RNA干扰及其抗口蹄疫病毒复制的研究进展

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是指由双链RNA（double strand RNA,dsRNA）介导的序列特异性RNA降解作用。已经证明,在植物和昆虫细胞中RNAi是其主要的抗病毒机制,但迄今为止,几乎没有发现哺乳动物细胞感染病毒后能自发诱导有效的抗病毒RNAi反应。为此,通过人工方法在哺乳动物细胞中建立有效的抗病毒RNAi便成了国内外学者孜孜探索的重要抗病毒策略之一。目前,RNAi的分子机制及其功能仍然有待更加深入地研究与阐明,但它作为一种反向遗传学手段已经在基因组结构与功能研究中得到广泛运用,不仅在抗多种哺乳动物病毒的研究方面取得了令人振奋的结果,而且已作为一种治疗策略运用于人类抵抗重大遗传性和病毒性疾病的研究当中。笔者对RNAi的分子机制,及其抗口蹄疫病毒复制的相关研究进展作了有关介绍。     

三种梨果皮总RNA提取方法的比较研究

以西洋梨品种‘早红考密斯’、‘香红蜜’和白梨品种‘华酥’成熟果实为试材,采用Plantol总RNA提取试剂盒法、改良CTAB法和SDS法提取果皮中总RNA,并通过凝胶电泳、核酸蛋白分析仪和RT-PCR检测所提取总RNA样品的质量.结果表明,Plantol试剂盒法和改良CTAB法提取的RNA,经RT-PCR后得到的条带清晰,与目的片段大小一致,可以满足基因表达分析等试验的要求;而SDS法所提取的部分RNA,RT-PCR扩增不到目的片段,难以达到进一步试验的要求.     

Interference elimination of PCB and its ramification in determining trace PBBs/PBDEs by GC/MS

The normal method to determine the trace brominated flame retardants such as polybrominated biphenyls (PBBs) and polybrominated diphenylethers (PBDEs) contained in the electronic and electrical products is gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS). However, the method is based on the determinations of the persistent organic pollutants (POPs) such as polychlorinated biphenyls (PCBs), and polychlorinated naphthalene (PCNs) etc. The interferences of those compounds are inevitable. Therefore, in order to overcome this problem, two methods e.g. 1) The combination use of gas chromatography negative ion chemical ionization mass spectrometry (GC-NICI-MS) and gas chromatography-electron impact-mass spectrometry (GC-EI-MS) is employed, 2) a matrix solid-phase dispersion (MSPD) method with YMC ODS-C18 as carrier is developed. The result show that, by the former method, the brominated isomers or ramifications are distinguished remarkably from other halogen compounds because that anion fragment retention peaks of ［Br］-, ［HBr2］- and molecule chain fragment retention peaks of ［M+2］+,［M+4］+,［M+6］+,［M+8］+ are observed simultaneously, and thus the selectivity to determine bromine-containing retardant flames is greatly improved. Using the latter method, the gas chromatographic peaks of multiple polychlorinated biphenyls and polybrominated diphenylethers can be efficiently separated. Thus provides a project to solve interferences of POPs in brominated flame retardants’ determinations. The standard addition experimental results of 10 kinds of BDEs/PCBs belonging to 8 sorts of electronic and electrical equipment show this method has a high precision and reliability due to 60%～98% recovery and <9.5% relative error, which meet the needs regulated by the IEC Commission. It provides a technical support for electronic and eletrical industries in China to further comply with RoHS directive.     

复合酶制剂对樱桃谷肉仔鸭小肠黏膜的形态及DNA、RNA含量的影响

试验选用180只体重为(59.46±0.09)g的1日龄樱桃谷肉仔鸭,随机分为4组,每组3个重复(栏),每栏15只鸭,分别饲喂玉米-豆粕型、稻谷-玉米-豆粕型和稻谷-玉米-豆粕型日粮 500 mg/kg或1000 mg/kg复合酶制剂日粮.在试验的第7和14天,每重复选取体重相近的5只肉仔鸭进行屠宰,在十二指肠远端、空肠中端和回肠中端分别截取5 cm和10 cm的两段相邻肠段,观测了小肠绒毛高度、隐窝深度、绒毛宽度,并测定了黏膜DNA和RNA含量.结果表明,在1～14 d肉仔鸭稻谷型日粮中添加复合酶制剂可使十二指肠的绒毛高度显著增加,而对小肠黏膜DNA和RNA的含量无显著性影响;在8～14 d,添加1000 mg/kg复合酶制剂可显著增加空肠和回肠的绒毛高度.     

犊牛血液RNA含量用作奶牛遗传标记的研究

本研究采用作试验改进的脲－酚－氯仿－醇－ＳＤＳ系统方法，对江西畜牧良种场奶牛一分场的黑白花奶牛群的５头公牛家系的１９１对母女牛进行了血液ＲＮＡ的测定，分析了被测奶牛血液ＲＮＡ含量的变化的规律性及其与产奶量的关系，建立了利用血液ＲＮＡ含量估测产奶量的回归方程。测定分析结果：试验牛血液ＲＮＡ遗传力（ｈ＾２）及其与产奶量的遗传相关（ｒＡ）分别为０．８５５８（Ｐ〈０．０５）与０．５８１７（Ｐ〈０．０５）     

家蚕细胞cyclinA基因的干涉对家蚕细胞增殖的影响

[目的]研究小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)对家蚕卵巢细胞系(BmN)细胞cyclinA基因表达及细胞周期的影响.[方法]通过脂质体转染试剂将针对cyclinA基因的特异性siRNA片段转入家蚕BmN细胞,采用SYBR荧光定量PCR法检测cyclinA mRNA的表达,流式细胞技术检测细胞周期变化.[结果]转染siRNA-cyclinA可有效下调cyclinA基因的表达,转染48 h后,cyclinA mRNA表达量降低到对照的37.4％;流式细胞仪分析表明:与对照组相比,转染组Go/G1期细胞比例显著增加,细胞周期阻滞于G1期.[结论]靶向cyclinA基因的siRNA片段,通过下调cyclinA基因表达能有效抑制细胞增殖.     

大草蛉对桃蚜和夹竹桃蚜的捕食作用研究

大草蛉在我国分布广泛,能捕食多种农作物害虫。本试验首先研究了大草蛉一龄幼虫对桃蚜、大草蛉二龄幼虫对桃蚜和夹竹桃蚜的捕食功能反应。三个反应的最大捕食量Namax分别为144.93、303.03和151.51(头),瞬时攻击率a分别为0.7428、0.8654和0.6644。大草蛉一龄幼虫有较强的种内干扰反应,随着捕食者密度的增加,捕食作用率(E)依次为0.2025、0.1185、0.0866、0.0694和0.0584;对桃蚜的捕食作用率(E)与自身密度(P)的函数关系式为E=0.2025P-0.7727。在桃蚜和夹竹桃蚜的混合种群中,大草蛉二龄幼虫对桃蚜的选择效应大于夹竹桃蚜。     

布鲁菌感染小鼠RAW264．7细胞对IRGl基因的表达调控作用

针对小鼠RAW264．7细胞IRGl基N设计4个RNA干扰靶位,筛选出最佳干扰序列构建shRNA慢病毒载体质粒并包装获得慢病毒颗粒,进而经嘌呤霉素筛选获得稳转细胞系,实现IRGl基因在RAW264．7细胞基因表达的沉默。并通过布鲁菌l6M株及M5株感染基因沉默细胞对IRGl基因在布鲁菌感染中的作用进行研究。结果表明,慢病毒介导的shRNA高效、稳定地沉默了IRGl基因的表达,布鲁菌侵染RAW264．7细胞后IRGl基因表达上调。未试验为1RG1基因及相美调控基因抗布鲁菌病作用研究奠定了基础。     

不同方法提取淡色库蚊总RNA的定量比较分析

采用异硫氰酸胍法、Trizol法、Trizol改良法、CTAB法及Trizol+ CTAB 5种方法提取的淡色库蚊总RNA,以期得到最优方法.提取总RNA并用电泳及紫外分光光度计检测,经过Dnase I消化后反转录成cDNA,以此为模板,用CYP6F1引物作定量表达分析.结果表明,与其他几种方法相比,CTAB法提取的效果最好,提取的样品纯度高,完整性好,杂质较少,DNA残留少,降解不明显.CTAB法提取的RNA可以作为eDNA合成和基因克隆的模板,能够满足后续研究的需要.