CTAB法提取瓜叶菊不同组织基因组DNA的研究

获得高质量DNA是进行分子生物学研究的基础。通过CTAB法提取瓜叶菊叶、茎、花的基因组DNA,提取的DNA质量良好,电泳条带清晰,提取过程无明显的DNA降解,分子量接近21Kb。以提取的DNA为模板,用一对引物扩增瓜叶菊中与花色相关的特异基因,得到条带单一、大小与已知一致,说明提取的DNA可以满足相关的分子生物学研究。CTAB法提取瓜叶菊不同组织的DNA产率不同,其中叶的DNA产率最大,茎的产量居中,花的最低。     

云南甘蔗自育品种DNA指纹身份证构建

以云南27份甘蔗自育品种为材料,从国际微卫星协会提供的120对SSR引物中筛选出8对多态性丰富、品种区分率高、易统计的引物组成核心引物。8对SSR引物共产生129条带,123个为多态带,多态条带比例为95.35%,多态信息量平均为0.9445,品种相似性系数在0.269~0.767之间,其中引物SMC1047HA,MSSCIR21不仅多态性丰富,而且单个引物就可区分所有品种,是最有效的核心引物。8对核心引物两两组合的效率分析表明,MSSCIR36/MSSCIR2、MSSCIR16/MSSCIR36和MSSCIR36/SMC336BS是高效引物组合,可以完全有效区分所有品种,且品种相似性系数较低;同时使用蔗区种植面积较大的10个主栽品种验证3个高效引物组合,结果表明, MSSCIR16/MSSCIR36是最佳引物组合,不仅能有效区分所有云南自育品种,而且能将云南自育品种与10个主栽品种最有效地区分开。使用品种的国圃号、国家地区代码、育种单位英文缩写、核心引物名称和分子数据组成云南甘蔗自育品种的DNA指纹身份证,不仅包含了品种的重要信息,而且其中的分子数据可用于品种的真伪鉴定和遗传关系分析,为品种的知识产权保护提供有效的科学依据。     

小麦区试品系DUS测试的分子标记

为了确定测试小麦(Triticum aestivum L.)区试品系特异性、一致性、稳定性(DUS)的分子标记,采用156个来自我国不同麦区的品种对SSR、EST-SSR和AFLP-SCAR标记的1334对引物进行筛选,根据在染色体上分布均匀、多态性信息指数较高、带型清晰、不同等位变异的带型易于区分及PCR产物稳定的原则,筛选出105对小麦品种DUS测试的分子标记引物,包括63对SSR引物、21对EST-SSR引物和21对AFLP-SCAR引物,可以检测122个位点的754个等位变异,平均每条染色体上被检测位点5.8个,平均每个位点包含7.2个等位变异。根据DUS测试的需求、引物的染色体分布、PIC值大小和带型特点,将105对引物分为21对核心引物、29对一级备用引物和55对二级备用引物。核心引物分辨力较高,可以完成约80%品系的特异性检测,约95%品系的种子纯度检测和约60%品系的一致性、稳定性检测;备用引物用于确定品系DNA位点纯合率和相似品种(品系)之间的遗传相似系数,以判断DNA指纹相同或相似的品种(品系)之间的相似性和特异性,评价核心标记中具有非纯位点的品系的DNA位点纯合度,同时完成核心引物未能完成的少数品系的种子纯度检测。通过在2006-2007、2007-2008、2008-2009年度对464个冬小麦区试品系DUS测试中的应用,证明105对引物具有很好的代表性和实用性,可以完成90%以上参试品系的DUS检测。     

几种三华李基因组DNA提取方法的比较研究

以CTAB法、改良CTAB法、SDS法、改良SDS法、改良陈大明法、高盐低pH值法、SDSCTAB法和氯化苄法等8种目前常用植物基因组DNA提取方法为基础,通过采用异丙醇和无水乙醇进行2次常温短暂沉淀、提高离心力等多种去杂质措施进行适当改进,对它们用于三华李基因组DNA提取的效果进行比较。结果表明,8种方法中以CTAB法最优,改良CTAB法其次,高盐低pH值法稍逊,其他5种方法则不适合于三华李基因组DNA的提取;CTAB法不仅适合于早食李不同季节(4月、8月和12月)和不同成熟度叶(未展开嫩叶、展开嫩叶、成熟叶和老叶)基因组DNA的提取,也适合于华蜜大蜜李、白脆鸡麻李、大鸡麻李、中蜜李、小蜜李、串珠李、从化三华李、红线李、香蕉李、中熟李和软枝三华李等11个三华李品种嫩叶基因组DNA提取。     

猪繁殖与呼吸综合征核酸疫苗研究进展

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是威胁世界养猪业的最主要的疾病之一,每年都给养猪业带来巨大的经济损失。目前,世界上还没有对PRRS确实有效的防控措施,免疫预防是防控的主要手段。基因工程疫苗是现在疫苗研究的重点,特别是核酸疫苗不仅能引起体液免疫和激发较强的细胞免疫,而且其生产工艺简单,稳定性好,成本低,便于贮藏,不具有感染性,不会出现毒力返强等安全问题。现在对 PRRS核酸疫苗的研究已初具成效,现就核酸疫苗的研究进展进行综述。     

Molecular polymorphism of cytoplasmic DNA in Ficus carica L.: Insights from non-coding regions of chloroplast DNA

The trnL (UAA) intron and the intergenic spacer between the 3′ exon of trnL (UAA) and trnF (GAA) sequences were used as genetic markers for differentiating Ficus carica cultivars and establishing refined genetic relationships. The study was based on 20 fig cultivars, collected from south and centre of Tunisia. Since, the intron was thought to be more variable among close relatives than is the chloroplast spacer. The size of these non-coding regions varied from 554 to 589 and from 989 to 1022 bases pairs for the intron and the combined sequences correspondingly. The average of GC content was 33.9% and 34.6% in the intron and the combined intron and spacer respectively. High values of A + T contents were detected in both data sets and may explain the high proportions of transversions founded. The observed variation pattern of plastid DNA provides evidence of an important genetic diversity. The overall transition/transversion bias (R) was 0.202 in the intron and 0.27 in the combined regions. The RI index of 0.592 indicates that these combined sequences have clearly more homoplasy then the intron (RI = 0.705) and spacer (RI = 0.777) sequences separately. Phylogenetic trees were generated based on maximum parsimony (MP) and neighbor-joining (NJ) analysis of the chloroplast sequences data. Results proved that a typically continuous genetic diversity characterizes the local fig germplasm. In fact, relationships inferred from the cpDNA analysis suggest several clades, which do not show geographical or tree sex correspondence. Although the level of apparent diversity is considerable, we may conclude that non-coding regions of chloroplast genome provide a new and practical opportunity to evaluate genetic diversity and to discriminate fig cultivars. Revealed cytoplasmic DNA markers are reliable to elaborate a molecular data base to conduct management and breeding programs on local fig germplasm.     

冬瓜DNA提取方法的研究

采用CTAB、CTAB-Free、PVP、SDS 4种方法提取冬瓜DNA。结果表明：PVP法和CTAB-Free法提取的冬瓜DNA质量高,完全能满足分子生物学研究的需要。     

五重PCR检测转基因大豆的研究

随着转基因产品商品化,转基因植物、动物、微生物加工而成的转基因食品在传统食品市场中的份额在不断加大。然而,转基因食品中含有新的遗传物质,即外源DNA以及由外源基因鳊码的新蛋白,而传统食品是不存在这些情况的,并且传统食品经过人类几千年的食用证明是安全的。因此,转基因食品的安全性是摆在人类面前的重大难题。由于转基因食品的安全性在较短的时间内无法确定,因此,目前各国对转基因食品都采用标签制度进行管理,所以急需建立一套能够对转基因食品进行准确、快速检测的方法。文章的研究表明,五重PCR是一种可行有效的转基因大豆检测方法,具有广阔的应用前景。     

花粉管通道导入外源DNA方法的研究

在总结前人研究的基础上,认为花粉管通道法导入外源DNA的方法可分为花粉粒携带法、子房注射法和柱头切除法。3种导入外源基因的方法已在植物转基因育种研究中被广泛运用。在实际运用中应针对某一特定的受体植物,根据受体植物的雌蕊结构特点选择合适的导入外源基因的方法,可提高花粉管通道法的转化效果和转化率。