高精料日粮对湖羊发情、孕酮水平及黄体PLINs基因表达的影响

高精料日粮会引起瘤胃代谢机能异常,引发机体内分泌紊乱。本试验旨在研究高精料日粮对湖羊发情、孕酮水平及黄体组织围脂滴蛋白(PLINs)家族成员mRNA表达的影响。试验选用5月龄雌性湖羊20只,分为低精料组(LC,精粗比2∶8,n=10)和高精料组(HC,精粗比6∶4,n=10)。于正试期第20 d进行同期发情处理,在正试期的第58天采集卵巢,分离黄体,采集血液检测孕酮(P_4)和脂多糖(LPS)的含量,统计平均日增重(ADG)及干物质采食量(DMI)。应用实时定量PCR检测黄体PLINs基因的表达量,并对LPS浓度、卵巢重、黄体数量、孕酮水平及PLINs基因表达量进行相关性分析。结果显示,高精料组ADG显著高于低精料组(P0.05),DMI显著低于低精料组(P0.05)。高精料组血清LPS浓度显著高于低精料组(P0.05)。高精料和低精料组母羊自然发情率分别为30%和70%(P=0.089)。2组母羊黄体期血清P_4浓度、卵巢重和黄体数量均无显著差异(P0.05)。PLINs家族成员mRNA在黄体组织中均有不同程度的表达,其中PLIN2 mRNA表达量最高,且低精料组PLIN2 mRNA表达量显著高于高精料组(P0.05),而PLIN3、PLIN4和PLIN5的mRNA表达量则显著低于高精料组(P0.05)。LPS浓度与PLIN2 mRNA表达量呈显著负相关(P0.05),与PLIN3 mRNA表达量呈显著正相关(P0.05)。PLIN3 mRNA表达量与PLIN4、PLIN5呈显著正相关(P0.05),与PLIN2呈显著负相关(P0.05)。结果表明,高精料日粮饲喂使湖羊血清LPS浓度升高,可能不利于母羊的发情。黄体组织PLINs基因在高精料组和低精料组之间的表达差异,提示PLINs基因表达可能受LPS及饲料中精粗比的影响,同时为进一步研究营养与繁殖的关系提供数据支撑。     

胰岛素、催乳素和孕酮对奶牛乳腺上皮细胞泌乳功能的影响

具有泌乳功能的乳腺上皮细胞系可作为乳腺发育学、乳腺病理学、泌乳生物工程学研究的细胞模型,本研究测定了激素对奶牛乳腺上皮细胞系泌乳功能的影响,为阐述泌乳机制提供工作基础。应用HPLC方法对体外培养奶牛乳腺上皮细胞的酪蛋白和乳糖的分泌情况和细胞培养液中的酪蛋白、乳糖含量进行测定,以确定胰岛素、催乳素和孕酮处理后的奶牛乳腺上皮细胞的泌乳功能。试验结果表明：奶牛乳腺上皮细胞具有酪蛋白和乳糖的分泌能力,在72h内,随着细胞培养时间延长,胰岛素处理组细胞中的酪蛋白和乳糖的升高趋势不明显,孕酮处理组升高趋势较明显,催乳素处理组升高趋势很明显;胰岛素处理组、催乳素处理组和孕酮处理组细胞培养液中酪蛋白升高趋势均很明显,乳糖含量均很高,三组激素比较而言,胰岛素处理组乳糖含量最高。此外,三组激素对乳腺上皮细胞活力影响均很大,在72h之内,总体变化为：催乳素处理组和孕酮处理组细胞活力均升高,胰岛素处理组细胞活力下降。     

褪黑素对牦牛黄体细胞生长及功能影响的研究

本试验旨在探究褪黑素(melatonin,MT)对牦牛黄体细胞生长、抗氧化性及功能的影响.本试验以健康牦牛二代黄体细胞为研究对象,比较了不同浓度MT(0(Control组)、25、125、250、500 pg·mL-1)对牦牛黄体细胞生长和功能的影响.通过CCK-8法检测黄体细胞的生长情况,并采用qRT-PCR检测增殖...     

回乳期奶牛血清PRL、E2、P4和STAT5含量的变化规律

为探究回乳期奶牛血清中促乳素(PRL)、雌二醇(E2)、孕酮(P4)、信号转导和转录激活因子5(STAT5)含量和产奶量变化规律及其相关性,选择规模化奶牛场产奶量为(15.43±0.60)kg,将干乳的妊娠后期奶牛20头为研究对象。干乳开始当天记为第0天,分别在第0、1、3、5、7、9和11天上午8:00采集奶牛尾静脉血,ELISA法检测血清中PRL、E2、P4和STAT5含量并对结果进行统计学处理,分析其在奶牛回乳过程中的变化规律及其相关性。结果表明:回乳期奶牛血清PRL含量和产奶量在0~1d变化不显著(P0.05),3~11d依次降低且差异极显著(P0.01);血清E2含量0~1d、3~5、7~9d、9~11d之间差异均不显著(P0.05),依次呈阶梯式下降趋势;血清STAT5含量同样呈下降趋势,回乳0~5d、7~11d差异不显著(P0.05),但0~5d与7~11d两阶段间差异极显著(P0.01);血清P4含量从回乳0~11d变化不显著(P0.05);回乳期奶牛产奶量与PRL、E2、STAT5含量呈极显著正相关(P0.01),PRL、E2和STAT5含量变化两两间均呈极显著正相关(P0.01);P4含量变化与PRL、E2、STAT5含量和产奶量变化的相关性均不显著(P0.05)。综上所述,在奶牛回乳期间,血清中PRL、E2和STAT5含量均呈降低趋势并显著正相关,而P4含量变化不显著且与其他激素无显著相关性,为进一步研究泌乳相关激素调控奶牛回乳的作用机理提供理论依据。     

雌激素和孕酮对犬子宫内膜基质细胞增殖和孕酮受体表达的影响

本试验应用不同消化分离途径获取犬子宫内膜基质细胞,调节培养液中雌激素(E₂)和孕酮(P₄)的浓度,采用MTT法测定E₂和P₄浓度水平对犬子宫内膜基质细胞体外增殖的影响,利用细胞免疫组织化学法鉴定细胞并测定细胞孕酮受体(PR)表达与激素浓度水平的相关性。结果表明,E₂浓度变化(15、30、100 pg/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖和PR的表达均没有显著的调节作用(P>0.05);P₄(15、30 ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖有显著促进作用(P<0.05),P₄(3、15、30 ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞PR的表达具有显著的抑制作用(P<0.05),其影响程度与浓度和作用时间关系密切。     

常用实验动物血清雌二醇和孕酮的测定及比较

目的测定NIH、BABL/C、C57BL/6J小鼠、SD、Wistar大鼠和长爪沙鼠等几种常用实验动物的血清雌二醇(E2)和孕酮(P)水平,为动物生殖和胚胎工程等方面的研究提供基础资料。方法用放射免疫分析法测定上述动物生产前后血清雌二醇(E2)和孕酮(P)水平,进行统计学处理和比较。结果在未生产动物中,血清E2、P的含量与特定物种的体重呈正相关的趋势(p<0.01);血清P的含量在动物生产前后变化较大,生产过动物均高于未生产动物(p<0.01)。结论动物血清E2、P的含量具种属特异性;但在已生产动物中似无明显关联。血清P的含量变化与其在动物体内的正常分泌及生理功能相对应。     

牛奶中孕酮直接竞争ELISA检测方法的建立

采用直接竞争ELISA方法检测牛奶中孕酮含量.采用碳化二亚胺法,应用辣根过氧化物酶(HRP)标记11-α羟基孕酮琥珀酸酯(11α-OH-P4-HS),制备孕酮酶标抗原;酶标抗原与牛奶样品中的孕酮共同竞争结合固相包被的孕酮单克隆抗体,建立直接竞争ELISA反应体系.试验结果表明,最佳抗体包被浓度为1∶2 000,最佳酶标抗原工作浓度为1∶16 000,建立的标准曲线为y=-2.4598x+0.999(R2=0.996),牛奶中孕酮检测范围0.12～40 ng/mL,最低检测量为0.12 ng/mL,批内和批间变异系数分别为1.63%和2.49%.成功建立了可用于牛乳中孕酮快速检测的直接竞争ELISA方法.     

奶牛孕酮单克隆抗体的制备与初步鉴定

试验应用淋巴细胞杂交瘤技术,以制备的P4免疫抗原免疫Balb/c小鼠为试验动物,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA方法进行筛选,采用有限稀释法进行细胞克隆,经过3次克隆筛选,最终获得2株能稳定分泌P4单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为8G6、11A11.杂交瘤细胞培养上清液和小鼠腹水中2株单抗ELISA效价分别为1∶512 000,1∶216 000.单克隆抗体与检测抗原和对照均不发生交叉反应,显示出良好的特异性,灵敏度高,且8G6的亲和力优于11A11.奶牛孕酮单克隆抗体的获得为P4检测试剂盒的研制奠定了基础.     

不同能量水平对奶牛繁殖性能的影响

国内外的大量研究表明,向反刍动物日粮中添加脂肪是提高日粮能量浓度的重要途径.脂肪酸钙是反刍动物的优良能量来源,特别是对常处于能量负平衡的高产奶牛,不仅可有效地提高能量进食水平、泌乳量、乳脂率,还可改善母牛体况、提高繁殖率.     

水牛早孕诊断方法比较研究

本试验的目的是通过比较几种不同的妊娠诊断方法,建立一套简便而准确的水牛早孕诊断方法。选择体况相似的8头中国沼泽型奶水牛为研究对象,通过视诊法连续观测8头母水牛配种后15个时间点眼睛形态学特征的变化;采用ELISA法检测8头母水牛人工授精后8个时间点晨血的血清中孕酮、雌二醇水平;采用牛早孕试纸检测卡检测尾根血清中的早期妊娠相关糖蛋白,以上早孕检测结果均与B超孕检结果进行对比分析。结果发现：配种后前28d观测水牛的眼部未见异常形态;怀孕母牛的孕酮水平均为5.76ng/mL,自16d开始保持在4.9～8.43ng/mL,至24d有小幅度升高,而未怀孕母牛的孕酮水平则表现下降趋势;配种后28d时采用牛早孕试纸检测卡检测发现有4头水牛怀孕,与B超孕检结果相一致。可以得出,配种后前28d形态学观察法不适用于水牛早期的妊娠诊断;孕牛与未孕母牛的孕酮激素水平变化规律存在差异,可为今后建立水牛早孕诊断方法提供技术支撑;牛早孕试纸检测卡在28d后获得较高的准确率,可应用于水牛早期妊娠诊断。该试验的开展可为今后水牛早期妊娠诊断研究提供参考,同时对促进水牛产业的健康发展具有重要的意义。