鸡传染性法氏囊病病毒实时荧光定量RT—PCR检测方法的建立

本试验根据GenBank中鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组设计一对针对病毒vp5基因的引物和一条特异性Taq Man探针,建立了一种快速检测IBDV核酸载量的Taq Man荧光定量RT-PCR方法.通过对反应条件和反应体系的优化,使得该方法在108拷贝/μL～101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系.能够灵敏地检测初始模板中30个拷贝的病毒核酸,其灵敏度是常规RT-PCR检测方法的100倍.该方法不与其它的禽源病毒发生非特异性反应,并且具有良好的重复性,为IBDV的定性定量检测提供了有效的工具.     

Real-time qPCR检测安氏隐孢子虫卵囊方法的建立及应用

根据GenBank公布的安氏隐孢子虫SSU rRNA基因序列设计1对引物和TaqMan探针,建立了基于TaqMan探针检测安氏隐孢子虫的实时荧光定量PCR方法,并对奶牛粪便进行了检测.结果显示,设计的探针对检测安氏隐孢子虫具有很高的特异性;粒DNA和卵囊的检测阈值分别达到5个拷贝和10个卵囊,奶牛粪便阳性率为21.15%(11/52).建立的安氏隐孢子虫TaqMan荧光定量PCR检测方法简便、快速,特异性强,敏感度高,可用于安氏隐孢子虫的快速定量检测.     

用寡核苷酸探针对近交系小鼠DNA指纹图谱的分析

应用DNA指纹技术，用非放射性标记的寡核苷酸探针(GGAT)。对3个清洁级近交小鼠品系C57、DBA／2、BALB／c进行检测，分析其DNA指纹图谱。结果显示，不同品系近交系小鼠的DNA指纹图谱有明显差异，而品系内小鼠之间的DNA指纹图谱基本一致。证明DNA指纹技术能够较好地检测出近交系小鼠的基因纯合性，反映其遗传质量，可以应用于对近交系小鼠的遗传质量监测。     

PCR结合斑点杂交技术检测禽多瘤病毒方法的建立及应用

鹦鹉幼雏病是由禽类多瘤病毒(APV)引起的多种鹦鹉雏鸟死亡的急性病毒性传染病,严重危害鹦鹉养殖业的健康发展.为提高分子生物学方法检测APV的敏感性和特异性,对APV基因片段进行克隆和序列分析,设计合成1对特异性引物,以VP1基因为模板,经PCR扩增获得731 bp的核苷酸DNA,并用DIG标记,制备用于检测APV的特异...     

利用实时荧光PCR技术检测风信子黄腐病菌

风信子黄腐病菌是我国禁止入境的病原细菌之一,我国目前尚无该病的发病报道.本研究根据风信子黄腐病菌基因组16S-23S ribosomal RNA intergenic spacer保守序列,设计并合成了1对特异性引物和1条具有稳定点突变特异性探针进行实时荧光PCR检测,风信子黄腐病菌有很强的荧光信号,供试的其它7种病原细菌菌株均没有荧光产生.与常规PCR相比,实时荧光PCR检测特异性强,灵敏度高,适合病害的快速诊断和口岸检验检疫应用.经优化反应条件,建立了稳定的风信子黄腐病菌实时荧光PCR检测方法.     

石榴树四季修剪技术

1冬季修剪 1.1修剪时期 落叶至萌芽前. 1.2修剪技术要点 1.2.1 大枝的处理 按上稀下密、外稀内密、大枝稀小枝密的原则进行.三主枝以及侧枝间距中心干,彼此要保持60～80 cm的距离.主侧枝间距小时,可采用疏大枝或拉开大枝的办法,务求达到大枝间距以上要求的标准.     

"井工厂"压裂模式下水力裂缝动态扩展模拟分析

随着致密油气等非常规油气资源大规模开发,"井工厂"压裂工艺由于其作业效率高、能够充分利用应力干扰实现复杂裂缝网络等特点而受到青睐.然而,"井工厂"压裂过程中合理井距的选择始终是一个影响压裂效果的难题.以线弹性断裂力学为基础,基于扩展有限元理论构建了致密储层体积压裂多缝干扰延伸动力学模型,以苏里格气田苏平001井组为例,对常规"井工厂"水力压裂和拉链压裂这2种"井工厂"压裂模式下水力裂缝动态扩展规律进行了模拟分析和对比.研究结果表明,受水力裂缝延伸产生的诱导应力场影响,后续裂缝在延伸过程中其延伸方向会发生明显偏转,合理选择井间距离对改善井间诱导应力场对裂缝延伸影响具有重要意义;相对常规"井工厂"压裂模式下,采用拉链压裂能够更好降低井间裂缝干扰对裂缝动态扩展影响,增加水力压裂改造体积;在相同储层条件下,采用常规"井工厂"水力压裂合理井距为水力裂缝长度的1.7～1.8倍,而拉链压裂合理井距则为其1.4～1.5倍.     

暗排技术对设施连作土壤改良及切花菊品质的影响

针对温室、大棚等设施栽培条件下的土壤随着连作年限的增加,土壤理化性状变劣、养分比例失调、土壤次生盐渍化加重、生产性能降低这一现象,采用暗管排水排盐技术,在稻草还田(800 kg/hm~2)配套措施条件下,研究了暗管不同埋管间距(2、4、6m)对设施连作表层土(0～15 cm)有机质、速效养分(碱解氮、有效磷和速效钾)、盐分含量以及切花菊‘神马’品质的影响。结果表明:暗排技术能明显增强切花菊的根系活力,对切花菊主要品质(株高、茎粗、花径、舌状花数及生物量)的提高具有积极作用,其中4 m的埋管间距处理效果最佳;对土壤有机质和速效养分含量的提高效果埋管间距4 m处理显著高于埋管间距2 m和6 m处理;暗排技术对于土壤的降渍排盐作用明显,可显著降低表层土壤的含水量、电导率、全盐量以及主要盐分离子含量(Ca~(2+)和SO_4~(2–)),并且随着埋管间距的减小,降渍排盐的效果越明显。综合比较分析各相关试验结果,结合暗管埋设初期成本投入的考虑,4 m的埋管间距处理能最有效地改良设施连作土壤及提高切花菊的品质。     

DNA条形码与实时荧光定量PCR技术在铁皮石斛鉴定中的应用

为建立铁皮石斛准确、高效的鉴定体系,本研究以101份石斛属和蝴蝶兰属植物样品为试验材料,通过对比ITS、psbA-trnH、matK及rbcL基因在石斛属植物中的鉴定能力,筛选出ITS作为本研究最理想的DNA条形码。以ITS序列作为靶基因,设计铁皮石斛特异引物和特异探针,以及石斛属通用引物和探针,利用实时荧光定量PCR(TaqMan)技术,建立铁皮石斛多重实时荧光PCR检测新体系,通过特异性、灵敏度和实际样本验证,发现参试样品中的25份铁皮石斛均可被有效鉴定,与其他鉴定方法相比,该方法具有特异性强、灵敏度高(高出普通PCR 100倍)、重复性好且高效经济的优势。本研究结果对铁皮石斛的资源保护与利用起到了积极作用。     

降低小间距隧道洞口与锚的施工成本

随着经济的不断发展,高速公路的建设也不断加大,如何有效降低建设高速公路的成本越来越受到重视。文章主要针对小间距相邻隧道洞口与隧道锚施工如何减低施工成本提出了一些建议。