广藿香愈伤组织的诱导和增殖

以广藿香的幼叶、茎段为外植体,接种于附加不同浓度的2,4-D、NAA、6-BA、KT、TDZ及其组合的MS固体培养基上进行愈伤组织的诱导,结果表明:单独使用5种激素在一定范围内均能诱导出愈伤组织;最佳组合培养基为MS+6-BA 1.0 mg.L-1+2,4-D 0.1 mg.L-1。进一步研究发现,茎段和叶片诱导的愈伤组织的生长曲线都呈“S”型,且生长周期均为18 d。     

广藿香油-β-环糊精包合物胶囊的制备及稳定性研究

采用饱和水溶液法制备广藿香油(Oleum Pogostemonis)-β-环糊精包合物,并进一步制备胶囊.设计单因素试验和正交试验考察广藿香油与β-环糊精的比例、包合时间、包合温度对包合物指标的影响,优化包合条件.结果表明,广藿香油与β-环糊精质量比为1∶7、包合温度为50℃、包合时间为3h时,包合物收率为90.84％、包合物含油率为14.93％、广藿香油收率为92.63％,综合评分结果最高.对包合物用薄层色谱法(TLC)进行验证,表明包合物已经形成.每50g包合物中添加0.5 g硬脂酸镁,所得胶囊休止角最小,水分、装量差异和崩解时限均符合《药典》规定.稳定性检测结果表明广藿香油-β-环糊精包合物胶囊对光、热、湿的稳定性明显高于广藿香油与β-环糊精的物理混合物.     

20份广藿香种质对青枯病的抗病性评价

为获得广藿香抗青枯病种质,对广泛收集到的农艺性状较好的20份广藿香种质进行青枯病抗性鉴定。利用稀释分离法对广藿香青枯病病原菌进行分离。通过病害症状,致病性测定,ITS序列比对及系统发育树构建等将广藿香青枯病病原菌鉴定为Ralstonia solanacearum。采用伤根接种法、蘸根接种法、拌土接种法和3×106 cfu/mL、3×107 cfu/mL、3×108 cfu/mL 3种不同菌量人工接种室内培养的广藿香苗。结果表明,以菌量为3×107 cfu/mL和蘸根接种法作为抗性鉴定方法为宜。利用该方法鉴定20份广藿香种质的抗病性,发现不同种质感染青枯病的程度有差异,其中无高抗种质,但有1份中抗种质(17号),其余有6份中感种质(占30%),13份高感种质(占65%)。另外,17号种质的农艺性状和挥发油含量较高,有望在育种上得到进一步利用。     

广藿香DXS基因克隆及表达分析

1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶(DXS)是调控萜类合成途径中MEP途径的第一个关键酶,为探究广藿香DXS基因参与其主要萜类成分广藿香醇合成调控的分子机制,本研究依据本课题组前期获得的转录组DXS基因序列,以广藿香cDNA为模板,克隆得到PcDXS基因,对其进行生物信息学分析,构建pET-28a-PcDXS原核表达载体诱导蛋白表达,并采用荧光实时定量PCR法检测广藿香根、茎、叶、芽中DXS基因表达情况。结果表明,从广藿香叶中克隆到开放阅读框全长为2 151 bp和1 908 bp的PcDXS1、PcDXS2基因序列,分别编码716、635个氨基酸。预测PcDXS1蛋白分子量78.33 kDa,为稳定非跨膜非分泌蛋白,主要定位于叶绿体;PcDXS2蛋白分子量67.92 kDa,为不稳定非跨膜非分泌蛋白,主要定位于叶绿体。PcDXS1、PcDXS2均含有DXP＿synthase＿N、Transket＿pyr和Transketolase＿C结构域模块,属于DXS超家族。PcDXS1、PcDXS2分别与半枝莲、糙苏的DXS基因序列具有较高同源性。使用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱...     

广藿香PatTIFY6b基因克隆与功能分析

茉莉酸甲酯能诱导广藿香叶片中百秋李醇含量升高,但是其中的分子机制不清楚。本研究从茉莉酸甲酯处理的广藿香叶片转录组数据中筛选到一个表达量显著增加的基因,经过序列比对发现该基因与唇形科丹参转录因子Sm TIFY6b具有高度同源性,因此将其命名为PatTIFY6b。通过生物信息学对PatTIFY6b编码蛋白的结构和功能进行分析和预测,并以广藿香cDNA为模板,克隆得到PatTIFY6b。PatTIFY6b定位于细胞核,在广藿香不同组织中均有表达,叶片中表达量最高。茉莉酸甲酯处理下,PatTIFY6b和百秋李醇合成途径基因具有相似的表达模式,说明茉莉酸甲酯可能通过PatTIFY6b调控百秋李醇的合成。利用原核表达系统,成功表达了PatTIFY6b蛋白。将PatTIFY6b过表达在双子叶模式植物拟南芥中,筛选到纯合株系PatTIFY6b-ox-17。本研究首次克隆广藿香PatTIFY6b基因并对其功能进行初步探究,为后期研究广藿香百秋李醇生物合成的分子调控机制提供理论基础。     

广藿香2种表皮毛的发育解剖学研究

通过石蜡切片及扫描电镜观察发现：广藿香的茎、叶上密集分布着腺毛和非腺毛2种表皮毛,二者的外部形态及发育过程明显不同．根据腺毛头部形状可把腺毛分为盾状腺毛和头状腺毛,二者均发生得很早,它们的原始细胞都来源于原表皮,一般在茎尖第1和第2片叶原基的原表皮细胞以及茎的1～2节间原表皮细胞中开始发生．其发育过程可分为原始细胞形成期、基细胞形成期、柄细胞形成期和头部的形成4个阶段．非腺毛的发生晚于腺毛,但发生时期却较长．它一般在第2对幼叶上开始发生,而且在成熟叶和具初生结构茎上也可发生、发育．原始细胞产生后,开始进行平周分裂,形成基细胞核头部细胞,头部细胞经一次或多次分裂发育形成非腺毛的数个子细胞．     

广藿香不同组织总RNA提取方法的筛选与优化

分别采用Trizol法、改良Trizol法、CTAB法、改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法等5种方法提取广藿香叶、茎、根及愈伤组织的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱检测其提取效果。结果表明,Trizol法适用于广藿香叶片总RNA的提取,改良CTAB法适用于广藿香茎和愈伤组织总RNA的提取,而广藿香根总RNA的提取宜用改良Trizol法。RT-PCR检测结果表明,广藿香各组织的总RNA可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学试验。     

广藿香优质高产栽培技术

广藿香是广东地道药材,全株可供药用,具有解热、清暑、行气、化湿、健胃、止呕等功能。主治风寒感冒、呕吐泄泻、胸闷、头痛等症,藿香油是制造多种中成药的原料,其优质高产栽培技术要点如下:一、选地选择避风无污染的林间坡地、山角梯田、水田、旱田、河旁冲积地、村寨中的五边     

广藿香八倍体叶片叶绿素荧光的日变化

以广藿香同源八倍体不同株系为试材,四倍体广藿香为对照,在生长季节采用Handy-PEA便携式植物效率仪对广藿香八倍体叶绿素荧光参数进行了日变化测定和分析。结果表明:初始荧光(Fo)、最大荧光(Fm)、PSⅡ原初光能转化效率(Fv/Fm)、以吸收光能为基础的光合性能指数(PI)均存在明显的日变化。其中Fv/Fm、PI变化趋势基本一致,总体上呈现先下降后上升的趋势,最低值基本出现在16:00;Fo均为双峰曲线。说明不同株系广藿香防御强光破坏的主要机制可能不同。