,依次插入到真核表达载体p CAGGS的多克隆酶切位点,构建p CAGGS-K14-tet R-Krab载体。酶切鉴定和DNA测序结果表明载体构建正确,可以用于小鼠受精卵显微注射。成功构建了可特异性抑制皮肤组织VEGF基因表达的转录沉默子表达载体,为建立皮肤组织特异性VEGF基因抑制鼠模型奠定基础。     

DNA甲基化标记及其在猪生产上的研究进展

<正>表观遗传学是在不影响DNA序列变化的前提下,而发生的可遗传基因表达的变化[1]。DNA甲基化是重要的表观遗传学现象之一,它的主要作用是通过与转录因子相互作用或者改变染色质的结构来抑制基因的表达[2],启动子区和转录起始位点的DNA的甲基化作用尤其突出,DNA甲基化参与生命体活动的很多过程,目前检测DNA甲基化     

茄子U6启动子克隆及CRISPR/Cas9介导的基因编辑体系建立

利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)U6RNA保守序列从茄子(Solanum melongena L.)基因组中鉴定到7个U6 RNA,并采用PCR技术成功克隆其启动子序列.GUS染色结果表明4个茄子U6启动子(SmU6-1P、SmU6-2P、SmU6-4P 和 SmU6-7P)具有转录活性.构建以 ...     

CaKR1上游启动子分离及其表达分析

运用基因组步移技术分离获得了CaKR1基因上游-1594 bp的启动子序列,命名为CaKR1p,发现其中含有SA、ABA、低温等信号应答原件以及其它诸如W盒等应答逆境胁迫的调控原件。进一步构建CaKR1p与GUS报告基因融合的植物表达载体,获得了烟草转基因植株及其相应的T1代株系,利用T1代转基因株系分析了CaKR1p在几种外源激素处理下的GUS基因的表达,结果表明外源激素SA、JA和ABA的诱导处理均可激活该启动子下游报告基因GUS的表达,说明CaKR1的表达和作用受到SA、ABA以及JA等信号通路调节。