猪传染性胃肠炎病毒南京株纤突S蛋白基因的克隆与序列分析

参考 Genbank收录的 TGEV- Miller株的基因序列 ,自行设计合成 1对引物 (TGEVP5 /P6 ) ,对不同代次的 TGEV疫苗弱毒 STC3及种毒 、种毒 进行了 RT- PCR扩增 ,产物经琼脂糖凝胶电泳分析 ,均出现 1条大约 12 6 2 bp的目的条带 ,经 Eco R 酶切 ,都产生了 871bp和391bp左右的两个片段 ,与预期大小相符。将种毒 RT- PCR扩增目的条带回收纯化后克隆入PMD18- T载体中 ,转化宿主菌 DH5 α,挑选阳性克隆 (命名为 PTs) ,提取重组质粒 ,用 Hpa 、Eco R 对重组质粒进行酶切鉴定以及 PCR扩增 ,然后进行序列测定 ,并进行了序列分析 ,证实与国外标准毒株 Miller、Fs772 / 70、Purdue、TO14等有较高的同源性     

鹅肥肝形成的分子机理研究进展

鹅肥肝同鲟鱼翅酱、黑菌(块菰)被西方人誉为世界三大美食珍品。本文综述了近来年鹅肥肝形成的生化机理。不同鹅种产肝性能差异的原因，可能在生化及分子标记方面的研究进展。     

禽多杀性巴氏杆菌C48-1成熟外膜蛋白H基因原核表达最适条件的探索

应用PCR扩增出禽多杀性巴氏杆菌C州成熟外膜蛋白H基因(ompm H)，将ompm H片段按正确的阅读框定向插入原核表达载体pGEX-6P-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游，获得了重组表达质粒pGEX-ompm H。然后将重组质粒转化大肠埃希氏菌BL21(DE3)，当转化菌的D600nm值达到0．6～0．8时，对异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)的诱导浓度、诱导时间和诱导温度等条件进行了试验，根据聚丙烯酰胺凝胶电泳判定融合蛋白GST-ompm H表达的最适条件。结果，当细菌的D600nm值为0．6～0．8时，IPTG最佳诱导浓度为0．8mmol／L，最佳诱导时间为4h，最适诱导温度为25℃。并用免疫印迹法对表达产物进行检测。结果显示表达的融合蛋白GST-ompm H能与C48-1外膜蛋白免疫血清发生特异性反应，证明pGEX-6p-1载体表达的融合蛋白保留了天然蛋白的抗原性。     

2004年8月分子植物育种理论与实践讲习班（第四期）

为了促进现代分子生物学技术在遗传与育种学、进化与分类学、群体与数量遗传学、微生物学、海洋生物及热带生物资源研究中的应用 ,海南省生物工程协会与分子植物育种编辑部拟定于2 0 0 3年 8月 2 - 10日在海南省三亚市海南省农作物分子育种重点实验室举行分子植物育种理论与实践讲习班。本期讲习班由方宣钧博士、吴为人博士主讲并邀请国内外知名专家作学术报告。研讨班结束后将给学员发结业证书。本期讲习班的主要内容 :植物遗传群体和突变库的建立和应用 ,DNA分子标记原理与应用 ,分子遗传图谱的构建 ,质量性状基因的定位 ,数量性状基因…     

苹果退绿叶斑病毒组织印迹的免疫法检测与定位

用组织培养技术将富士苹果茎尖外植体建立在ＭＳ培养基中,形成试管苗。取４—６周龄的茎与愈伤组织,徒手切取约１ｍｍ厚的横切面,印迹在硝化纤维膜上。印迹组织经封闭后,与ＣＬＳＶ碱性磷酸酶标抗体反应。对反应结果进行显色。感染ＣＬＳＶ的印迹组织呈紫色反应,正常组织无显色反应。结果表明,该方法十分容易检测印迹组织中的ＣＬＳＶ。带毒愈伤组织较茎的显色反应敏感,显色反应时间仅为茎的一半（１５ｍｉｎ）。ＣＬＳＶ在愈伤组织中有两种分布情况：一是所有组织均有显色反应;二是呈不均匀分布。ＣＬＳＶ在茎组织中有三种分布情况：第一,除髓部外,表皮、皮层及维管系统中均有分布;第二,不均匀分布,ＣＬＳＶ集中分布于表度组织中,在皮层及韧皮部仅有少量分布;第三,“嵌合”分布,即同一种组织中部分组织带毒,部分为正常组织。     

"五指山猪实验用近交系培育及分子遗传学基础研究"成果通过鉴定

由中国农业科学院畜牧研究所主持完成的“五指山猪实验用近交系培育及分子遗传学基础研究”于2005年3月11日顺利通过由农业部组织的成果鉴定。五指山猪是我国珍稀品种，在解剖学、生理学、疾病发生机理等方面与人有较大的相似性，作为实验动物在科学研究领域具有较大的应用价值。通过五指山猪近交系矮小机理的系统研究，为五指山猪实验动物化培育、实现小型猪基因改造和开发利用提供了重要的理论依据和技术方法。     

黄瓜全雌性基因连锁的AFLP和SCAR分子标记

 本研究以全雌品种‘戴多星’自交系和弱雌品种‘北京截头’自交系为双亲杂交获得F₁ ,然后得到F₂ 性型分离群体, 利用分离群体分组分析法(Bulked Segregant Analysis, BSA) 构建全雌和弱雌两个基因池, 筛选了64对AFLP选择性引物EcoR I-NN +Mse I-NNN组合, 发现EcoR I-TG +Mse I-CAC引物组合在全雌基因池中扩增出一条分子量为234 bp的特异带。经F₂ 代单株验证, 该特异条带能在全雌单株中稳定出现。以MAP MAKER (Version 310) 软件分析, 该标记与全雌性位点的连锁距离在617 cM。命名该连锁标记为TG/CAC₂₃₄。将该特异条带回收、克隆、测序, 设计特异SCAR引物, 再对F₂ 代单株基因组DNA进行扩增, 仅在全雌单株中扩增出1条分子量为166 bp 的特异带, 表明已成功地将与黄瓜全雌性连锁的AFLP标记转化为操作简便、表现稳定的SCAR标记, 该标记命名为SA₁₆₆。     

柑橘抗CTV转基因与分子标记研究进展

综述了柑橘抗衰退病基因工程中两方面的研究进展。介绍多种来源于柑橘衰退病毒(Citrustriztezavirus,CTV)核酸序列的转基因柑橘和抗性种质资源中抗性基因的分子标记,以及所涉及的方法和遇到的问题。目前研究表明,虽然已成功实现对病毒衣壳蛋白(CP)等基因的转化和Ctv等抗性基因的标记,但尚未获得对CTV有高度抗性的转基因柑橘,而抗性基因亦不能实现定点克隆和转化。因此上述两方面研究还有待深入。     

培育种猪新探索

湖北良友畜禽有限公司长流分公司是以生产英系大白种猪而闻名全国,聘请华中农业大学熊远著院士、邓昌彦教授为技术指导,以数量遗传学和分子理论为依据,采取了常年大群测定和分子测定,测定结果居国内领先地位,(测定数据原已作过报道)。为了充分发挥种猪优势,保持和提高种猪质量,     

分子育种成果之我国首例体细胞克隆猪

2005年8月5日中国农业太学成功获得我国第一头体细胞克隆猪,填补了我国在这一领域的空白,使我国成为世界上第七个拥有自主克隆猪能力的国家.