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应用竞争PCR定量检测猪IFN—γ mRNA 总被引:1,自引:0,他引:1
运用RT—PCR从经ConA体外刺激培养的猪外周血单核细胞(PBMC)提取的细胞总RNA中扩增猪γ—干扰素(IFN—γ)的部分片段,经酶切鉴定后双酶切缺失中间一小片段,将余下的2个较大片段连接,并用相同的引物在相同条件下扩增连接产物,从而获得截短的同源性片段。将其纯化后克隆于pMDl8—T载体,重组质粒经酶切和PCR鉴定后进行序列测定,验证无误后作为竞争性模板内对照,一定比例稀释后分别与等体积经刺激培养的PBMC总RNA反转录产物进行PCR,产物电泳后经扫描分析获得各目标条带与竞争条带的溴化乙锭(EB)嵌入光密度值(IOD),经校正后取上述两者比值的对数值作为Y轴,取已知竞争模板相应浓度的对数值作为X轴,绘制成竞争曲线。应用建立的竞争PCR对不同样品重复试验表明,本方法操作简单,结果可靠,稳定性高,适用于猪IFN—γ mRNA的定量检测。 相似文献
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枇杷辐射诱变育种研究:I.枝条辐射的适宜剂量及性状变异 总被引:5,自引:0,他引:5
提出用钴60-γ射线为辐照源处理解放钟枇杷枝条,辐射半致死剂量(LD50)为3000R左右,诱发有利突变的剂量为1500~2500R。辐射造成细胞损伤,早期变异主要是叶形畸变,有利变异有少核,高可溶性固形物,细肉质,丰产和短枝等类型,机率为0.48%同时可提前开花结果。 相似文献
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~(60)Co-γ射线辐射玉米干种子对影响当代(Mo)染色体断裂的研究表明,断裂频率以1号和具随体的6号染色体最高,7、9和10号染色体很低,且基本不受辐射剂量大小的影响。染色体断裂数量与染色体长度无显著相关。断裂常发生在异染色质与常染色质的结合处. 相似文献
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湖北省松滋市位于长江中游南岸,地处鄂西山地向江汉平原过渡地带。20世纪60年代开始发展柑桔生产,全市现有柑桔面积近1.3万hm^2,年产量10万t左右。2002年经国家农业部批准,被确定为全国宽皮柑桔优势区域,并成为全国水果(柑桔)无公害生产示范草地建设试点县。在长期生产中, 相似文献