1-O-Alkylglycerol Ethers from the Marine Sponge Guitarra abbotti and Their Cytotoxic Activity

The cytotoxicity-bioassay-guided fractionation of the ethanol extract from the marine sponge Guitarra abbotti, whose 1-O-alkyl-sn-glycerol ethers (AGEs) have not been investigated so far, led to the isolation of a complex lipid fraction containing, along with previously known compounds, six new lipids of the AGE type. The composition of the AGE fraction as well as the structures of 6 new and 22 previously known compounds were established using ¹H and ¹³C NMR, GC/MS, and chemical conversion methods. The new AGEs were identified as: 1-O-(Z-docos-15-enyl)-sn-glycerol (1), 1-O-(Z-docos-17-enyl)-sn-glycerol (2), 1-O-(Z-tricos-15-enyl)-sn-glycerol (3), 1-O-(Z-tricos-16-enyl)-sn-glycerol (4), 1-O-(Z-tricos-17-enyl)-sn-glycerol (5), and 1-O-(Z-tetracos-15-enyl)-sn-glycerol (6). The isolated AGEs show weak cytotoxic activity in THP-1, HL-60, HeLa, DLD-1, SNU C4, SK-MEL-28, and MDA-MB-231 human cancer cells. A further cytotoxicity analysis in JB6 P⁺ Cl41 cells bearing mutated MAP kinase genes revealed that ERK2 and JNK1 play a cytoprotective role in the cellular response to the AGE-induced cytotoxic effects.     

洱源丛枝瑚杀虫活性成分研究

洱源丛枝瑚(Ramaria eryuanensis)石油醚萃取物经过柱层析得到单体化合物B8,该化合物对小菜蛾3龄幼虫72 h的LC50为3.375 7 mg/mL。经FAB-MS、1HNMR、13CNMR及DEPT等波谱鉴定,并与文献值对照,确定其为麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇。     

转cry1Ab/vip3H基因水稻对非靶标害虫褐飞虱连续多代生长发育与繁殖的影响

实验室条件下,转cry1Ab/vip3H基因水稻G6H1对褐飞虱Nilaparvata lugens生长发育与繁殖的继代效应评价结果表明,不论是在苗期或是成株期,在各水稻品种上连续饲喂褐飞虱4代后,该虫各代的生长发育和繁殖参数都没有受到水稻品种的显著影响,即不论是在第1代、第2代还是第4代,取食G6H1与取食其非转基因亲本Xiushui 110相比,褐飞虱若虫的发育时间、成虫寿命和产卵量都没有显著差异。同时,2008年和2009年的田间调查结果表明,G6H1和Xiushui 110稻田间褐飞虱的若虫、成虫和成若虫总密度均无显著差异。     

不同光照和温度下白花鬼针草和金盏银盘种子萌发研究

通过在人工培养箱内模拟环境条件,探讨了不同光照和温度对白花鬼针草和金盏银盘种子萌发的影响,结果表明：光照和温度不是白花鬼针草种子萌发的必要条件,白花鬼针草种子萌发的温度适应范围比金盏银盘宽,在15＇12／10oc、20℃／15℃、25℃／20℃、30℃／25oC、35℃／30℃、40℃／35℃下均能萌发,在15％／10气、20％／15℃、25％／20℃、30~E／25℃时萌发率均达94％左右,金盏银盘种子在40％／35℃时不能萌发;温度影响白花鬼针草和金盏银盘种子萌发高峰的出现时间及峰值大小,而光照不影响。     

重组瘦蛋白对猪生长性能的影响

通过腹腔注射重组瘦蛋白研究其对猪生长性能的影响。结果显示,腹腔注射不同剂量的重组瘦蛋白,在注射后的1-2周内使猪采食量减少5%-7%(p<0.05),2周后采食量逐渐恢复正常;使猪的日增重和料重比有所降低,但差异不显著(p>0.05)。表明重组瘦蛋白对猪的生长性能无明显影响。     

PRRSV GP5蛋白在杆状病毒表达系统中的表达

参照包含猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) VR2332株完整ORF5基因的载体pMD18T-ORF5的核酸序列设计引物,扩增全长的PRRSV ORF5基因片段,同时以SOE-PCR技术扩增缺失信号肽和跨膜区的ORF5核酸片段ORF5NC,分别克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBac-HTA,获得重组转移载体pFastBacHTA-ORF5及截短表达的重组转移载体pFastBacHTA-ORF5NC。将供体质粒分别转化DH10Bac细胞,获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,在Sf9细胞中分别成功表达了全长的GP5重组蛋白和缺失信号肽、跨膜区的截短GP5重组蛋白。2种重组蛋白经纯化后,免疫小鼠制备抗血清,ELISA方法检测免疫GP5全长和截短重组蛋白的小鼠血清中抗体滴度分别为1∶800和1∶1 600,表明重组蛋白具有良好的免疫原性。本试验为进一步分析重组蛋白诱导中和抗体产生的能力以及为PRRSV基因工程亚单位疫苗的研究奠定基础。     

MDV Meq-clustered miRNAs基因缺失BAC克隆株的构建及其体外增殖特性

为构建缺失马立克氏病病毒(Mareks disease virus,MDV)Meq基因簇microRNAs(Meq-clustered miRNAs的突变株,本研究在vv MDV GX0101细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)克隆的基础上,采用Red/ET同源重组技术将Meq-clustered miRNAs的编码基因进行缺失突变,经PCR鉴定及序列分析证明Meq-cluster miRNAs序列成功缺失后,提取Δmeq-miRNAs BAC DNA,转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行病毒拯救,用SYBR GreenⅠqRT-PCR检测病毒体外增殖特性。结果表明成功拯救出缺失MDV Meq-clustered miRNAs基因的感染性BAC克隆株GX0101Δmeq-miRNAs,且该缺失株与亲本株GX0101BAC具有相似的增殖曲线,Meq-clustered miRNAs是MDV体外复制的非必需基因。MDV Meq-clustered miRNAs基因缺失感染性BAC克隆株的成功构建为进一步研究MDV Meq-clustered miRNAs在MDV致病和致肿瘤方面的作用奠定了基础。     

归芪甘草汤对小鼠免疫功能的影响

为研究归芪甘草汤对小鼠免疫功能的影响,该药液由黄芪、当归、炙甘草、熟地和党参组成,经传统水煎法获得浓度为1 g/mL药液;以环磷酰胺诱导建立小鼠免疫抑制模型,培健康小鼠和免疫抑制小鼠灌服药液;在试验第15天,应用流式细胞技术、溶血素测定法和腹腔巨噬细胞吞噬功能测定法,检测复方中药对小鼠T淋巴细胞亚群(CD4、CD8)、IgM和腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响.结果显示对免疫抑制小鼠,灌服药液和灌服蒸馏水小鼠相比较,CD4+/CD8+、IgM、吞噬功能百分率和吞噬指数差异极显著(P＜0 01);对健康小鼠,灌服药液和灌服蒸馏水小鼠相比较,CD4+ /CD8+比值差异不显著(P＞0.05),IgM值和吞噬百分率差异显著(P＜0.05),吞噬指数差异极显著(P＜0.01).表明归芪甘草汤具有增强昆明系小鼠免疫功能的作用,尤其是对免疫抑制小鼠的免疫功能增强更为显著.     

EIAV Rev蛋白拮抗eqTRIM5α介导的AP-1信号通路的机制研究

为探究马传染性贫血病毒(EIAV)附属蛋白Rev负调控Tripartite motif-containing protein 5α(TRIM5α)介导的AP-1信号通路的机制,本研究将pEIAV-Rev-HA和pcDNA3.1质粒分别与含TRIM5α基因的质粒及pGL3-AP-1-Luc(AP-1报告质粒)共转染HEK 293T细胞,采用荧光素酶试验检测Rev对TRIM5α激活的AP-1信号通路的影响;将pEIAV-Rev-HA和pcDNA3.1质粒分别与含TAK1、TAB2、P38和c-Jun基因的质粒及pGL3-AP-1-Luc共转染HEK 293T细胞,采用荧光素酶试验检测Rev对TRIM5α下游转导分子(TAK1、TAB2、P38、c-Jun)激活的AP-1信号通路的影响;将pEIAV-Rev-HA和pcDNA3.1质粒分别与含TAK1、TAB2、P38基因的质粒共转染HEK293T细胞,利用western blot试验分别检测TAK1、TAB2、P38的表达水平;将pEIAV-Rev-HA和pcDNA3.1质粒分别与含P38基因的质粒共转染HEK 293T细胞后加入蛋白酶体抑制剂MG132,利用western blot检测P38蛋白的表达情况。结果显示,共转染EIAV-Rev-HA实验组中TRIM5α对AP-1的激活倍数为0.4,而共转染pcDNA3.1对照组中相应的激活倍数为26.0;共转染pEIAV-Rev-HA实验组中,TAK1、TAB2、P38和c-Jun对AP-1信号通路的激活倍数分别为7.7、0.1、0.6、9.8,而共转染pcDNA3.1对照组中对AP-1信号通路的激活倍数分别为60.0、1.5、6.3、12.0;转染pEIAV-Rev-HA+pP38-Flag组与转染pcDNA3.1+pP38-Flag组相比,前者P38蛋白的表达量显著降低;加入蛋白酶体抑制剂组则恢复了P38蛋白的表达。上述结果表明,EIAV Rev显著下调eqTRIM5α及其下游转导分子TAK1、TAB2、P38激活的AP-1信号通路,但不显著下调c-Jun激活的AP-1信号通路;EIAV Rev通过蛋白酶体途径降解P38蛋白的表达而抑制eqTRIM5α激活的AP-1信号通路。本研究结果为理解EIAV与宿主蛋白相互作用提供参考依据。     

CnAβ基因对大鼠RBL-2H3细胞脱颗粒的影响

过敏是人和养殖动物常见的疾病,而且发生的频率呈现逐渐增加的趋势.为了深入了解过敏反应的机制,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建钙调磷酸酶A beta(calcineurin A beta,CnAβ)基因敲除的大鼠RBL-2H3细胞株,并探讨CnAβ基因对RBL-2H3细胞生长及脱颗粒的影响.选取大鼠Cn...