表达抑制山羊痘病毒ORF095 shRNA的山羊成纤维细胞系的建立

将已经通过体外验证能够有效抑制山羊痘病毒复制的shRNA转入山羊体细胞,构建其表达细胞系.将已经通过验证能够靶向抑制山羊痘病毒ORF095基因并有效抑制GTPV的pGPU6/GFP-ORF095-siRNA-70转染山羊原代成纤维细胞,经800μg/mL G418抗性筛选7～8d后,用含200μg/mL G418和10～15ng/mL EGF的培养基进一步单克隆化并将单克隆细胞扩大、传代培养,应用RT-PCR检测及测序鉴定所构建的细胞系.结果表明:本试验获得的1株成纤维细胞系基因组含有ORF095-siRNA-70表达框架,为进一步进行体细胞克隆转基因动物的制备和RNAi体内抗山羊痘病毒的研究奠定了基础.     

铬暴露对草鱼的氧化损伤及抗氧化能力的影响(英文)

[目的]研究铬暴露对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)的氧化损伤及抗氧化能力的影响。[方法]将草鱼暴露于不同浓度梯度(0、7.23、14.47和28.94mg/L)的重铬酸钾水体中,于96h测定肝胰脏中丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)水平和谷胱甘肽硫转移酶(GST)的活性。[结果]在试验梯度范围内,随着六价铬(Cr6+)浓度的增加,草鱼肝胰脏的MDA含量呈上升趋势;T-AOC水平呈现出先升高后下降的规律性变化,表现为低和中浓度(7.23和14.47mg/L)下被诱导,而高浓度(28.94mg/L)下则诱导减弱,其中14.47mg/L组的T-AOC水平显著高于对照组(P<0.05);GST活性除低浓度组(7.23mg/L)有轻微诱导外,其余各组总体呈下降趋势,其中高浓度组(28.94mg/L)的GST活性显著低于对照组(P<0.05)。[结论]六价铬可以引起草鱼肝胰脏组织发生更大的氧化损伤而使其出现中毒现象,可能进一步损伤其组织结构和生理功能。     

甘蓝型油菜优质高配合力质不育系南A6的选育与应用

本研究拟改良已有高配合力甘蓝型油菜细胞质雄性不育系的品质,以不育系南A2作母本、双低品系92-2作父本测交并连续回交,结合品质定向选择和配合力分析,加速优质不育系选育速度。研究结果：成功选育出低芥酸低硫苷不育系南A6。南A6于2002年3月通过四川省农作物品种审定委员会组织的鉴定,具有不育性稳定、品质优、一般配合力高、农艺性状优良、异交结实率高、抗逆性强、适应性广等特点,与6个恢复系配制出2个高产组合和4个优质组合通过省级或国家审定。研究结果表明不育系南A6已成为四川省油菜雄性不育杂种优势利用的主体不育系,具有广阔的应用前景。     

牛分支杆菌CFP-10的原核表达及其在牛结核病诊断中的应用

低分子质量的蛋白抗原CFP-10是一种重要的牛分支杆菌早期分泌蛋白.为了检测该蛋白和其他几种抗原在牛结核病诊断中的临床应用,对CFP-10的基因进行克隆,鉴定,并在原核系统中表达.PCR法扩增cfp-10基因片段,连接到pET-22b( )原核表达载体中,再转入表达宿主E.coli BL21(DE3)PlysS菌株内,用IPTG诱导,进行蛋白表达、纯化.分别以CFP-10、ESAT-6、MPT83、MPT70、牛PPD、CFP-10与ESAT-6混合蛋白,MPT83与MPT70混合蛋白为抗原,用间接ELISA法诊断牛结核病.结果表明,以CFP-10与ESAT-6混合蛋白作为抗原检测牛结核病的特异性和敏感性分别达到了100%和63.6%,均超过了其他单抗原或抗原组合,为以筛选合适抗原为基础的血清学诊断技术提供了有力的支持并创造了良好的应用前景.     

A Novel Alginate Lyase: Identification,Characterization, and Potential Application in Alginate Trisaccharide Preparation

Alginate oligosaccharides (AOS) have many biological activities and significant applications in prebiotics, nutritional supplements, and plant growth development. Alginate lyases have unique advantages in the preparation of AOS. However, only a limited number of alginate lyases have been so far reported to have potentials in the preparation of AOS with specific degrees of polymerization. Here, an alginate-degrading strain Pseudoalteromonas arctica M9 was isolated from Sargassum, and five alginate lyases were predicted in its genome. These putative alginate lyases were expressed and their degradation products towards sodium alginate were analyzed. Among them, AlyM2 mainly generated trisaccharides, which accounted for 79.9% in the products. AlyM2 is a PL6 lyase with low sequence identity (≤28.3%) to the characterized alginate lyases and may adopt a distinct catalytic mechanism from the other PL6 alginate lyases based on sequence alignment. AlyM2 is a bifunctional endotype lyase, exhibiting the highest activity at 30 °C, pH 8.0, and 0.5 M NaCl. AlyM2 predominantly produces trisaccharides from homopolymeric M block (PM), homopolymeric G block (PG), or sodium alginate, with a trisaccharide production of 588.4 mg/g from sodium alginate, indicating its promising potential in preparing trisaccharides from these polysaccharides.     

低温对2种紫草科植物△6 脂肪酸脱氢酶基因表达的影响

以紫草科植物新疆软紫草(Arnebia euchroma)和假狼紫草(Nonea capsica(willd.)G.Don)为材料,翻译延伸因子EF1a为内参基因,利用半定量逆转录聚合酶链式反应(semi-RT-PCR)技术,对2种紫草植物中γ-亚麻酸合成关键酶基因△6-脂肪酸脱氢酶基因的表达进行研究。结果表明,△6-脂肪酸脱氢酶基因在紫草植物的叶、茎、根中均表达,在低温诱导不同时间后紫草植物叶片中△6-脂肪酸脱氢酶基因的表达有所增强。气相色谱分析显示,其产物γ-亚麻酸在低温下积累,推测紫草科植物叶片中△6-脂肪酸脱氢酶基因表达量增加可能与适应低温胁迫的逆境有关。     

鸡白细胞介素-6原核表达及双抗夹心ELISA方法的建立

应用分子生物学技术原核表达ChIL-6，以ChIL-6重组蛋白为免疫原，按免疫程序分别制备兔抗和鼠抗IL-6重组蛋白的多克隆抗体。应用此抗体建立双抗夹心EL-ISA方法后，为了优化此方法本试验对该方法的最佳试验条件、标准曲线、重复性和初步应用进行确定。结果显示，经SDS-PAGE和Western-blot分析，表明ChIL-6在大肠杆菌中正确表达，为了建立检测ChIL6的双抗夹心ELISA方法，本试验应用表达的重组蛋白制备兔抗和鼠抗多克隆抗体。建立的双抗夹心ELISA方法最佳反应条件为包被抗体的质量浓度为50mg／L，4℃过夜；酶标二抗稀释度为1：400，37。C1h；应用该方法检测感染金黄色葡萄球菌后的ChIL-6，其结果与本实验室之前应用人的ELISA试剂盒检测的结果相似。结果表明，本试验建立的检测ChlL-6的双抗夹心ELISA方法可用于临床。     

GLIS6下用EXCEL数据实现读者信息批量快速导入的方法

为新生读者办理借阅证是高校图书馆流通管理的一个基础环节,如何短时间内为学生办好借阅证,是摆在各家图书馆面前一项急需解决的问题。通过在实践中摸索,找到了一种利用Excel数据,实现读者信息批量快速导入SQL数据库的方法,从而极大地提高了办理借阅证的效率。     

山丹马6-磷酸葡萄糖脱氢酶及葡萄糖磷酸异构酶的多态性研究

用淀粉凝胶电泳及琼脂覆盖技术对山丹马的血液红细胞6磷酸葡萄糖脱氢酶和葡萄糖磷酸异构酶的电泳变异进行了测定。在6磷酸葡萄糖脱氢酶座位发现了3种表现型,即FF,FD和FS,其频率分别为0.958,0.021和0.021。在葡萄糖磷酸异构酶座位发现了两种表现型,即II和FI,其频率分别为0.771和0.229。等位基因频率直接通过表型计算出:PGDF为0.979,PGDD为0.0104,PGDS为0.0104;GPIF为0.1146,GPII为0.8854。亲子关系排除概率在6PGD和GPI座位点分别为0.1009和0.0912。两座位的个体识别概率分别为0.081和0.353。     

Effect of pyrethroids on carbohydrate metabolic pathways in common carp,Cyprinus carpio

The activity levels of succinate dehydrogenase (SDH) and glucose‐6‐phosphate dehydrogenase (G6PD) were assessed in various tissues of Cyprinus carpio var communis which had been exposed to lethal concentrations of group‐II pyrethroids (deltamethrin, cypermethrin, fenvalerate and fluvalinate) for a period of 72 h. The results indicated a steady decrease in SDH activity with a concomitant increase in G6PD activity. The decreased SDH activity indicated inhibition of SDH at mitochondrial level and the increased G6PD activity an enhancement of an alternative pathway of carbohydrate metabolism, viz the hexose monophosphate shunt (HMP) or pentose phosphate pathway as a biochemical adaptation to overcome the toxic stress. © 2001 Society of Chemical Industry