大肠杆菌高效感受态细胞的制备及快捷转化体系的建立

比较了不同方法制备的大肠杆菌感受态细胞的转化效率,并优化了质粒DNA转化感受态细胞体系。结果表明:高效法制备的感受态细胞转化效率极显著高于普通法制备感受态细胞的转化效率,其效率提高了966.1%,而高效法感受态细胞转化效率与商品化的感受态细胞转化效率差异不显著。-80℃超低温长期保存时,相比较于15%甘油,以7%DMSO为冻存保护剂保存的感受态细胞其转化效率达到1.1×107,较15%甘油冻存保护剂保存的转化效率提高了69%。温浴5 min,冰浴10 min时,其转化效率最高,达到4.95×107。应用高效法制备的感受态细胞转化不同大小质粒的效率极显著高于普通大肠杆菌感受态细胞,其转化效率较普通大肠杆菌感受态细胞的提高了550%,而转化时间缩短至普通大肠杆菌感受态细胞的12.5%,仅为15min。     

DNA profiling of Capsicum landraces of Manipur

Seven chilli landraces of Manipur belonging to three cultivated species of Capsicum (Capsicum annuum, Capsicum frutescens, and Capsicum chinense) form economically important food crops of the region. The genotypes were characterized using ten random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers. The cluster analysis based on Jaccard's similarity coefficient calculated by UPGMA method differentiated the genotypes into two main cluster groups. One cluster represented the C. annuum genotypes while the other cluster represented the C. frutescens and the C. chinense genotypes. C. chinense genotypes were more close to C. frutescens genotypes. Genetic variation between the C. frutescens genotypes was more than among the C. annuum genotypes and the C. chinense genotypes were the least similar ones.     

镉对草莓幼苗根尖氧化系统和基因组DNA损伤的影响

采用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术和生理生化方法检测镉胁迫对草莓幼苗根尖氧化系统和DNA多态性的影响。结果表明,用5、10和15 mg · L-1镉（CdCl2 · 2.5H2O）处理6 d后,草莓幼苗根伸长及根系中可溶性蛋白质含量均受到抑制,根尖活性氧爆发（超氧阴离子产生速率升高和过氧化氢含量增加）,超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶活性下降,DNA增色效应减少。选用8条寡核苷酸引物（10 bp）对草莓幼苗根尖细胞中基因组DNA进行RAPD扩增,对照组图谱中可分辨出88条RAPD谱带,其分子量为150 ~ 3 500 bp,处理组与对照组RAPD图谱之间存在明显差异,且与镉浓度之间存在剂量效应关系。镉影响草莓幼苗根尖细胞中基因组模板的稳定性,活性氧爆发和DNA交联是根尖DNA损伤的主要原因,利用RAPD技术获得的DNA多态性变化可作为检测草莓根尖DNA损伤的指标。     

拟南芥主动去甲基化研究进展

介绍了模式植物拟南芥主动去甲基化的最新进展,包括酶学过程、调控机制、去甲基化与甲基化平衡机制、研究方法及其生物学意义。这些进展对其他植物而言,除对调控机制可进行补充研究外,还对作物的重要经济性状,如育性调控、种子形成和抗逆基因筛选等的深入研究具有重要参考价值。     

不同龄期果蝇DNA含量的检测与比较

[目的]测定8种果蝇不同龄期的DNA含量。[方法]从黑果蝇(Drosophila virilis)和黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)的7个突变品系的幼虫Ⅰ龄、Ⅱ龄、Ⅲ龄、蛹、成虫提取总DNA。使用紫外可见分光光度计对提取的DNA含量进行测定,并对提取的DNA进行了PCR效果检测。[结果]8种果蝇Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ龄幼虫DNA含量递增,大部分蛹和成虫DNA含量递减;果蝇5个龄期提取DNA的PCR效果均很好,成虫最佳,幼虫次之。[结论]幼虫、蛹和成虫的DNA质量均可保证PCR扩增、分子克隆、物种鉴定等实验的开展。     

鹿茸干细胞基因组DNA甲基化的检测方法

以鹿茸干细胞为研究对象,分别采用甲基化敏感性扩增多态性(MSAP)和荧光标记甲基化敏感性扩增多态性(F-MSAP)方法对鹿茸干细胞进行全基因组DNA甲基化检测。结果表明:MSAP方法共检测到387个位点,F-MSAP方法共检测出1 524个位点。2种方法所得结果中均发现Ⅰ型条带数最多,Ⅲ型条带数最少。与MSAP方法比较,F-MSAP方法在数据分析和实际操作过程中具有安全、高效、高通量、自动化等特点,更适用于检测鹿茸干细胞基因组DNA甲基化。     

Nsp9基因在Marc-145细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响

试验旨在验证Nsp9基因是否影响猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）的复制。构建含有Nsp9全长基因的质粒pIRES2-EGFP-Nsp9,并转染到Marc-145细胞中,接毒之后分别通过实时荧光定量PCR和Western blotting方法测定PRRSV N蛋白在mRNA和蛋白水平的表达。结果显示,转染Nsp9基因的Marc-145细胞上PRRSV的N蛋白在mRNA水平上显著高于未转染Nsp9基因的对照组（P<0.05）,是对照组的1.5倍,同时转染Nsp9基因后的Marc-145上PRRSV N蛋白水平也明显高于对照组。随着剂量的增加,N蛋白的表达量在mRNA和蛋白水平都有所增加。由以上结果初步可知,Nsp9基因可以在Marc-145细胞上促进PRRSV的复制,Nsp9基因与其复制密切相关。     

Dothistroma needle blight: an emerging epidemic caused by Dothistroma septosporum in Colombia

Plantation forestry in Colombia is based mainly on non‐native species of Pinus and Eucalyptus. Since 2008, a disease with symptoms similar to those of dothistroma needle blight (DNB) has been found affecting large areas planted to Pinus spp. The aim of this study was to identify the causal pathogen as well as to document the levels of disease incidence and severity. Isolates from each of three forestry zones, collected from different host species, were compared based on rDNA sequence of the ITS regions. These were conclusively identified as Dothistroma septosporum, one of two Dothistroma spp. known to cause DNB. Susceptibility was greatest on low elevation Pinus tecunumanii followed by Pinus kesiya and Pinus oocarpa. Pinus maximinoi and high elevation P. tecunumanii showed tolerance to D. septosporum. The disease incidence in the different zones varied significantly with the North zone being the most severely affected. This constitutes the first report of disease distribution and susceptibility of hosts, as well as the first consideration of the relative importance of D. septosporum in Colombia.     

基于毒性相关基因序列的稻瘟病菌群体遗传多样性分析

 选用16对毒性相关基因特异性引物对四川和重庆9个县(市)分离到的200个稻瘟病菌单孢菌株进行PCR扩增,并采用最长距离法进行聚类分析,结果显示各引物均能扩增出其目的条带,多态位点百分率(P)高达93.75%,扩增频率差异较大;200个菌株可归为70个不同的单元型,其中单元型SCH13为优势单元型;在0.86遗传相似水平上,200个菌株可划分为27个遗传宗谱,包括1个优势宗谱,3个亚优势宗谱,14个次要宗谱,9个小宗谱,层次丰富;在群体平均水平上,病菌群体具有丰富的遗传多样性(H=0.324 4,I=0.484 2),且群体间差异较大;9个种群在遗传距离为0.05水平上可分为4个类群,种群遗传谱系与地理区域分布呈一定相关性。同时,该地区的群体存在一定的遗传分化(HT=0.320 0),群体内多样性大于群体间多样性(Hs=0.179 6,Dst=0.140 4),总遗传变异的56.13%存在于群体内(Gst=0.438 7),群体间基因流动性较小(Nm=0.639 6)。本研究揭示了四川和重庆部分区域稻瘟病菌群体遗传结构、遗传多样性及其与地理分布之间的关系,为抗病育种和品种布局奠定了基础。     

耐辐射奇球菌DNA损伤响应开关蛋白PprI的研究进展

耐辐射奇球菌是迄今为止发现的最具辐射抗性的生物之一。其体内的Ppr I蛋白在整个DNA辐射损伤修复过程中起着必不可少的作用,ppr I作为一个细胞全局性的开关基因,协调控制DNA损伤响应与修复过程中众多细胞通路的基因表达。本文探讨了Ppr I在耐辐射奇球菌抗辐射和抗氧化中的生物学功能、相关结构功能以及对其他原核及真核生物抗逆性的影响,并展望了其潜在的生物学新功能与意义,旨在为进一步研究耐辐射奇球菌的辐射抗性机制提供理论依据。