微卫星标记BM3413和OB_2在5个绵羊群体中多态性的研究

选萨福克羊、德国美利奴羊、特克塞尔羊、乌珠穆沁羊以及右玉本地绵羊5个绵羊群体共250只,通过耳组织提取基因组DNA,用2对微卫星引物进行PCR扩增,通过电泳分型、凝胶成像系统分析各位点等位基因及全部个体的标记基因型,计算基因频率、多态信息含量(PIC)和杂合度等,从分子水平上分析5个绵羊品种的遗传多态性.结果表明:BM3413和OB2这2个位点的等位基因数分别为7和8,多态信息含量PIC＞0.5,杂合度为0.827 1～0.846 7,均属于高度多态性位点,用于作为与生产性能相关的遗传标记是较理想的.     

SLC11A1基因在山羊中的染色体定位和遗传变异研究

溶质载体家族11成员A1(SLC11A1)基因与抗传染病有关。试验对6个品种427只山羊进行染色体定位、相应的功能结构域和3′非翻译区(3′-UTR)微卫星的遗传变异研究。通过双色荧光原位杂交,将SLC11A1定位于山羊2号染色体上;同时运用单链构型多态性筛查了SLC11A1外显子2、10和15的多态性。结果发现,在各山羊品种中,SH3结合基序、蛋白激酶C磷酸化位点或2个N-连接糖基化位点没有变异。外显子15的变异是由于存在两个微卫星多态性。山羊3′-UTR的上游GT重复(GTn)的基因分型结果显示有8个等位基因(GT11、GT12、GT14-GT19),但缺失GT13(牛中存在)。大多数山羊都有等位基因GT16,但没有等位基因是一个品种独有的。遗传分化系数为0.084。微卫星在山羊的遗传连锁分析中是DNA的信息标记。     

ABA、H_2O_2与NO供体硝普钠对基因表达以及枣果发育的影响

枣在成熟期间遇到连阴雨天气会发生严重的裂果现象,这种基于基因表达的生理病害的发生与非生物或生物胁迫有关。以吕梁当地木枣为试材,在木枣成熟期,采用改良CTAB法检测组织中DNA纯度及含量的变化,研究ABA、H2O2与NO供体硝普钠(SNP)在枣果发育中对基因表达的影响。结果表明:ABA、H2O2与NO供体硝普纳(SNP)对枣果发育中DNA纯度及含量的影响不一,差异较为明显。其中不同浓度的ABA处理枣果组织中DNA的OD260/OD280比值基本不在1.700~1.900范围内,DNA纯度差异明显。但样品DNA含量较高,其值在1 200ng/μL左右;H2O2和SNP处理样品DNA的OD260/OD280比值基本上在1.700~1.900之间,DNA纯度较高。样品DNA含量基本上小于或在1 000ng/μL左右。外源ABA较为明显地干扰了基因表达,诱导了新蛋白质、RNA和酚类物质等的生物合成,有促进木枣果发育的趋势;而H2O2和NO供体硝普钠(SNP)对基因表达或枣果发育的影响不十分明显。     

外源NO供体SNP对盐胁迫下苜蓿叶片POD活性的影响

试验通过对盐胁迫下苜蓿幼苗叶片分别喷施不同浓度的一氧化氮(NO)供体SNP,研究了SNP对100 mmol/L Na Cl胁迫下苜蓿幼苗叶片POD活性的影响。结果表明,0.5 mmol/L和1.0 mmol/L SNP能提高在长时间100 mmol/L Na Cl胁迫下苜蓿幼苗叶片POD活性,其通过减轻细胞膜脂过氧化程度,维持质膜结构稳定性,从而减小损伤程度,对损伤具有较好的缓解作用;0.1 mmol/L和0.2 mmol/L的SNP对POD活性影响不明显,无明显缓解效果。说明SNP对POD活性的调节和植物的保护作用与SNP自身浓度相关,同时,SNP不仅可以通过调节POD活性增强苜蓿抗氧化能力,而且能通过调节其他保护酶类起到对苜蓿的保护作用,缓解盐胁迫造成的伤害。     

吉林省大豆品种（系）遗传多样性分析

为明确吉林省2003—2022年育成的大豆品种（系）的遗传距离和亲缘关系,选取2003—2022年育成的299份大豆品种（系）为试验材料,利用覆盖大豆基因组的SNP标记对其进行遗传多样性和群体结构分析。结果表明：1）3 240个SNP标记在参试材料中共检测出A/A、A/G、A/T等16种基因型,分子标记多态信息量（PIC）范围为0.009 9~0.556 1,平均值0.318 4;使用Powermarker vision 3.25软件,得到样本群体等位基因频率为0.688 3、平均PIC为0.318 5。2）参试材料间遗传相似系数在44.86%~95.46%,平均为63.40%;其中,遗传相似系数在60%~70%的材料最多,样本数为170份,占参试材料的56.86%。3）根据遗传距离将参试材料划分为4个类群,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ类群分别含有8、3、115、173份品种（系）;来源于同一育种单位的品种（系）一般划分到同一类群。4）进一步利用STRUCTURE进行遗传结构预测,结果显示K=4,表明参试的299份品种（系）可被划分成4组独立的遗传结构类群;第1、2、3、4遗传结构类群分别含有24、18、105、152份品种（系）,第1遗传结构类群含祖先遗传物质最多,第2、3、4遗传结构类群中外引遗传物质占比逐渐增多,第4遗传结构类群中外引遗传物质占比为46.80%。综上,参试大豆品种群体总的遗传背景相对狭窄,但随着外引遗传物质的引入,第4遗传结构类群（152份）的遗传多样性显著高于总体水平。     

蒙古牛肌肉生长抑制素基因编码序列检测分析

肌肉生长抑制素(myostatin)基因是影响骨骼肌生长和发育重要的候选基因。实验以2头双肌皮埃蒙特牛和30头蒙古牛基因组DNA为模板，针对牛myostatin基因设计了3对引物并扩增了3个外显子和部分5’调控区。对PCR扩增片段克隆、测序结果显示，2头皮埃蒙特牛均在编码序列938处发生G到A突变，使编码氨基酸由半胱氨酸变为酪氨酸，符合前人检测结果。首次在蒙古牛中发现在6个不同位点存在单核苷酸突变，其中3个无义突变，3个突变引起了编码氨基酸变化，反映了牛myostatin基因在进化过程中具有较高的突变性。     

环介导等温扩增技术检测柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶N377D突变

面对日益严重的磺胺类药物的耐药性,传统的耐药性检测方法已不能满足临床需求,因此开发一种磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫检测方法十分必要。本试验建立一种使用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)来准确区分柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶(dihydropteroate synthase, DHPS)基因中的点突变(A1129G)的方法。对LAMP反应进行优化,发现在68℃,60 min时,反应的灵敏度和特异性均达到最佳。此时,该方法的最低检测限40 fg,并对5种病原体显示出特异性。在检测的所有46个现场样品中,有43个为阳性结果。     

赤水乌骨鸡TYR基因多态性及生物信息学分析

[目的]找出赤水乌骨鸡和泰和乌鸡TYR基因外显子的多态位点(SNP),为后期利用分子遗传学技术选育乌度更深的赤水乌骨鸡提供参考依据.[方法]采用DNA混池结合PCR产物直接测序法,分析赤水乌骨鸡和泰和乌鸡TYR基因外显子的SNP位点,并对筛选出的SNP位点进行生物信息学分析.[结果]在泰和乌鸡中发现4个SNPs位点,分别为Exonl-C829T、Exon1-C921T、Intron 1-A 1018G和Intron2-T79A,其中,Exon1-C829T和Exon1-C921T为同义突变;在赤水乌骨鸡中发现5个SNPs位点,分别为Intron1-G156A、Intron2-T7C、Intron4-G201A、Intron4-C221T和Exon5-A205G(非编码区).利用在线生物信息学分析软件对TYR基因突变前后编码区序列的mRNA二级结构进行预测分析,结果发现赤水乌骨鸡的mRNA二级结构未发生变化,而泰和乌鸡Exon1-C829T和Exon1-C921T的突变均引起mRNA二级结构改变,使得TYR基因mRNA二级结构最小自由能减小,即二级结构稳定性增加.赤水乌骨鸡TYR蛋白二级结构由α-螺旋、无规则卷曲、β-转角及扩展链组成,分别占26.65%、55.31%、3.41%和14.63%.[结论]Exon1-C921T突变可能会对鸡的肉色产生影响,故推测Exon1-C921T是影响赤水乌骨鸡和泰和乌鸡乌度差异的原因之一.     

紫花苜蓿PGIP同源基因克隆与序列核苷酸多态性分析

多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是植物重要的防卫蛋白之一,了解PGIP基因的核苷酸序列是对其进行分子遗传学与分子生物学研究的前提与基础。本研究采用同源克隆法,从16个紫花苜蓿(Medicago sativa)品种的集群DNA中克隆了7个苜蓿PGIP基因的部分基因组编码序列,分别对应于蒺藜苜蓿(M. truncatula)7个不同的PGIP基因,并命名为MsPGIP5、MsPGIP6、MsPGIP7、MsPGIP8、MsPGIP9、MsPGIP10和MsPGIP11。其中,MsPGIP5、MsPGIP6、MsPGIP8、MsPGIP9和MsPGIP11的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)位点间的平均距离分别为20、74、34、423和21 bp,差异较大。对MsPGIP5、MsPGIP6、MsPGIP8和MsPGIP11进行荧光标记PCR单链构象多态性(FPCR-SSCP)分析,结果表明,其等位基因数目与PCR片段长度的比值分别为20、56、22和19 bp,变化趋势与这4个基因SNP位点间的平均距离基本一致。比较而言,在发现的7个苜蓿PGIP基因中,MsPGIP9序列高度保守,MsPGIP5和MsPGIP11的变异较大,而MsPGIP6与MsPGIP8的变异中等。