藏兽医药用植物与抗生素联用对致病性大肠杆菌抑菌活性的研究

为了解藏兽医药用植物联合抗菌药对致病性大肠杆菌的抑菌情况,本试验将61种藏兽医药用植物水提物和5种抗生素联用,并对藏猪源致病性大肠杆菌（SCP-ExP-coli 2017-4307株）开展体外抗菌活性研究。藏兽医药用植物药敏试验表明,川西獐牙菜等12种药用植物水提物的MIC值为31.25 mg/mL;山苦荬等22种药用植物水提物的MIC值为31.25 mg/mL;白苞筋骨草等6种药用植物水提物的MIC值为62.5 mg/mL;大籽蒿等12种药用植物水提物的MIC值为125 mg/mL;手参等4种药用植物水提物的MIC值为250 mg/mL;白花油麻藤等5种药用植物水提物的MIC值≥500 mg/mL。联合药敏试验表明,白苞筋骨草、垂头菊和藏紫草等18种药用植物水提物与四环素、链霉素、氨苄西林联用呈现相加作用,其中以垂头菊和藏紫草的相加作用最为广泛。     

广西地区犬细小病毒检测及VP2基因序列分析

为了调查广西地区犬细小病毒(CPV)的优势毒株及其遗传变异情况,试验利用PCR方法对采自广西地区的423份犬血清样本进行CPV检测并扩增其VP2基因,利用MegAlign软件进行同源性比对并分析VP2蛋白主要突变的氨基酸位点,同时利用MEGA 7.0软件采用邻接法构建遗传进化树。结果表明：共获得55份CPV阳性血清样本,阳性率约为13.0%。PCR扩增得到大小约为1 755 bp的VP2基因。55株分离毒株之间的相似性为98.6%～100%;分离毒株与国内外参考毒株的相似性为97.4%～100%,与疫苗株Pfizer/vaccine/06的相似性为98.3%～98.9%。扩增序列的推导氨基酸主要在第5,297,370,426,440位发生变异。在55株分离毒株中,有32株为New CPV-2a亚型毒株,20株为CPV-2c亚型毒株,3株为New CPV-2b亚型毒株。55株分离毒株形成3个主要的流行分支,与国内参考毒株的亲缘关系较近,而与国外参考毒株、猫细小病毒的亲缘关系较远。说明New CPV-2a、CPV-2c、New CPV-2b亚型毒株在广西地区流行广泛,正逐步取代CPV-2a...     

兔源强毒力金黄色葡萄球菌荧光定量PCR检测方法的建立

为了建立一种快速、特异性强且敏感性高的兔源强毒力金黄色葡萄球菌检测方法,本试验根据金黄色葡萄球菌pvl基因的保守序列设计了特异性的引物和探针,通过反应条件的优化,建立了检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法耗时短,仅需约50 min就能完成检测,较已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法均省时;该方法特异性强,对兔源低毒力金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌、魏氏梭菌、大肠杆菌和阴性对照(灭菌ddH₂O)均无交叉反应;该方法敏感性高,最低检测限为10拷贝/μL,分别是已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法的1 000倍和10倍。此外,该方法重复性好,批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%。应用该方法检测126份已知结果的临床样品,检测结果与已知结果、已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法的检测结果完全一致。该方法的建立不仅丰富了兔源强毒力金黄色葡萄球菌的检测方法,也为该菌的快速检测提供了更有力的技术支持。     

兰坪乌骨绵羊WWOX基因生物信息学分析

为探索兰坪乌骨绵羊乌质性状的分子遗传基础,根据NCBI收录的绵羊WWOX(WW Domain ContainingOxidoreductase)基因设计9对外显子特异性引物,扩增测序后拼接序列,编码区翻译后得到的蛋白质序列进行空间结构预测。兰坪乌骨绵羊WWOX基因位于14号染色体,WWOX蛋白由1 436个碱基编码414个氨基酸。WWOX是一种主要定位于细胞质中的亲水性非跨膜蛋白,其碱基序列与普通绵羊同源性对比为99.57%,氨基酸序列同源性对比为100%,发现有7个同义突变位点,蛋白结构预测显示WWOX空间结构主要由α螺旋、无规则卷曲构成。本实验进一步探索兰坪乌骨绵羊WWOX基因空间结构与“乌质”性状形成机制间的联系并提供理论支撑。     

过表达TLR4基因绵羊瘤胃与肠道宏基因组分析

胃肠道微生物生态系统参与机体物质代谢、生物屏障、免疫调控等生理过程,对维持宿主健康具有重要作用。Toll样受体4(Toll-like Receptor 4,TLR4)除在机体天然免疫过程中扮演关键角色之外,胃肠道中TLR4基因的表达可能参与微生物区系结构的塑造。本研究利用前期获得的过表达TLR4基因绵羊,基于宏基因组测序技术探讨TLR4基因高水平表达对绵羊胃肠道微生物群体多样性、丰度及生物学功能的影响。结果表明：TLR4基因过表达后对绵羊瘤胃(P=0.35)和肠道(P=0.56)中微生物Alpha多样性无显著影响;胃肠道中微生物优势菌群(相对丰度>1%)在门、属、种不同分类水平上的区系结构无显著变化。进一步分析TLR4基因过表达对胃肠道中革兰氏阴性菌群(相对丰度<1%)组成的影响,在瘤胃和肠道中分别鉴定出8个和13个差异菌属(P<0.05),33个和32个差异菌种(P<0.05);其中,Helicobactersp.MIT05-5293(P=0.03)和Yersinia pseudotuberculosis(P=0.048)在瘤胃中存在显著差异,Campylob...     

香猪皮肤转录组衰老相关病毒源基因的筛选和鉴定

皮肤是哺乳动物抵御致病因素的第1道防线,在皮肤衰老的过程中,整合到哺乳动物基因组中的病毒源基因序列会被重新激活,影响宿主基因的表达,激起细胞对病毒的反应,引起慢性炎症、促进细胞衰老。本研究旨在探究病毒源基因表达与皱皮香猪皮肤皱纹形成的关系,选取12～18月龄皱皮香猪和普通香猪各5头进行转录组测序和生物信息学分析,采用RT-qPCR方法对皱皮香猪中差异表达的病毒源基因进行验证。2组中皮肤组织差异表达基因与病毒整合位点数据库进行比对分析,筛选出612个差异表达的病毒源基因。以普通香猪为对照,得到上调基因182个,下调基因430个,这些差异表达的病毒源基因主要富集在皮肤发育、炎症反应等GO条目,以及长寿调控途径、FoxO信号通路、细胞衰老等KEGG通路。经猪-人同源基因转换,与免疫、衰老、人类皮肤相关的基因取交集,筛选出高表达的候选基因6个：AGT、CAT、CTNNB1、JUP、KRT75和LIPE,采用RT-qPCR验证了皮肤中这6个基因的差异表达,与转录组测序结果趋势一致。研究结果表明,皱皮香猪皮肤皱纹的形成与病毒源基因的异常表达有紧密联系,本研究可为后期皱皮香猪皮肤褶皱形成的分子机制及...     

基于全基因组填充重测序关联分析鉴别影响苏山猪初生体尺与乳头数性状的遗传位点

旨在鉴别影响苏山猪初生体尺和乳头数性状的遗传位点,开发可用于辅助育种的分子标记,为苏山猪生长和繁殖性能的持续选育提供理论基础。本试验对269头苏山猪初生仔猪(出生后24 h内)的体尺和乳头数表型进行测定,并采集耳组织样品。基于全基因组重测序及基因型填充策略,利用全基因组关联分析(genome-wide association study, GWAS)和群体分化指数(fixation index,Fst)的方法挖掘与目的性状强关联位点,并对位置功能候选基因开展GO和KEGG分析,确定最有可能的主效基因。本研究共鉴别到4个候选位点,分布在13、14和X染色体上,其中与初生体尺性状显著关联的位点有2个,与乳头数性状显著关联的位点有2个。本研究筛选出1个与体长性状相关的候选基因ACTA2;1个与胸围性状相关的候选基因COL4A6;3个与乳头数性状相关的候选基因ACTA2、CRTAP和SEPTIN6,为苏山猪初生体尺性状和乳头数性状的遗传改良提供了重要的分子标记。     

郏县红牛和安格斯牛18月龄背最长肌差异表达基因的筛选与分析

旨在通过转录组学分析筛选出影响牛肌肉发育的候选基因。对5头18月龄的郏县红牛背最长肌进行转录组测序,获得转录组数据后与3头18月龄安格斯牛背最长肌的转录组数据(GSE57327)进行联合分析。结果：与安格斯牛相比,郏县红牛背最长肌中4 945个基因表达显著上调(FDR<0.05), 2 186个基因显著下调(FDR<0.05)。GO功能富集分析显示差异基因主要富集在与代谢相关生物学过程中。KEGG信号通路分析显示差异表达的基因主要富集到氧化磷酸化(oxidative phosphorylation)等通路上。从氧化磷酸化通路中筛选出两品种间差异表达最显著的20个基因,通过反刍动物基因组数据库(ruminant genome database, RGD)查看该20个基因的组织表达情况,其中泛素-细胞色素c还原酶复合物Ⅲ亚基Ⅺ(UQCR11)、细胞色素c氧化酶亚基7A1(COX7A1)、细胞色素c铜伴侣蛋白(COX17)、NADH氢酶辅酶Q铁硫蛋白5(NDUFS5)和线粒体ATP酶合成体ε亚基(ATP5F1E)这5个基因在牛骨骼肌组织中的表达量高于其他组织,推测这5个基因在牛的...     

北京规模化养殖场畜禽粪便中养分、重金属和抗生素含量分析

旨在研究因畜牧业集约化不断提高导致畜禽粪便急剧增加而造成的环境污染程度。试验采用分光光度法、电感耦合等离子体法、串联质谱法等,测定了北京地区规模化养殖场猪粪(n=9)、鸡粪(n=12)、牛粪(n=30)中养分、重金属以及抗生素的含量,为畜禽粪便的农田利用提供数据支撑。结果表明：畜禽粪便中养分含量分布差异较大,表现为鸡粪中全氮和全钾含量最高,而猪粪中全磷和有机质含量最高,查阅相关研究发现,北京市规模化养殖场的猪粪、鸡粪和牛粪中全氮、全磷、全钾和有机质的含量变化较小。重金属含量整体呈现出锌(Zn)>铬(Cr)>铜(Cu)>铅(Pb)>砷(As)>汞(Hg)的趋势,其中猪粪Zn、Cu平均含量为327.44 mg/kg和49.23 mg/kg,显著高于鸡粪和牛粪;牛粪中Pb、Cr平均含量为9.82 mg/kg和107.96 mg/kg,显著高于猪粪和鸡粪;鸡粪中As平均含量最高,为18.06 mg/kg。与《农用污泥污染物控制标准》(GB 4284—2018)最低限度要求相比,牛粪、猪粪、鸡粪中分别有Cr、As、As超标的问题。所有样品中未检测到磺胺类抗生素,但四...