犬瘟热病毒N蛋白基因融合蛋白原核表达条件的优化与蛋白纯化

[目的]提高犬瘟热病毒N蛋白基因在大肠杆菌中表达可溶性GST融合蛋白的含量.[方法]研究诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件对GST - CDV N融合蛋白表达的影响,获得在大肠杆菌中的最佳的表达条件,然后再在最佳条件下大量的表达,用GST - Sepharose 4B亲和层析柱对GST - CDV N融合蛋白进行纯化,得到最大量的可溶性融合蛋白,并对蛋白含量进行测定.[结果]大肠杆菌BL21 (DE3)转化菌在37℃培养3.5 h(OD600 =1.314)时,加入IPTG使终浓度为1 mmol/L,然后在27℃诱导8h,GST - CDV N融合蛋白可溶性表达量最高,达到0.862 mg/mL.[结论]确定了犬瘟热病毒N蛋白基因的优化表达条件,为犬瘟热病毒分子免疫学诊断和亚单位疫苗的研制奠定了基础.     

甘蔗线虫病抗性基因的PCR检测研究

以38份未经线虫病常规鉴定的甘蔗种质资源为供试材料,根据番茄抗根结线虫病基因和甜菜抗胞囊线虫病基因的保守序列区域,分别设计了2条上游引物、2条下游引物,对设计的引物进行组合后,应用PCR特异扩增从中分别筛选出各1对特异引物。用抗根结线虫基因设计的特异引物进行扩增最终获得了1条大约460 bp大小的特异片段;用抗胞囊线虫基因设计的特异引物进行扩增最终获得了1条大约690 bp大小的特异片段,进一步进行了PCR-Southern杂交,确认了该2条特异引物的真实性。     

双胍盐对柑桔青霉病防治效果试验

两年的抑菌、刻伤接种和果实贮藏试验表明,双胍盐对柑桔青霉病的防治效果与伊迈唑相接近,可作为苯并咪唑类的替换药剂。     

PCR-RFLP技术检测新嘉兴黑猪氟烷基因

本试验随机抽取嘉兴地区部分猪场新嘉兴黑猪血样,通过PCR-RFLP技术进行氟烷基因检测,结果表明,37头新嘉兴黑猪基因型均为NN,未出现Nn和nn基因型。检测结果为新嘉兴黑猪品种资源保护及合理开发利用提供理论依据。     

鸡肠炎沙门氏菌外膜蛋白F的原核表达及免疫原性分析

根据GenBank中收录的鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌辽宁分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因,用IEDB Analysis Resource在线预测分析,该基因可能存在15个线性B细胞抗原表位;同时将该基因克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组表达质粒PGEX-4T-1-OmpF,转入大肠杆菌BL21中,获得OmpF重组蛋白。Western-blot检测结果表明,该重组蛋白的分子质量约为66 kD(含标签蛋白),能被鸡沙门氏菌阳性血清识别,初步证实该蛋白具有免疫原性,为鸡肠炎沙门氏菌亚单位疫苗的进一步研究和开发奠定了理论基础。     

云南松松塔提取物对H22实体瘤小鼠模型的抑瘤作用

研究云南松松塔乙醇提取物(PEA)和碱水提取醇沉物(PED)对H22实体瘤小鼠的抑瘤作用。建立H22实体瘤小鼠模型,随机分组,灌胃给药,1次/d,给药10d。末次给药24h后,取血检测γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-10(IL-10)含量;剥离肿瘤组织并称重,计算抑瘤率;检测肿瘤组织匀浆中环氧化酶-2(COX-2)和前列腺素E2(PGE2)含量;石蜡包埋HE染色观察肿瘤细胞病理组织学变化。结果显示,PEA和PED各剂量组小鼠平均肿瘤重量较模型组显著减小;最大抑瘤率分别达46.11%和58.05%。PEA和PED各剂量组小鼠外周血中IFN-γ和IL-2含量较模型组显著升高;IL-4和IL-10含量较模型组显著降低。PEA和PED各剂量组小鼠肿瘤组织中COX-2和PGE2含量较模型组显著减少;给药组正常肿瘤组织减少,有出血和坏死,脂肪组织增多。结果表明,PEA和PED可抑制H22实体瘤小鼠的肿瘤生长,其机制与调节Th1/Th2细胞平衡和抑制COX-2与PGE2的表达有关。     

Evidence for estrogen receptor expression during medullary bone formation and resorption in estrogen-treated male Japanese quails (Coturnix coturnix japonica)

The temporal expression of estrogen receptor (ER)-α and ER-β mRNA was examined in male Japanese quails. Femurs of quails receiving 17β-estradiol underwent RTPCR and histochemical analysis 1 to 15 days after treatment. Untreated quails were used as controls (day 0). Between days 0 and 5, cells lining the bone endosteal surface differentiated into osteoblasts, which in turn formed medullary bone. Expression of ER-α was already observed on day 0 and increased slightly during bone formation whereas ER-β was hardly detected throughout this process. After osteoclasts appeared on the medullary bone surface, this type of bone disappeared from the bone marrow cavity (days 7~15). ER-α expression simultaneously decreased slightly and ER-β levels remained very low. These results suggest that estrogen activity mediated by ER-α not only affects medullary bone formation but also bone resorption.