Factors involved in Agrobacterium tumefaciens-mediated gene transfer into Pinus nigra Arn. ssp. salzmannii (Dunal) Franco

Cotyledons from dissected sterile embryos of salgareño pine (Pinus nigra Arn. ssp. salzmannii (Dunal) Franco) were inoculated with different disarmed Agrobacterium tumefaciens strains harbouring the binary vector p35SGUSint. The transient expression of a β-glucuronidase gene (uidA) was studied, using a histochemical staining procedure. Nineteen days after inoculation, the activity of β-glucuronidase was detected in epidermal and subepidermal layers of cotyledonary explants. The EHA105 strain harbouring a disarmed agropine-type Ti-plasmid (pTiBO542) was the most effective for gene transfer of the uidA gene. The effects of exudates and extracts from 0-day-old embryos on induction of vir gene expression in A. tumefaciens were also examined. The results of this study showed that salgarño pine embryo exudates contain a substance(s) that induce vir gene expression, in similar way to that observed with 100 μM acetosyringone (AS).All these findings suggest that T-DNA processing and transfer might take place when Agrobacterium infects suitable tissues of salgareño pine.     

H9N2亚型禽流感病毒NS1基因真核表达载体的构建及其在293细胞瞬时表达

在293细胞中瞬时表达A/Chicken/Henan/1001/2010（H9N2）NS1基因蛋白,并对表达蛋白活性进行测定。试验利用PCR技术从NS1-T载体质粒上扩增NS1基因,将其克隆至pCAGGS载体,构建重组质粒NS1-pCAGGS;经酶切和测序鉴定正确后,重组质粒NS1-pCAGGS与脂质体按照一定比例混合后转染293细胞,用间接免疫荧光方法对瞬时表达细胞进行荧光信号反应。结果显示,禽流感NS1基因可以很好地在293细胞中瞬时表达,具有良好的反应原性。     

短时极端高温对亚洲玉米螟卵、初孵幼虫和成虫的影响

为探明短时极端高温对亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)的影响,采用耐热能力测定方法,研究了亚洲玉米螟经6 h高温处理后的半数致死温度(LT50)、存活率以及不同高温下的半数致死时间(Lt50)。结果表明,经6 h高温处理后,亚洲玉米螟卵、初孵幼虫和成虫的LT50分别为40.24~40.44、38.59和42.84~44.54℃;当卵、初孵幼虫、1日龄和3日龄成虫分别在37、35、41和37℃时,其存活率与对照均无显著差异,而分别在39、37、43和39℃时,其存活率显著低于对照,卵、初孵幼虫、1日龄和3日龄成虫的短时高温阈值分别为37~39、35~37、41~43和37~39℃;当温度高于高温阈值时,卵、初孵幼虫和成虫的Lt50分别为0.38~6.31、0.22~8.35和3.80~24.15h,且雄成虫的Lt50小于雌成虫。研究表明,短时极端高温对亚洲玉米螟的存活率具有显著影响。     

基于CRISPR基因编辑系统抗番木瓜曲叶病毒的植物转化载体的构建

双生科病毒具有毁灭性强、寄主多样、分布地域广等特点,一直是困扰世界农作物生产的一大难题。用物理和化学方法防治该类病毒不仅花费成本高,见效低,而且还可能对环境造成负面影响,因此用分子手段培育抗病品种才是有效途径之一。本研究结合最新的CRISPR/Cas9基因编辑技术和Golden Gate克隆技术,设计并构建了抗番木瓜曲叶病毒基因编辑串联多切点表达载体。表达载体转入农杆菌AGL1后经注射本氏烟草叶片进行瞬时表达,48 h后通过激光共聚焦显微镜能观察到有绿色荧光的出现,定位的位置为细胞核与细胞质膜。本研究为番木瓜抗曲叶病毒研究提供理论基础。     

Pbf启动子在小麦离体胚乳中的特性分析

为了探明胚乳特异启动子的调控活性，对小麦醇溶蛋白盒结合因子基因（pbf）的启动子序列进行了5´、3´和中间缺失片段-GUS基因嵌合体载体（pbf.a-d）的构建，并在小麦离体胚乳中转化。GUS瞬间表达活性检测和功能缺失试验表明：pbf 的-2510- -1bp全长序列能够在小麦离体胚乳中表现活性，而5´ 端-2510bp- -670bp以及3´端-1288bp- -1bp序列的缺失则使启动子在胚乳中丧失了活性；中间序列-2160bp- -689bp的缺失使GUS的表达强度明显降低。文中对pbf启动子序列中存在的重要基序种类和数量以及基序对启动子表达调控活性的作用也给予了初步分析。本文对小麦胚乳发育状态及GUS瞬间表达体系等对pbf启动子活性检测的影响也作了探讨。     

农杆菌介导的基因瞬时表达技术及其应用

主要介绍了农杆菌介导的基因瞬时表达方法的原理、技术、影响因素及其在外源基因表达分析、启动子分析、基因沉默及防卫反应等方面的应用。     

低温胁迫及恢复对番茄快速叶绿素荧光诱导动力学特征的影响

以番茄品种“中蔬4号”为试材，设置对照（人工气候室，温度变化范围18～28℃，600μmolm−2s−1，光周期12h，CK）和低温（人工气候箱，8℃，200μmolm−2s−1，光周期12h，CL）两个处理，低温处理4d后将番茄幼苗移入对照环境下恢复4d，观测叶片快速叶绿素荧光诱导动力学曲线在低温处理及恢复期的变化，以探讨低温胁迫和随后恢复对番茄叶片光系统II（PSII）反应中心和受体侧的影响。结果表明：低温胁迫降低了番茄叶片PSII光化学效率和光合性能，导致低温光抑制的发生。低温胁迫导致番茄叶片单位面积有活性的反应中心数目（RC/CS）及其开放程度（Ψo）下降，从而降低了叶片单位面积对光能的吸收（ABS/CS）、捕获（TRo/CS）和进行电子传递（ETo/CS）能力，减少了电子传递到电子传递链中超过QA−电子受体的概率（φEo），阻碍了光合电子传递的进行；与此同时，低温首先诱导了PSII可逆失活和热耗散增强以减少对过剩光能的吸收、传递与积累，随后促进了PSII受体侧电子传递体PQ库容量（Sm）增大以防御PSII过量激发压积累。本实验中低温主要抑制了番茄叶片PSII活性，而对PSI影响相对较小。恢复期天线色素对光能的吸收和PSII反应中心对光能的捕获能力较电子传递更易于恢复，并且恢复初期强光反而会加重光抑制程度。     

Transient Response of the Rotor System with Nonlinear Flexible Supports

The effect of the rotor system with nonlinear flexible supports passing through the resonance area is studied,when the system is at the transient process of starting or breaking.The stiffness with hard nonlinear feature can cause the critical speed and the maximum amplitude of the transient processes increase.It is no benefit for the rotor system to pass through the resonance area rapidly.The effect of the transient acceleration on the maximum amplitude of the transient processes has also been researched in the paper.At last the rotor system with slow changing stiffness has been analyzed.     

影响基因枪轰击转化棉花胚性愈伤的因素初探

本研究就基因枪法转化棉花胚性愈伤过程中的影响因素进行了探讨。结果表明,2,4 D在愈伤启动阶段很重要,而在胚性愈伤诱导阶段要尽量少加或不加,IAA的浓度比KT低时,有利于胚性愈伤的产生。胚性愈伤的表观状态、轰击次数和轰击距离是基因枪转化成功的关键因素。通过GUS基因在棉花胚性愈伤中的瞬间表达证明,在轰击前4h,轰击后16h采用0.3mol·L 1的甘露醇做渗透处理,轰击距离9cm,轰击次数2次,效果最好。     

水下爆炸引起的水质点运动效应研究

基于流体动力学理论分析了水下爆炸引起水质点速度与压力的关系式,提出水质点流速由瞬时流与滞后流组成,利用水下爆炸自由场压力实测数据的分析了瞬时流与滞后流的空间和时间分布。瞬时流传播距离远但强度小,滞后流强度高但传播距离小,3倍气泡半径内即降至1%。