FQ-PCR在转基因产品检测中的应用研究进展

实时荧光定量PCR（real-time fuoreseent quantitative PCR,FQ—PCR）是近年来定量PCR技术中兴起的最新定量检测技术,因其具有灵敏性高、特异性强、结果精确、反应快速、安全可靠等优点,现已广泛应用于医学和生命科学的各个研究领域,论文就实时荧光PCR技术的主要原理、分类方法以及在转基因产品检测中的应用等进行简要综述。     

牛膝多糖对断奶仔猪抗菌肽Protegrin-1 Mrna表达的影响

本文旨在探讨牛膝多糖(ABPS)对断奶仔猪抗菌肽Protegrin-1(PG-1)mRNA表达的影响。试验采用单因子设计,按照日粮处理因素不同,设对照组、抗生素组、0.05%、0.10%和0.15%牛膝多糖组,共5个处理。选用28日龄杜长大仔猪160头,随机分入5个处理,每个处理4个重复,每个重复8头猪(公母各半)。采用半定量RT-PCR法,以18SrRNA为内标,检测PG-1mRNA相对表达量。结果表明:日粮中添加牛膝多糖均不同程度地促进断奶仔猪骨髓抗菌肽PG-1mRNA的表达。与对照组相比,0.05%、0.10%和0.15%牛膝多糖组分别使断奶仔猪PG-1mRNA的相对表达量增加14.9%(P>0.05)、36.4%(P<0.05)和7.3%(P<0.05);与抗生素组相比,其PG-1mRNA的相对表达量分别增加7.8%(P>0.05)、27.9%(P>0.05)和19.4%(P>0.05)。即牛膝多糖能显著促进断奶仔猪骨髓抗菌肽PG-1mRNA表达,且日粮中以0.10%添加量为适宜。     

安徽白山羊不同组织miR-143表达丰度的Real-time PCR检测

MicroRNA(miRNA)是一类重要的非编码小RNA分子,其通过对靶基因的转录后调控广泛参与真核生物生殖、发育、病毒防御、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等多种生命活动。采取比较基因组学方法,在对其他7种哺乳动物直向同源基因序列分析的基础上,设计特异性引物,应用实时定量PCR技术测定安徽白山羊心、肝、脾、肺、肾、卵巢、子宫、输卵管、肌肉等9种组织中miR-143的表达情况。结果表明,依据同源基因设计的引物,可以进行山羊miR-143基因特异性检测。安徽白山羊miR-143表达丰度以肺脏最高,肝脏最低;7种组织相对表达量由高到低依次为:肺、子宫、心、脾和卵巢、输卵管和肌肉、肾、肝。研究结果为进一步研究miR-143在山羊组织分化及生长发育过程中的作用提供了借鉴。     

鸡、鹌鹑及其杂交禽胚胎肌肉发育过程中MSTN和p21基因的表达规律

旨在研究MSTN和p21基因在鸡、鹌鹑和杂交禽胚胎肌肉发育过程中的表达规律,比较这2个基因在杂交禽与亲本鸡和鹌鹑中的差异表达,探讨MSTN和p21基因与肌肉发育的关系。通过人工受精获得鸡(♂)与鹌鹑(♀)杂交禽蛋,与鸡蛋、鹌鹑蛋按照鸡标准孵化条件同批入孵,采集第7～17天活胚胸肌组织,应用实时荧光定量PCR技术检测MSTN和p21基因在3个物种中每一天mRNA的相对表达量。MSTN和p21基因在胚胎肌肉发育的第7～17天均有表达,这2个基因mRNA的表达在鸡胚中第9天到达第1次峰值,在鹌鹑中第7天到达第1次峰值,后都随胚胎的发育表达水平上升,并维持相对稳定的高水平表达。杂交禽的表达规律与鸡一致,也在第9天达到峰值,而p21mRNA表达极显著高于鸡和鹌鹑(P<0.01)。MSTN mRNA表达规律与成肌细胞退出细胞周期的时间规律一致;在胚胎肌肉发育过程中,MSTN基因特异性上调p21的表达。     

板蓝根多糖对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响

150只14日龄蛋公鸡随机均分成3组,用新城疫传染性支气管炎二联(Newcastle disease-infectious bronchi-tis,ND-IB)弱毒苗点眼滴鼻免疫的同时,2个试验组分别肌肉注射高、低剂量的板蓝根多糖(Isatis root polysaccha-ride,IRPS)溶液,对照组注射生理盐水,每天注射1次,连续注射3次。分别于免疫后7、14、21、28、354、2 d各组随机抽取8只鸡翼下静脉采血,分离血清,用微量法测定新城疫血凝抑制(HI)抗体效价;于免疫后10、20、30、40、50 d每组随机抽取5只鸡心脏采血,分离淋巴细胞,用流式细胞仪双染色法检测CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞含量,并放血致死称取体质量和胸腺、脾脏、法氏囊的质量,计算器官指数。结果表明,板蓝根多糖高、低剂量组的HI抗体效价、CD4+/CD8+比值和免疫器官指数均明显高于对照组;提示板蓝根多糖对新城疫疫苗的免疫效果有明显的增强作用。     

1991—1992年内蒙古锡林郭勒盟、伊克昭盟等地冬、春载畜量预报

在开展全区天然草地初级生产力定位监测及利用遥感手段估测、预报天然草地牧草现存量的工作基础上，我们于1991年首次在锡林郭勒盟、伊克昭盟及乌兰察布盟、巴彦淖尔盟利用NOAA气象卫星资料结合地面同步测产，计算出23个旗（县）的冷季饲草贮量及冷季理论载畜量，为畜牧业生产部门提供科学参考数据。     

奶牛酒精阳性乳的防治

笔者近日接到不少奶农的求助电话,称其所养奶牛体况正常,但挤出的奶却不合格,奶站拒收,已经连续一周左右。按一头奶牛平均每天产奶25千克、每千克3元计算,像这种情况的奶牛已经损失500多元了。奶农心中很着急,奶牛究竟得了何病?经笔者详细了解、检查并分析、诊断,发现奶牛所患酒精阳性乳。现把该病的防治情况报告如下,以期对奶农有所帮助。酒精阳性乳是指新挤出     

Nsp9基因实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在感染细胞过程中表达量的变化

试验旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）Nsp9基因的实时荧光定量PCR检测方法,并探究其在感染细胞过程中表达量的变化。根据PPRSVNsp9基因序列设计引物,建立基于SYBR Green Ⅰ检测模式的实时荧光定量PCR。结果显示,PRRSV Nsp9基因在1×10⁴~1×10⁸拷贝/μL范围内有很好的线性关系,扩增产物的熔解曲线只有1个单特异峰,无引物二聚体。该方法与猪戊肝病毒（HEV）、猪流感病毒（SIV）、伪狂犬病病毒（PRV）基因组均无交叉反应,可重复性好,组内变异系数小,可用于临床PRRSV检测。在病毒感染细胞过程中,Nsp9基因表达量逐步升高,36 h达到最高。本研究为探究病毒复制规律与临床疫苗生产奠定了理论基础。