光慈姑主要成分分析测定

采用高效液相、碘显色法和苯酚-浓硫酸显色法,对光慈姑的秋水仙碱、淀粉和多糖的含量进行了分析测定;并对多糖提取条件进行了初步探讨.实验结果表明,在562nm波长下,线性方程为:y=0.00807x+0.00713,r=0.99945(n=10);平均回收率=99.36%,淀粉含量0.2753g/g.在489nm波长下,线性方程为y=0.01048x-0.02186,r=0.99905(n=9),平均回收率为98.67%,多糖含量0.1134g/g.在350nm波长下,线性方程为y=8959.47951x-20001.65556,r=0.99737(n=9),平均回收率为98.12%,秋水仙碱含量0.0754 g/g.采用95%乙醇进行沉淀,多糖的含量较高.     

慈姑中秋水仙碱的提取及抗炎作用研究

[目的]研究慈姑中秋水仙碱的最佳提取工艺及抗炎作用.[方法]考察乙醇浓度、提取时间、提取温度和料液比对慈姑中秋水仙碱提取率的影响,在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交试验优化提取工艺参数.根据最佳提取工艺,采用高效液相色谱法,测定慈姑中秋水仙碱的含量.通过体外抗炎试验,来评价慈姑中秋水仙碱的抗炎能力.[结果]慈姑中秋水仙碱的最佳提取工艺条件为:乙醇浓度60％,提取温度50℃,提取时间30 min,料液比1:25 (g/ml).慈姑中秋水仙碱的含量为40.58 μ.g/100 mg.与模型对照组比较,慈姑中秋水仙碱(9.0,4.5g/kg)抑制胸腔液PGE2,TNF-α,IL-1β含量升高(P＜0.05).慈姑中秋水仙碱高剂量组能抑制肺组织TNF-α.IL-1β,MDA含量升高(P＜0.01),中剂量组抑制肺组织IL-1β含量升高(P＜0.01).[结论]慈姑中秋水仙碱具有良好的抗炎作用,抗炎机制可能与影响炎症介质产生和抗氧化作用有关.     

用秋水仙碱诱导非洲菊多倍体的研究

用秋水仙碱处理离体的非洲菊愈伤组织与丛生芽．研究了4种不同浓度的秋水仙碱对非洲菊芽增殖和染色体加倍的影响.结果表明：以0.05％的秋水仙碱溶液处理12h效果较好．变异率达38．46％；叶片表皮细胞的气孔数量减少、体积增大以及植株叶大根粗等外部形态特征均可作为鉴别非洲菊多倍体的间接证据。     

流动注射化学发光法测定秋水仙碱

甲醛存在时,高锰酸钾可在酸性介质中氧化秋水仙碱产生较强的化学发光.根据这一实验现象并结合流动注射技术,建立了一种高锰酸钾-甲醛-秋水仙碱化学发光测定秋水仙碱的分析方法.在最优化条件下,化学发光强度与秋水仙碱浓度在1.0×10-7～6.0×10-5mol/L范围内呈线性关系.方法的检出限为3.0×10-8mol/L,相对标准偏差为1.9%(c=1.0×10-6mol/L,n=11).该方法用于药物制剂中秋水仙碱含量的测定,其分析结果与药典方法比较具有很好的一致性.     

γ射线和秋水仙碱对水稻花药培养绿苗再生的刺激效应

在水稻花药培养中，用２０Ｇｙ剂量γ射线辐照诱导培养约３０天的早粳２６和舟优６号两个水稻品种花药和用每升含３０ｍｇ秋水仙碱的分化培养愈伤组织，均可明显提高绿苗分化和再生，γ射线和秋水仙碱复合处理比各自单独使用具有更好的刺激效果。     

秋水仙碱处理诱导银灰杨2n花粉与杂种三倍体创制

目的为创制银灰杨杂种三倍体新种质,研究完善银灰杨三倍体育种技术体系,筛选生长迅速、抗逆性强的银灰杨新品种。方法本研究以银灰杨、河北杨以及银腺杨为试验材料,在优化秋水仙碱诱导银灰杨花粉染色体加倍技术条件的基础上,开展了秋水仙碱注射处理对2n花粉粒表面结构的影响以及杂交创制杂种三倍体的研究。结果减数分裂时期、注射次数、减数分裂时期与注射次数的交互效应均对2n花粉诱导率具有极显著影响。利用0.5%的秋水仙碱溶液对发育至粗线期的花粉母细胞进行11次注射处理是秋水仙碱诱导银灰杨花粉染色体加倍的最佳处理组合,2n花粉平均诱导率最高可达（30.27 ± 8.69）%。与天然2n花粉粒相比,秋水仙碱诱导型2n花粉粒表面结构出现了明显的裂沟,说明秋水仙碱注射处理对2n花粉花粉壁形成具有一定的影响。选取含有一定2n花粉比例的花粉,分别与河北杨、银腺杨雌配子进行授粉杂交,共收获杂种苗木4 955株,检测出三倍体5株,其中,2株三倍体来源于河北杨 × 银灰杨的杂交组合;另3株三倍体来源于银腺杨 × 银灰杨的杂交组合。结论秋水仙碱能高效诱导银灰杨花粉染色体加倍并获得2n花粉,但是注射会影响2n花粉花粉壁的形成,使得2n花粉粒表面结构产生裂沟。秋水仙碱诱导的2n花粉可以用于授粉杂交,成功获得杂种多倍体植株。      

诱变剂对芦笋单倍体染色体加倍的比较

[目的]建立芦笋单倍体染色体加倍的方法。[方法]以秋水仙碱与Oryzalin为诱变剂(均添加2%DMSO),在离体培养条件下,分别用浸泡法和培养基添加法处理芦笋单倍体材料的茎尖,通过传统的根尖压片法检测染色体数目,比较不同试剂、不同处理方法、不同浓度、不同处理时间下诱导二倍体的效果。[结果]秋水仙碱的处理效果优于试剂Oryzalin;培养基添加法的诱导效果优于浸泡法,在培养基中添加0.2%秋水仙素并处理5 d时诱导效果最佳,染色体加倍效率与成活率分别可达38.3%和50%。[结论]秋水仙碱仍是芦笋单倍体加倍最有效的诱变剂。     

脱羰秋水仙碱(DM)辅助去牛卵母细胞核的研究

受体细胞去核是核移植关键步骤之一。利用脱羰秋水酰碱（Demecolcine,DM）显示牛卵母细胞染色体的位置进行去核,主要从以下几个方面进行了试验：卵母细胞在DM中孵育浓度、卵母细胞在DM中孵育时间及卵母细胞成熟时间对显示效果的影响。结果表明：（1）成熟牛卵母细胞用离子霉素激活5 min,DM孵育2 h完全诱导去核,结果没有见到完全去核的卵母细胞;（2）挑选有第一极体的成熟牛卵母细胞,在浓度为0.5μg/mL的DM中孵育2 h显示率可达76.54%;（3）牛卵母细胞在成熟18 h可以获得73.86%的显示效果。（4）在没有去卵丘细胞的卵母细胞中添加DM取得了更好的显示效果（80.82%）,囊胚的发育率也较其它组高,可达18.60%,说明未去卵丘细胞的卵母细胞添加DM更有利于显示染色体的位置,而且更有利于囊胚的发育。利用DM显示染色体的位置不仅可以高效快速的去核,同时也避免了传统去核时荧光对卵母细胞的照射。     

秋水仙碱诱导粗皮桉花粉染色体加倍研究

目前自然界仍未发现天然多倍体桉树的存在,建立人工诱导桉树未减数2n花粉技术体系对于推进桉树的多倍体种质创制及遗传改良的意义重大。本研究以粗皮桉为对象,探究其花蕾发育与小孢子母细胞减数分裂进程的特点,并对不同发育阶段花蕾施加秋水仙碱处理,诱导粗皮桉花粉染色体加倍。结果表明,待观察到小孢子母细胞减数分裂开始后48 h,即处于细线期至粗线期的花蕾占比最高时,在靠近花序位置的花枝上切口并导入0.5%浓度的秋水仙碱溶液处理6 h的效果最佳,人工诱导2n花粉的有效诱导率达到31.34%。诱导获得的粗皮桉2n花粉较普通单倍性花粉的形态差异显著。本研究揭示了粗皮桉花蕾发育与小孢子母细胞减数分裂的时序性关系,建立了基于花蕾着生位置和发育时数,即时判别粗皮桉小孢子母细胞减数分裂时期的方法,明确了采用秋水仙碱溶液处理诱导粗皮桉花粉染色体加倍的最佳时机和处理条件,为进一步开展桉树多倍体种质创新工作奠定了重要基础。     

换培养液和秋水仙碱处理对白菜型油菜小孢子胚胎发生的影响

选用对小孢子培养反应较好的白菜型油菜地方品种（茅山种）为供体材料,研究了换培养液和秋水仙碱直接处理分离小孢子对胚产量的影响,并分析了秋水仙碱直接处理小孢子所获再生植株的染色体倍性水平。结果表明,分离小孢子在10％蔗糖浓度的NLN-10培养基上培养2 d后换成新鲜培养液,能显著提高出胚产量,比不换培养液的胚产量