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【目的】快速骨骼肌肌钙蛋白T(fast skeletal troponin T3,TNNT3)作为肌钙蛋白(troponin, Tn)家族成员,调节横纹肌收缩、参与骨骼肌的生长发育并影响家畜肉质性状。通过获得山羊TNNT3基因的可变剪切体,分析山羊TNNT3基因可变剪切的表达模式及其在肌细胞分化中的作用,深入解析TNNT3基因在山羊骨骼肌生长发育过程中的作用机制。【方法】基于NCBI已公布山羊TNNT3基因(NM_001314210.1)和牛TNNT3基因(XM_010821200)mRNA序列,使用软件Primer Premier 6.0设计引物,以简州大耳羊胚胎期和出生后7个阶段骨骼肌为试验材料,克隆测序获得山羊TNNT3基因的CDS区可变剪切体,利用软件ORF Finder、EditSeq、DNAMAN、ClustalW和MEGA_X_10.1.8等对序列进行生物信息学分析;进一步设计实时荧光定量(real-time PCR,RT-qPCR)及半定量引物,研究TNNT3基因剪切体在7个不同组织(背最长肌(longissimus dorsi muscle,LD)、半膜肌(semimembranosus muscle,SM)、心、肝、脾、肺、肾)和7个发育阶段(胚胎期E75、E90、E105和出生后B3、B45、B150、B300)肌肉组织(背最长肌和半膜肌)中表达模式;此外,对转录本TNNT3_3进行体外编码能力检测确定其具有编码蛋白的能力,并在山羊骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,MuSCs)中过表达,观察细胞形态变化以及检测标志基因的表达变化,研究其对山羊MuSCs分化的作用。【结果】①TNNT3(NM_001314210.1)CDS区全序列主要含有18个外显子,其中外显子16/17相互排斥,转录后单一表达。克隆发现山羊TNNT3基因 5个新转录本(TNNT3_1—5),其外显子数分别是15、15、20、16、14。②生物信息学分析结果显示山羊TNNT3基因核苷酸序列和氨基酸序列与绵羊、牛、猪等哺乳动物具有很高的一致性,而与鱼类和爬行类动物的一致性较低,说明TNNT3基因序列在哺乳动物高度保守。③TNNT3 mRNA在背最长肌、半膜肌、心、肝、脾、肺、肾7个组织中都有表达,其中在骨骼肌中高度富集(P < 0.01),心脏及肺次之,其余组织中较低;TNNT3 mRNA在背最长肌和半膜肌中的表达始终处于一个动态变化中,胚胎期TNNT3在半膜肌的表达量高于背最长肌(P<0.05);出生后则背最长肌中高于半膜肌(P<0.05)。④山羊TNNT3基因转录本TNNT3_3重复出现保守的外显子9—11(138bp),体外翻译实验显示其可编码蛋白且蛋白大小与预期基本相符(37 kD);相较于对照组,在山羊MuSCs中过表达该转录本使肌分化标志基因Myomaker、MyoG和MyH4 mRNA极显著升高(P < 0.01)。【结论】获得了山羊TNNT3基因具有完整CDS区5个新可变剪切体,TNNT3主要在肌肉组织(背最长肌和半膜肌)中高表达,在哺乳动物中高度保守且促进成肌分化。初步表明TNNT3基因在动物肌肉生长发育中具有重要的生物学功能。 相似文献
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多数杂草在田间呈局部分布,其滋生范围可在数年内基本保持不变,这就为田间杂草的选择性防治提供了可能,而选择性防治的关键技术是田间杂草的自动、有效检测。英国科学家对这一技术进行了探索,调查了多种杂草在禾谷类作物田间的分布;利用植物的形态特征和植物叶片的反光指数特征来区别、辨识杂草及定位其发生范围;采用装载有杂草辨识系统的喷雾机实施田间杂草的选择性防治;并结合田间绘图法提供的信息使杂草辨识系统更加有效和可靠.虽然这一技术尚有待完善,但杂草自动检测与选择性防治在实践上是完全可行的. 相似文献
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以邻苯二甲醛(OPA)与9-芴基羰酰氯(FMOC-Cl)作衍生剂,正缬氨酸为内标利用二极管阵列(DAD)可变波长检测程序,采用柱前衍生反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定5个桑叶品种的氨基酸含量。结果表明,各种氨基酸的保留时间(Rt)、相对峰面积(Ax/AI)的RSD均较满意,回收率为93.21%~114.24%;5种桑叶品种中含有大量的氨基酸,含量较高的是异亮氨酸(Ile)、谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、亮氨酸(Leu)和丙氨酸(Ala),占总含量的60%以上。5种桑叶品种的氨基酸含量从大到小为:南2、粤诱36、粤诱18、粤诱32、粤诱87。该方法适合桑叶种氨基酸含量的测定。 相似文献
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提出了一种新颖的基于OVSF码的超宽带通信系统混合多址接入方案OVSF-TH,设计了相应的接收机相关掩模.该方案采用正交可变扩频因子(OVSF)与跳时相结合,使系统支持可变速率要求.理论分析了其抗加性高斯白噪声性能以及抗多用户干扰能力,并进行了仿真实验.结果表明,其抗用户干扰性能优于2PPM-TH与DS-UWB. 相似文献
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α粒子模型下的π^±—^13C弹性散射 总被引:3,自引:3,他引:0
应用Glauber理论,假定13C核由3α核心和1价中子组成。计算了π(±)──(13)C在Tπ=162MeV的弹性散射微分截面。计算结果与实验值符合较好,说明α粒子模型是一很好的近似,同时指出,核心对截面的影响很重要。 相似文献
58.
59.
给定容差法是相对于可变容差法提出的。用给定容差法求解有约束的非线性规划问题,计算时间减少到可变容差法的1/5~1/4。利用给定容差法己在APPLE-Ⅱ微型计算机上求解过20个独立变量、40个约束方程的非线性规划问题。此法可在微型机上推广应用。 相似文献
60.
旨在研究WNT4的一个可变剪接体(WNT4-β)对山羊卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取4~6月龄健康母羊20只,采集双侧卵巢,体外分离卵泡颗粒细胞进行培养。通过免疫荧光染色技术确定WNT4-β的表达位置;在山羊颗粒细胞中过表达或干扰WNT4-β后,利用RT-qPCR、Western blot检测WNT4-β和WNT信号通路中关键标记因子ROA1、RHOA及颗粒细胞增殖标记基因cyclin-D2、CDK4的表达变化;CCK-8技术检测颗粒细胞增殖情况;并通过ELISA分析颗粒细胞中生殖激素水平的变化。免疫荧光染色结果显示,WNT4-β只在山羊卵泡颗粒细胞中表达,在卵母细胞不表达;过表达WNT4-β后,WNT4-β和颗粒细胞增殖因子cyclin-D2、CDK4的mRNA相对表达量极显著增加(P<0.01),蛋白表达水平显著增加(P<0.05);WNT信号通路标记因子ROA1、RHOA mRNA表达水平显著增加(P<0.05),β-catenin蛋白表达水平显著增加(P<0.05);干扰WNT4-β后,WNT4-β、cyclin-D2、CDK4、ROA1和RHOA 的mRNA表达显著降低(P<0.05),WNT4-β、cyclin-D2、CDK4及β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.05)。CCK-8结果显示,过表达WNT4-β促进颗粒细胞增殖(P<0.05);ELISA结果显示,过表达WNT4-β后,颗粒细胞中雌二醇(estradiol,E2)水平显著增加(P<0.05),孕酮(progesterone,P4)水平升高但不显著(P>0.05);干扰WNT4-β后则结果相反,颗粒细胞增殖受到抑制(P<0.05),E2和P4的水平显著降低(P<0.05)。综上所述,WNT4可变剪接体WNT4-β通过调控WNT信号通路促进山羊卵泡颗粒细胞增殖及类固醇激素分泌,本研究为解析WNT4调控山羊颗粒细胞增殖的潜在分子机制提供理论基础。 相似文献