人参曲霉属真菌发酵液的药效部位研究

[目的]研究人参曲霉属内生真菌发酵液药用部位及抑菌效果。[方法]考察其稳定性,以及分离发酵液得到的菌体和菌液两部分的三种极性部位的抑菌能力的考察,确定抑菌活性物质所在极性部位。[结果]在紫外、酸碱、温度处理情况下,曲霉属发酵液具有较好的稳定性,其中菌液的乙酸乙酯部位的抑菌能力最强,抑菌率为82.6％;菌体正丁醇部位抑菌能力最强,达到71.6％。[结论]人参曲霉属真菌发酵液抑菌能力较强,可以进一步研究菌体、菌液的抑菌活性物质的化学结构,更全面地了发酵液的抗菌机制,为后期开发利用提供理论依据。     

西藏植物内生菌球壳孢目菌株生物学特性研究

【目的】本论文探讨了西藏猪毛蒿和牛蒡植物中内生真菌的生物学特性。【方法】利用培养基培养法和载片培养法,观察从植物不同部位所分离到的菌株菌落形态及孢子形态。【结果】结果显示从西藏猪毛蒿根部分离到球壳孢目茎点霉属真菌一株,从牛蒡茎部分离到球壳孢目叶点霉属真菌一株。     

深色有隔内生真菌S12菌株遗传转化体系的建立及GFP标记菌株的获得

【目的】建立深色有隔内生真菌（dark septate endophyte,DSE）的遗传转化体系,获得绿色荧光蛋白(GFP)标记的DSE转化子,为研究DSE在植物根系的侵染定殖行为和侵染定殖规律奠定基础。【方法】以前期从健康枸杞根系分离的1株DSE菌株枝状枝孢菌（Cladosporium cladosporioides）S12菌株为供试材料,确定潮霉素B对其的最低抑制质量浓度,然后研究菌龄（13,15,17,19和21 h）、酶解时间（1.0,1.5,2.0,2.5,3.0和3.5 h）、崩溃酶质量浓度（10,15,20,25,30和35 mg/mL）和渗透压稳定剂种类（NaCl、KCl、CaCl2和MgSO4）对S12菌株原生质体制备的影响。采用聚乙二醇（PEG）介导原生质体转化法将PDL2质粒（含hph和gfp基因）转入S12菌株,对所获转化子进行表型、GFP荧光、PCR及拮抗活性（以尖孢镰刀菌枸杞专化型Fusarium oxysporum f. sp.Lycium barbarum LR-1菌株为靶标菌）检测,筛选与野生型S12菌株无明显差异且带有GFP标记的转化子。【结果】S12菌株在YPD液体培养基中培养17 h,以0.7 mol/L NaCl为稳渗剂,用30 mg/mL的崩溃酶酶解2.5 h,原生质体制备数量最多,为4.53×10⁶ mL^-1。通过PEG介导,将PDL2质粒（含hph和gfp基因）转入S12菌株,可得47株转化子,转化效率2.35株/μg,从中筛选出10株生长速度和产孢量与野生型S12菌株无明显差异的转化子。荧光观察、PCR和拮抗活性检测结果表明,外源基因已成功整合到S12菌株中,成功建立了S12菌株的遗传转化体系,并获得了GFP标记菌株,有6株转化子对LR-1菌株的抑菌率与野生型S12菌株无明显差异。【结论】成功建立了遗传稳定性良好的S12菌株遗传转化体系,筛选出了6株抑菌效果与野生型菌株相当的转化子。     

雷竹内生真菌分离及其功能性菌株筛选与鉴定

[目的]从雷竹根部分离其内生真菌并对其纤维素降解、植物病原菌抑制、铅的耐受能力等功能进行初步探究.[方法]采用组织块培养法分离内生真菌,刚果红平板培养基筛选纤维素降解菌,平板对峙法筛选植物病原拮抗菌.[结果]从雷竹根部共分离到35株内生真菌,其中具有纤维素降解功能的有7株;对油茶炭疽病原有抑制作用的有5株,对毛竹枯梢病原有抑制作用的有2株,对猕猴桃果腐病原有抑制作用的有2株;对铅具有强耐受性的有11株.利用形态特征和分子生物学方法对两株具有良好潜在应用价值的内生真菌LZ031、LZ033进行鉴定,分别为腐皮镰刀菌(Fusarium solani)和芦竹节菱孢(Arthrinium arundinis).[结论]雷竹根部具有丰富的内生真菌资源,且内生真菌功能多样,具有潜在的应用价值.     

2种杨树可培养内生细菌的多样性和季节动态变化

为了解三倍体毛白杨和健杨94树干皮层组织中内生细菌的群落多样性和季节动态变化,利用传统的细菌分离培养,结合16S rDNA序列分析等方法对其进行分析.从2种杨树干部皮层中共计分离纯化细菌菌株5 32株,分属于26属47种,2种杨树内生细菌组成存在较大差异.其中,从三倍体毛白杨中分离得到1 8属30个种,以根瘤菌属和芽孢杆菌属为优势菌群;健杨94中分离得到16属22个种,以根瘤菌属、微杆菌属为优势菌群.杨树干部皮层植物内生细菌的多样性丰富.2种杨树内生细菌数量季节变化规律总体表现为夏秋2季均高于冬春2季.2种杨树在4个季节的优势菌群各不相同,随季节变化而变化.     

辣椒内生菌的分离及拮抗菌的筛选与鉴定

用稀释分离法从健康辣椒植株的茎、叶、果肉中共分离得到植物内生菌88株,其中细菌有65株,真菌有21株,放线菌2株。用平板对峙法从中筛选出内生菌003和X两株对辣椒疫霉病菌、辣椒绿霉病菌、辣椒炭疽病菌3种病原菌具有明显拮抗作用的菌株,得出抑制率为34.80%～48.0%。根据菌株形态、生理生化特性对菌株003和菌株X进行了初步鉴定,结果显示菌株003和菌株X都为芽孢杆菌属(Bacillus)。     

甘蔗茎部内生细菌的分离及分子鉴定

采用稀释涂板法对广东省广州市白云区国家农业科技园区内的甘蔗茎部内生菌进行分离,同时进行16S rDNA扩增检测及同源性分析。结果表明：共分离获得20株不同的内生菌,所获得的内生菌分属于6个类群（Actinobacteria、Alphaproteobacteria、Gammaproteobacteria、Betaproteobacteria、Firmicutes、Acidobacteriales）、16个属（Staphyococcus,Leifsonia、Kineococcus、Frondihabitans、Curtobacterium、Microbacterium、Amnibacterium、Methylobacterium、Rhizobium、Terriglobus、Sphingomonas、Acidisoma、Stenotrophomonas、Enterobacter、Burholderia、Variovorax）,其中,Actinobacteria和Alphaproteobacteria类群占总数的65％。除SC-4、SC-11与其同源细菌相似性分别为97％、96％外,其余分离菌与同源菌相似性均在98％以上。本研究结果在一定程度上反映了甘蔗茎部内生菌具有较高的多样性。     

鹿蹄草内生真菌的分离鉴定及其对鹿蹄草的生理效应

采用表面消毒法及选择培养基分离鹿蹄草根部内生真菌,通过初步回接试验筛选高效菌株,采用形态学及18SrDNA序列分析方法对高效菌株进行鉴定,并通过二次回接试验测定高效菌株对宿主的生理效应。结果表明,从鹿蹄草中分离到7株内生真菌,初步回接试验表明其对鹿蹄草的生长均有促进作用;筛选到一株高效菌株R25,鉴定结果表明该菌株为丛赤壳属(Nectria)真菌;该菌株能显著提高宿主根系活力,以及叶片中叶绿素a、可溶性糖和超氧化物歧化酶活性。筛选的高效菌株能显著提高鹿蹄草的生长代谢活性,在鹿蹄草的引种驯化过程中具有重要的应用价值。     

植物重金属抗性内生细菌作用机制研究进展

植物重金属抗性内生菌的研究始于20世纪末,尽管研究的历史不长,但有关重金属抗性内生细菌的研究取得了很大的进展。综述了国内外植物重金属抗性内生细菌的种属、来源、直接或间接抗性机制以及分子作用机制等研究成果与现状,并展望了本领域的发展前景和研究方向。